胁迫诱导植物体细胞胚发生中相关基因及蛋白的研究进展

植物体细胞胚发生是一个复杂的发育过程,体细胞胚发生已成为研究植物胚胎发育过程中生理、生化、分子生物学等方面分子机理的模式系统。胁迫被认为是对体细胞胚的诱导有重要作用的因素。植物生长调节物质如2,4-D、ABA等目前认为是与胚性能力获得有关的胁迫物质。在蛋白和转录水平上对基因表达的分析中已鉴定出一些与体细胞胚发生相关的基因和蛋白。该文主要对近年来国内外有关胁迫诱导体细胞胚发生的相关基因及蛋白的研究进展进行综述。     

三聚氰胺胶体金免疫层析试纸条的研制

通过胶体金免疫层析技术建立一种特异、便捷、快速的三聚氰胺抗原检测方法,对奶制品及饲料中的三聚氰胺残留水平监测提供参考。用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金,标记纯化的三聚氰胺单克隆抗体,喷于试纸的金标垫。将MEL-OVA(三聚氰胺和卵清白蛋白的偶练物)和纯化的羊抗鼠IgG分别喷于试纸的T(检测线)处和C(质控线)处,通过挑选试纸条材料和调试工艺参数,并最终组装成试纸条。结果显示,制备的试纸监测体系方法检出限为50 g/L。试纸条对牛奶、奶粉和饲料中的三聚氰胺残留的检出限分别为100 g/L、100 ng/g和200 ng/g。将该法与LC-MS/MS法对比检测牛奶、奶粉和饲料样品,在试纸条检测范围内,与LC-MS/MS法检测结果一致性好,从而验证了该方法的有效性。制备的三聚氰胺胶体金检测试纸在常温干燥环境下至少可保质6个月,能够检测出三聚氰胺含量大于50 g/L的样品,适用于现场实际样品三聚氰胺残留水平监测,具有良好的应用前景。     

美西螈胚胎鳃神经发育的形态学

在约25℃温度下孵化并选用第30～44期的美西螈(Ambystoma mexicanum)胚胎标本,用4%多聚甲醛溶液固定,进行整体标本免疫染色,体视显微镜观察.结果显示,胚胎30期,可观察到鳃神经节短小的鳃神经本干;胚胎35期,已能观察到较明显的部分分支和交通支;胚胎37期,形成上颌神经及下颌神经;胚胎38期,可观察到舌咽神经的背支、咽头支;胚胎40期,可观察到舌咽神经的鳃裂前支.因而,美西螈鳃神经在胚胎早期遵循祖先型排列的特点,之后随胚胎的发育,出现随鳃器官演化而重新分布的趋势;其舌咽神经基本保持了鳃神经的原始形态特点.     

北京市地铁拉环和扶杆表面细菌的检测与鉴别

目的：检测北京地铁车箱细菌污染,明确北京市地铁系统的清洁卫生情况,为公众健康提供第一手资料。方法：选取北京市地铁2号线顺时针方向列车,在工作日和周末的营运时间分别对列车车箱拉环和扶杆按标准操作程序采样．接种于牛肉膏培养基和麦康基培养基平板。恒温培养进行茵落计数。结果：扶杆总细菌平均7．1个／cm^3;革兰氏阴性菌平均1．9个／cm^3。拉环总细菌平均8．9个／cm^3。革兰氏阴性细菌平均3．9个／cm^3,其中产乳酸细菌2．1个／cm^3,不产乳酸细菌1．8个／cm^3。结论：参考《中华人民共和国国家标准——医院消毒卫生标准GB 15982—1995》关于对物体表面细菌菌落总数卫生标准的相关规定。认为北京市地铁虽然有细菌存在．但细菌菌落总数比较少．对公众健康不构成威胁：但仍存在少量的肠道细菌．应该引起重视。     

应用A蛋白亲和层析法纯化单克隆抗体

应用Protein A亲和层析法,从采集的小鼠腹水中纯化出了抗凝血因子Ⅶ单克隆抗体,用SDS-PAGE和ELISA法分别检测了纯化后单克隆抗体的纯度及效价,结果显示,电泳为两条带,分别为免疫球蛋白G(IgG)的重链和轻链,纯化后的单克隆抗体纯度达到电泳纯,应用间接ELISA法测定腹水效价为1×10-7左右,与未纯化前无差异。结果表明,应用A蛋白亲和层析法能够得到纯度较高的单克隆抗体,适用于高纯度单克隆抗体的制备。     

