牛精子蛋白质组学技术平台的建立及冻融前后精子差异蛋白初步分析

本研究通过探索不同的精子蛋白制备方法、水化液成分和优化2D电泳程序以建立牛精子蛋白质组学研究技术平台,同时以牛鲜冻精为实验材料通过差异凝胶电泳寻找冻融前后精子蛋白的改变。结果表明：使用改进的热TRIzol法裂解精子细胞制备蛋白,结合优化的2D电泳技术可建立稳定的牛精子蛋白质组学研究技术平台。差异凝胶电泳揭示牛精子在冻融后有质和量的改变：冻融后缺失的蛋白点有20个,表达下调的有2个,表达上调的有10个。作为一项阶段性的实验成果,本研究建立的2D平台和所发现的冻融引起的差异表达蛋白质点为揭示冷冻损伤机理和性控精液的差异蛋白质组学研究奠定了较好的基础。     

一种提高水稻FISH检出率的新方法-RFLP混合标记

分别以水稻1号染色体上混合标记的8个紧密连锁的RFLP(平均约1.7kb)和5号染色体的BAC克隆44B4(137kb),以及12号染色体单个RFLPRG397（约1.5kb）为探针,在水稻染色体上进行了荧光原位杂交(FISH)。结果表明,RFLP混合标记杂交的检出率为27%,大大高于单个RFLP的检出率(7%)。其检出率虽然低于BAC克隆44B4(60%),但它具有程序简单易行的特点,使基因原位定位更加高效。由于水稻中与已知功能基因紧密连锁的RFLP标记具有数量丰富、分布密集等优势,揭示了混合标记的RFLP在禾本科植物同线性和共线性分析中的广阔应用前景。此外,混合标记的RFLP还可以用于染色体的准确识别和核型分析。 Abstract：Using mix-labeled 8 RFLPs (average length is about 1.7 kb) as a probe,the autho rs carried out fluorescence in situ hybridization in rice, and detected the sing le RFLP RZ397 (1.5 kb)and the BAC clone 44B4 (137 kb) simultaneously. The detec tion rate of mix-labeled RFLP was 27%, much higher than single-labeled RFLP (7%) , though lower than BAC clone (60%). Mix-labeled RFLP is an easy and effective m ethod to locate genes for its simplicity and sufficiency of RFLPs linked with th e functional genes. In addition, Mix-labeled RFLP groups can be used as effectiv e markers in karotype analysis of rice and the analysis of colinearity or synten y among cereals.     

三峡大老岭植物区系的垂直梯度分析

为探讨山地植物区系构成特征及其垂直梯度的生态意义,根据对三峡大老岭地区植被垂直样带 调查获得的植物区系资料,分析了该地区植物区系成分构成的基本特征及其随海拔梯度的变化趋势,寻找了区系平衡点的位置;并利用聚类方法分析了山地气候垂直分异对区系成分构成的影响。结果表明：①大老岭植物区系具有温带性质,但仍反映了与热带区系的历史联系,有强烈的区域性;②属的分布区类型可归为热带分布、温带分布、地中海—中亚中心和东亚中心4组,各组区系成分的垂直梯度特征不同;热带、亚热带成分与温带成分的平衡点大致位于海拔650m;③区系成分构成和属的物种数量构成的聚类分析结果一致显示了植物区系构成与山地气候和植被垂直带相对应的格局。     

中国人先天性巨结肠RET基因突变特征研究

为了研究中国人先天性巨结肠(HD)RET基因突变特征,从分子水平探讨先天性巨结肠症(HD)的发病机理,揭示中国人群HD与RET基因突变的关系。我们应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR—SSCP)-DNA测序方法,对50例HD患儿和30例无便秘正常对照者,进行RET基因第13外显子突变筛查,并对第13外显子突变阳性患儿家系作研究。结果发现在50例HD患儿中,有7例第13外显子扩增片段在SSCP分析时出现泳动变位。经DNA测序证实,有3种点突变类型(错义、同义和移码),第13外显子突变率为14％(7／50)。在7例第13外显子突变的患儿中,发现2例患儿的父亲存在与其子相同的突变。实验表明中国先天性巨结肠人群存在着RET基因突变,且以杂和性点突变为主,HD具有一定的遗传性。     

