蓖麻RcMsc2基因功能分析

G2/有丝分裂特异性细胞周期蛋白 2(G2/mitotic-specific cyclin-2,Msc2)作为高等植物应对逆境胁迫的关键调控蛋白,参与多个抗逆境胁迫的应答。为探究RcMsc2基因的功能,该研究从蓖麻叶片组织中成功克隆了RcMsc2,并利用生物信息学分析RcMsc2蛋白的结构和潜在功能,同时借助qRT-PCR方法分析RcMsc2基因的组织表达特性和非生物胁迫表达特性。结果表明:(1)RcMsc2基因位于蓖麻第5号染色体长臂,该基因的CDS(coding sequence)区是1 299 bp,编码432个氨基酸。(2)RcMsc2蛋白拥有细胞周期(cyclin)家族特征结构域,是一个不稳定酸性亲水蛋白,无跨膜域和信号肽,相对分子量为49.38 kD。(3)RcMsc2蛋白质的二级、三级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。(4)RcMsc2蛋白与麻风树和巴西橡胶树的CYCB2蛋白的序列同源性最高,且同被聚为Group Ⅱ。(5)35S-RcMsc2-GFP融合蛋白定位于细胞核。(6)RcMsc2基因在蓖麻的所有组织中均有表达且主要在根和茎中发挥作用; 非生物胁迫分析表明RcMsc2基因可以被脱落酸(abscisic acid, ABA)、盐、干旱和低温处理诱导表达,并且RcMsc2基因对低温胁迫的响应最敏感。综上表明,该研究较全面地分析了RcMsc2基因的结构特征、系统进化和表达模式,为揭示RcMsc2基因在蓖麻的生长发育和应答冷胁迫过程中的功能提供了理论参考。     

蓖麻RcbZIP11基因克隆及表达特性研究

为探究蓖麻bZIP(basic leucine zipper)基因在响应非生物胁迫应答过程中的作用,研究基于蓖麻转录组数据,克隆到1条在低温胁迫下显著上调表达的bZIP基因,并将其命名为RcbZIP11(GenBank No. OQ506490)。RcbZIP11基因的编码区序列全长492 bp,其推导163个氨基酸,预测是1个亲水性蛋白质,具有保守的bZIP＿plant＿GBF1结构域。蛋白质的多序列对比显示,RcbZIP11蛋白质在进化过程中相对保守,进化树分析显示RcbZIP11与麻风树JcbZIP11蛋白质亲缘关系最近。亚细胞定位显示RcbZIP11蛋白质定位于细胞核,并成功克隆出RcbZIP11启动子序列,预测结果显示,该区域拥有光响应元件、逆境响应类元件和激素诱导类元件。RcbZIP11基因在蓖麻不同组织(真叶、子叶、茎和根)中均有表达,在子叶中相对表达量最高;且该基因在逆境胁迫下(干旱、盐、低温和ABA)的根和真叶中其相对表达量均高于0 h,说明RcbZIP11基因积极地参与蓖麻的非生物胁迫响应。综上,研究为进一步探究RcbZIP11基因在蓖麻逆境条件生长过程中的功能奠定...     

胞二磷胆碱的发酵合成及其纯化

胞二磷胆碱(Cytidine Diphosphate Choline,简称CDP-Choline,结构式及分子组成见图1),是卵磷脂生物合成的重要中间产物。卵磷脂是细胞膜的重要组成成分。它的代谢正常与否,直接影响细胞的透性、能量代谢及蛋白质生物合成等许多生物学功能。1963年,胞二磷胆碱开始用于临床。实践证明,它对脑损伤引起的意识障碍及其它神经系统疾病都有较好的疗效,国内外已有不少综述。     

培养条件对齿瓣延胡索愈伤组织生长及延胡索乙素含量的影响

研究了不同培养条件对齿瓣延胡索(Corydalis remota)愈伤组织生长及延胡索乙素(THP)含量的影响。结果表明, 2, 4-D较NAA更有利于提高培养物鲜重,加速细胞增殖。培养基添加2.0 mg/L 2, 4-D和1.0 mg/L BA不仅有利于干物质积累,而且显著提高THP水平。蔗糖不仅可提高培养物鲜重,而且与半乳糖组合可显著促进干物质积累和THP水平的提高。水解酪蛋白和水解乳蛋白均有利于愈伤组织生长和THP含量的提高, 450mg/L的水解乳蛋白处理组THP含量最高。光照可提高培养物鲜重和THP含量。     

发根农杆菌K599对大豆、黄瓜和凤仙花活体感染生根的研究

利用野生型的发根农杆菌K599对属于不同科属的大豆、黄瓜和凤仙花进行活体感染实验,结果表明,发根农杆菌K599可使切割后的大豆、黄瓜和凤仙花子叶形成不定根,生根频率分别为100%、65%和91%。此外,发根农杆菌K599还可以使未进行创伤切割的黄瓜腋芽处形成不定根,生根频率为10%。根据发根农杆菌所具有的rolC基因序列,设计PCR引物,对再生的毛状根DNA进行PCR扩增,验证了再生的毛状根中含有发根农杆菌T-DNA序列。本研究获得的转基因根为进一步开展大豆、黄瓜的根结线虫病理以及凤仙花的矮化育种研究提供了前提材料。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定血浆中烷基间苯二酚

