巨噬细胞膜仿生纳米铁颗粒制备及多形性胶质母细胞瘤MRI成像的初步实验研究

摘要 目的：探讨巨噬细胞膜仿生的纳米铁颗粒（Fe3O4 NCs@MM）对多形性胶质母细胞瘤MRI成像的研究。方法：制备巨噬细胞膜仿生的纳米铁颗粒Fe₃O₄ NCs@MM,利用动态光散射（Dynamic Light Scattering,DLS）和透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope,TEM）对其水合动力学粒径、表面电势和形态进行表征。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）评价巨噬细胞膜的完整包覆;紫外可见光谱测定巨噬细胞膜仿生的纳米铁颗粒抗蛋白吸附能力。通过MRI成像系统,分析了含不同浓度的Fe元素（0.1-1.6 mM）的Fe₃O₄ NCs@MM在GSH存在或不存在时的T₁弛豫效应。采用细胞增殖-毒性实验（Cell Counting Kit-8,CCK-8）,测定巨噬细胞膜仿生纳米铁颗粒处理肿瘤细胞24 h后的细胞活性。尾静脉注射巨噬细胞膜仿生纳米铁颗粒至原位胶质母细胞瘤模型中,观察成像效果。结果：巨噬细胞膜仿生的纳米铁颗粒Fe₃O₄ NCs@MM的水合动力学粒径和表面电势分别为 286.5±7.6 nm和-20.7±3.5 mV,且在水溶液中分布均匀,具有较好的单分散性。包覆巨噬细胞膜的纳米铁颗粒具备抗蛋白吸附的能力。MRI成像显示,制备的巨噬细胞膜仿生的纳米铁颗粒Fe₃O₄ NCs@MM为GSH响应型MRI对比剂,具有较好的T₁-加权磁共振成像效果,在尾静脉注射巨噬细胞膜的纳米铁颗粒0.5 h后,肿瘤部位的信号可见增强。结论：巨噬细胞膜仿生的纳米铁颗粒Fe₃O₄ NCs@MM可实现多形性胶质母细胞瘤的MRI成像。     

PEG-G5.NH2-FITC-DOTA(Gd)-Monalizumab/IPH4301探针的初步研究

摘要 目的：制备PEG-G5.NH2-FITC-DOTA(Gd)- Monalizumab/IPH4301纳米探针,并研究其与NK-92MI细胞的结合能力、毒性、细胞体外MRI成像能力、促进NK-92MI细胞对MDA-MB-231三阴性乳腺癌细胞的杀伤能力。方法：制备PEG-G5.NH2-FITC-DOTA(Gd)- Monalizumab/IPH4301纳米探针,利用透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope,TEM）进行表征,并使用ImageJ对其粒径进行统计;通过流式细胞术分析纳米材料和NK-92MI细胞的结合能力;应用MRI对纳米探针标记的NK-92MI细胞体外成像并分析其T1加权（T1WI）的信号改变。利用蛋白印迹（Western blot）检测经过与NK-92MI细胞共培养后三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡相关蛋白的表达以及Elisa法检测培养体系内的IFN-γ的表达量。结果：制备的纳米探针颗粒粒径分布均匀,形态近似球形。其与NK-92MI细胞结合的量以及T1信号随着纳米探针浓度增加而逐渐增加。使用Monalizumab和IPH4301两种抗体修饰的纳米探针增强了NK-92MI细胞释放IFN-γ并促进MDA-MB-231乳腺癌细胞的凋亡。结论：PEG-G5.NH2-FITC-DOTA(Gd)-Monalizumab/IPH4301纳米探针在结合NK-92MI细胞后,可以在3.0T磁共振下进行体外成像,并增强了NK-92MI细胞对MDA-MB-231细胞的杀伤能力。