hCG嵌合肽在大肠杆菌中高表达的研究

目的：研制基因工程嵌合肽（CP）抗原的科学意义和应用价值，除取决于CP构建物能否体现强免疫原性和光或无MHC遗传限制外，它还应能在生物系统中被高表达，对于后，我们作了多方面的探索，包括在系列hCG CPs(-1,-7,-10,和－11）的N端再接一段25聚肽的研究。方法：插入片段选自可高表达的猪卵透明带（pZP)－4蛋白的N端，在上述hCGCPs的衍生物（CP12，CP15－17）构建中，先合成它的编码序列正负链4个DNA片段，然后配对退火，再连接成一个大片段，由于其5'端为EcoRI(E)粘性末端，3'端接了母体CPs 5'端ATG后至B HI(B)粘性末端的17bp序列，故此合成片段被直接经E和B双酶切构建pBV221/CP系列重组质粒，并分别经DNA测序验证，结果：在SDS－PAGE分析中，新构建的CP衍生物在宿主菌中的表达量均比母体CPs有明显提高，且的特异表达都为单抗OT3A的蛋白印迹试验所证实。另外，用兔抗pZP多抗的检测显示阴性结果，表明所选用的pZP-4肽段内无B细胞表位存在。意义：本工作不仅为今后其他CP分子设计和高表达研究结累了经验，也扩展了可供筛选的hCG CP避孕和／或肿瘤治疗性疫苗原系列。