H1N1亚型猪流感病毒的拯救

利用8质粒拯救系统成功拯救出了猪流感病毒毒株A/Swine/TianJin/01/2004(H1N1)(A/S/TJ/04)。将猪流感病毒8个基因节段经RT-PCR合成cDNA后, 分别克隆到RNA聚合酶I/II双向表达载体PHW2000中, 构建成8个重组质粒。用8个重组质粒共转染COS-1细胞, 30 h后加入TPCK-胰酶至终浓度0.5 mg/mL。共转染48小时后收获COS-1细胞及其上清, 经尿囊腔接种9日龄SPF鸡胚。收获死亡鸡胚尿囊液并继续用SPF鸡胚传3代, 得到有感染性的病毒。经血凝、血凝抑制验、测序分析、电镜观察等均证实了A/S/TJ/04猪流感病毒的成功拯救。这是目前国内首次报道拯救出H1N1亚型猪流感病毒, 为进一步研究猪流感病毒基因组结构与功能的关系、流感跨种传播的机制以及构建新型猪流感疫苗株奠定了基础。     

浙江蔷薇科新分类群

描述了浙江蔷薇科1新亚种和1新变种,并分别附有线条图。它们是:腺瓣蔷薇(新亚种)和遂昌红腺悬钩子(新变种)。腺瓣蔷薇与模式亚种单花合柱蔷薇区别在托叶、叶柄和萼片仅密被短柔毛而无腺毛,小叶片较大,两面近无毛或疏被短柔毛,伞房花序具1～3花,花瓣宽倒卵形。遂昌红腺悬钩子与模式变种红腺悬钩子区别在于花梗、小枝和老枝密被腺毛而无柔毛,小叶片两面具腺毛,萼片较长,长13～15mm,先端长尾尖。     

逆转录病毒载体介导表达伪狂犬病病毒PK基因MDBK细胞系的建立

细胞凋亡 (apoptosis)是机体在生理条件下受刺激后 ,经过多种途径的信号传导导致细胞产生一系列形态和生物化学方面的改变而引起的细胞自我消亡的过程 ,是程序性细胞死亡 (programmedcelldeath ,PCD)的主要机制 ,它对于机体的发育 ,内外环境的平衡等都具有重要的作用[1,2 ] .研究表明 ,许多病毒具有诱导或抑制细胞凋亡的功能 ,但其发生的机理仍然不清 .随着分子生物学研究的深入 ,人们发现病毒的某些基因与细胞凋亡相关 ,其编码的基因产物或因病毒感染诱导细胞表达的蛋白抑制或诱导细胞发生凋亡 .最近研究表明 ,伪狂犬病病毒 (psedorabies…     

表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3基因的重组伪狂犬病病毒的构建

猪繁殖与呼吸综合征 (porcinereproductiveandrespiratorysyndrome ,PRRS)是引起怀孕母猪早产、流产、死胎及仔猪呼吸系统疾病的一种新发现的病毒性传染病[1] .该病毒的基因组为单股正链RNA ,约15kb ,含有 8个开放阅读框架 (ORFs) ,ORF1编码病毒非结构蛋白 (依赖RNA的RNA聚合酶 ) ,ORF2 ORF7编码病毒的结构蛋白 .其中ORF3含有 2 6 5个氨基酸 ,编码的GP3蛋白为高度糖基化的结构蛋白 ,有 7个糖基化位点 ,具有免疫原性[2 ,3 ] .目前 ,用于预防PRRS的疫苗主要是弱毒苗和灭活苗 ,虽然都有一定的免疫效果 ,但由于PRRS抗体依赖性…     

抗除草剂转基因植物的杂草化类型与机理探讨

抗除草剂转基因植物(herbicide—resistant genetically-modified plant(HRGMP))己在全世界广为种植。由于种内、种间抗性基因的转移、互渗和某些转基因植物类型自身具有较强的杂草性,转基因植物的田间试验和商业化种植都存在着产生新的杂草类型,甚至超级杂草的风险。即形成：(1)逸生型杂草,(2)衰退型杂草,(3)超级杂草,对生物多样性构成威胁。     

L-精氨酸对兔心肌缺血/再灌注损伤的影响

心肌缺血后的早期再灌注是防止心肌损害的有效手段.但是,心肌缺血-再灌注并不都是有益的.缺血-再灌注可导致一氧化氮(NO)分泌减少,损伤内皮细胞功能.最近研究发现,作为NO生成前体的L-精氨酸,在保持和重建血管内皮功能等方面有重要作用.但是,也有与此相悖的研究报道.为此,我们以新西兰兔为实验性心肌梗塞模型,探讨缺血-再灌注期补充L-精氨酸对心肌结构和功能的影响.