可溶性TRAIL蛋白的高密度培养及补料策略研究

采用分批补料的方法高密度培养重组大肠杆菌C600/PbvTRAIL制备人可溶性TRAIL蛋白,优化发酵工艺,探索简单高效的分离纯化方法并测定蛋白生物活性。通过比较几种不同的补料策略：间歇流加、Dostat、pHstat,摸索了一种流加策略,即DOstatpHstat组合流加,有效的避免了发酵过程中,尤其是诱导表达阶段乙酸积累的增加,使TRAIL蛋白在高密度培养条件下,得到高效表达。菌体密度最终达到300g/L（WCW）以上,可溶性TRAIL蛋白占菌体总蛋白的4.2%,含量为1.1g/L。在整个发酵过程中,乙酸浓度接近于0,且未使用任何特殊手段,如纯氧、加压等,简化了发酵工艺,降低了发酵成本,为TRAIL的工业化生产创造了条件。     

漆酶工程菌株的构建及其培养条件的研究

提取产漆酶白腐菌 (Fomelignosus)的总RNA ,利用RT_PCR的方法克隆到漆酶的cDNA ,并将其克隆到表达载体pPIC9k ,重组质粒经线性化、电激转化PichiapastorisGS115、通过底物显色反应筛选到漆酶生产工程菌株。其中 2 #工程菌株产酶活力较高。培养基、培养温度、诱导用甲醇浓度及培养基中铜离子浓度对该菌产酶活力均有一定的影响。在最适条件下 (用含 2 0 0 μmol LCu2 的BMMY培养基 ,于 2 0℃ ,2 5 0r min ;用 0 5 %甲醇诱导 )培养至第 6天时 ,该菌株产酶活力达到最高 (15 10U L)。     

仙客来组织培养中再生器官类型及增殖稳定性比较

对'胜利女神'(Cyclamen persicum cv.'Victoria')和'大红'(C.persicum cv.'Dahong')两个仙客来品种成苗叶片诱导的愈伤组织,在6-BA与NAA配合的12个分化培养基上继代培养,第一次继代主要产生大量的不定芽芽点,从第二次继代后会得到5种类型的再生器官,分别为不定芽芽点、多芽球茎、多芽新梢、单芽球茎和叶片状芽丛.通过对不同再生器官增殖稳定性的试验表明,'大红'品种的多芽球和多芽新梢在继代培养中再生相同器官的稳定性比较强,由于多芽球茎的增殖率大于多芽新梢,在继代中选择多芽球茎为再生体系较理想;不定芽芽点在以后的继代中会分散产生各种再生器官,不宜作为增殖器官;单芽球茎和叶片状芽丛继代分散性强,为不正常再生器官.'胜利女神'品种多芽球茎和多芽新梢继代的稳定性比'大红'品种差,易于产生多种不正常器官.     

中华芦荟组培苗与正常苗某些理化特性的比较研究

对中华芦荟（Aloe vera L.var.chinensis) 组培苗与正常苗的干重,含水量,可溶性糖含量,叶绿素及类胡萝卜素含量,蛋白质含量及蛋白质电泳,光合速率,呼吸速率,超氧化物歧化酶活性等理化指标进行了比较研究,结果表明,中华芦荟组培苗与正常苗的上述各项指标均差异不显著,证明植物组织培养方法是中华芦荟快繁的一条有效途径,可用组培苗来代替正常的扦插苗。     

复制酶与运动蛋白编码基因的突变对烟草花叶病毒的弱化效应

番茄花叶病毒弱毒疫苗K(ToMV-K)的复制酶基因和运动蛋白基因分别具有乳石和赭石突变的特征. 为了对这一致弱特征进行扩展研究, 用PCR介导的定点突变技术, 对烟草花叶病毒普通株中国分离物(TMV-Cv)复制酶基因和运动蛋白基因分别进行乳石突变(UGA)和赭石突变(UAA), 构建了复制酶单突变体——TMV-Cv^rase, 运动蛋白单突变体——TMV-Cv^mp和复制酶与运动蛋白双突变体——TMV-Cv^rase-mp. 烟草侵染试验发现, TMV-Cv^mp和TMV-Cv^rase-mp能侵染枯斑(Xanthi NC)和系统(K326)寄主, 后者侵染普通烟K326仅出现少量轻微的花叶症状; 子代病毒的电子显微镜观察、重复接种试验及其核酸的RNA斑点杂交、RT-PCR扩增与测序结果表明, TMV-Cv^mp和TMV-Cv^rase-mp子代病毒与TMV-Cv的大小和形态基本一致, 具有完整和稳定的侵染、复制和繁殖能力, 且其基因组仍保持着突变, 而复制酶单突变体TMV-Cv^rase不能侵染烟草. 以上结果表明, 复制酶与运动蛋白的乳石突变与赭石突变协同致弱TMV-Cv对烟草的侵染症状, 从而暗示ToMV-K基因组的这种突变模式也可以用于其他植物病毒的致弱研究.