目的：建立超高效液相色谱-串联质谱法测定血浆中2种全麦食品生物标志物烷基间苯二酚（ARs）的方法。方法：血浆加入内标，经丙酮提取，离心取上清液过滤，滤液吹干异丙醇定容，使用实心核色谱柱（2.1mm×100mm，1.6μm）为分离柱，以异丙醇∶乙腈=30∶70为流动相，等度洗脱，质谱采用电喷雾负离子模式，多反应监测模式进行检测，用内标法定量。结果：2种ARs在2~200ng/mL浓度范围内线性良好，r2>0.998 0。方法检出限为0.1ng/mL，定量限为0.3ng/mL，加标回收率为88.2%~110%，相对标准偏差为2.48%~13.2%（n=6）。结论：该方法快速准确、灵敏度高、前处理简单，能够有效测定血浆中2种ARs的含量。     

Ets-1在姜黄素抑制心脏纤维化的表达研究

目的:研究姜黄素的抗增殖作用是否依赖于其对Ets-1表达的下调。方法:使用Ets-1 siRNA对CFs细胞Ets-1基因进行沉默;Real-time PCR和western-blot法测定各组细胞Ets-1 mRNA和蛋白的表达水平。结果:在mRNA和蛋白水平上,AngⅡ明显增加CFs细胞内Ets-1的表达;使用siRNA技术对Ets-1进行沉默后,随着Ets-1表达的降低及转录调节能力的下降,由AngⅡ诱导的CFs细胞的增殖能力及增殖相关细胞因子分泌减少;姜黄素可以显著降低AngⅡ诱导的Ets-1表达升高,并具有浓度依赖性(P0.05)。说明姜黄素对AngⅡ诱导的CFs增殖的抑制作用可能依赖于其对Ets-1表达的抑制作用。结论:Ets-1 siRNA对Ets-1进行基因沉默后,显示出抗增殖效用;姜黄素能够有效地抑制AngⅡ诱导的CFs细胞Ets-1 mRNA和蛋白的过表达;姜黄素的抗增殖作用可能依赖于其对Ets-1基因的表达下调而得以实现的。     

分子伴侣对白喉毒素无毒突变体CRM197重组蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的促进作用

为了获得有活性的白喉毒素突变体蛋白 (Cross-reacting material 197,CRM197),本研究利用分子伴侣pG-KJE8与重组质粒pET28a-CRM197在大肠杆菌原核表达系统中进行共表达,来促进目的蛋白的正确折叠,进而提高CRM197蛋白的可溶性表达。将质粒转化至大肠杆菌后并诱导其表达目的蛋白,再通过SDS-PAGE胶染色、Western blotting等技术对所得蛋白进行检测分析。结果发现：利用体外重组技术成功得到了pET28a-CRM197重组蛋白原核表达质粒,且CRM197重组蛋白在原核表达系统中主要以包涵体形式表达;通过探索和优化,确定了诱导蛋白的最佳浓度和温度,当加入终浓度为1.0 mmol/L IPTG、0.5 mg/mL L-阿拉伯糖、5.0 ng/mL四环素,在20 ℃条件下诱导16 h时,目的蛋白的可溶性表达得到显著提高;可溶性表达的CRM197重组蛋白可以与CRM197一抗发生特异性结合,免疫反应性良好。因此,研究发现分子伴侣pG-KJE8可以促进CRM197重组蛋白在大肠杆菌中以可溶性形式表达,且能很好地与CRM197一抗发生特异性结合,证实CRM197重组蛋白具有良好的免疫反应性,为CRM197蛋白的工业化生产及应用奠定了一定的基础。     

7种木莲属植物抗寒性评价及其生理机制

为建立木莲属(Manglietia)植物的抗寒性综合评价体系,对7种木莲属植物扦插苗进行低温胁迫处理,测定叶片的抗寒性关键生理指标,拟合Logistic方程计算低温半致死温度,隶属函数法筛选抗寒性关键指标并综合评价。结果表明,7种木莲属植物的低温半致死温度依次为木莲红花木莲荷花木莲巴东木莲球果木莲锥花木莲粗枝木莲,且与相对电导率显著正相关。7种木莲属植物叶片的游离脯氨酸和可溶性蛋白含量及超氧化物酶、过氧化物酶活性均随温度降低呈先升后降的趋势,而可溶性糖和丙二醛含量则不断增加、后趋于平稳。聚类分析结果表明7种木莲可分为3类,木莲和红花木莲抗寒性较强;荷花木莲、巴东木莲和球果木莲抗寒性中等;粗枝木莲和锥花木莲抗寒性较弱。