(R)-、(S)-羰基还原酶在酿酒酵母中的表达和亚细胞定位

【目的】将增强型荧光蛋白标记的(R)-和(S)-羰基还原酶于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae W303-1A)细胞中表达,分析荧光蛋白表达谱,确定两种酶在细胞中的功能分布和亚细胞定位。【方法】采用SOE-PCR法克隆出增强型荧光蛋白与(R)-和(S)-羰基还原酶的融合基因,构建到真核表达载体pYX212中,电击转化酵母细胞,以荧光蛋白为筛选标志,观察两种酶在酵母细胞中的表达和分布。【结果】激光扫描共聚焦显微观察表明(R)-和(S)-羰基还原酶多定位于细胞内膜和细胞质中稳定表达,少数成点状分布于细胞中央。根据荧光强度可知(S)-羰基还原酶的表达水平明显高于(R)-羰基还原酶。生物转化结果显示融合型(R)-和(S)-羰基还原酶催化底物2-羟基苯乙酮,分别获得(R)-和(S)-苯基乙二醇,前者产物的光学纯度和产率为86.6%和70.4%,后者产物的光学纯度和产率分别为92.3%和81.8%。【讨论】荧光蛋白与酶的融合没有改变靶蛋白的分子构象与生物活性,酿酒酵母工程菌较重组大肠杆菌具有更明显的生物功能优势,该研究为羰基还原酶蛋白的功能表达调控与亚细胞定位的可视化研究奠定了坚实的基础。     

植物microRNA对重金属胁迫响应的调控

镉是重要的重金属污染物,它严重影响植物生长,并危害人体健康.植物的重金属耐受机理很复杂,需从多个角度阐述.但参与重金属应答的调节性基因研究较少,重金属响应调控网络并不清楚.microRNA(miRNA)是一类新型的调控基因表达的     

右美托咪定对红细胞变形性影响的体外研究

目的:研究右美托咪定(DEX)对离体红细胞变形性的影响,探讨其作用机制。方法:采健康志愿者人血5 m L制成2%红细胞悬液,分成空白对照组(C组),低浓度DEX组(DL组)、中浓度DEX组(DM组)、高浓度DEX组(DH组),单纯育亨宾(Y组)以及育亨宾+DEX组(YD组),每组9例。将各组样本放入37℃恒温震荡培养箱中60 min后取出,测定红细胞变形性指数(EI)、红细胞内一氧化氮(NO)含量以及内皮型一氧化氮合酶(e NOS)含量。结果:与C组比较,DL组、DM组、DH组及YD组中EI、红细胞内NO、e NOS的含量增高(P0.05);Y组含量差异无统计学意义(P0.05)。与YD组比较,DM组EI、红细胞内NO及e NOS含量增高(P0.05)。结论:DEX可以提高离体红细胞的变形能力,其可能机制是通过激活红细胞膜上肾上腺素受体,激活红细胞内e NOS使细胞内NO增多有关。     

北京朝阳医院深部真菌感染的临床分析和药敏试验

目的对院内临床深部真菌感染的标本进行分离鉴定和药敏试验,为临床感染性疾病提供病原学诊断和合理使用抗真菌药物的依据。方法采用念珠菌显色培养基进行鉴定。对真菌(丝状菌)用棉蓝染色直接镜检和培养相结合的方法进行鉴定。采用纸片扩散法进行药敏试验。结果450株真菌标本中,念珠菌396株,占88.0%;真菌(丝状菌)54株,占12.0%。分离菌株对药物的敏感性分别为氟康唑90.15%,两性霉素B97.98%,伊曲康唑91.67%,氟胞嘧啶89.1%。结论院内真菌感染以念珠菌最为多见,特别是白念珠菌和热带念珠菌。     

水稻细胞膜上产生的诱饵免疫机制

<正>水稻作为人类赖以生存的重要粮食作物之一,其生产一直都受到各国政府的重视.然而稻瘟病的发生严重制约了水稻的生产,每年由稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)侵染损失的水稻可养育六千万人~([1]).培育抗病品种是防治该病、减少危害的主要措施.植物在与病原菌长期的斗争过程中进化出了识别病原菌并激活抗     

武汉市湿地公园昆虫群落多样性及季节动态研究

本文系统调查了武汉市解放公园和月湖公园人工湿地区不同季节、不同植物类群昆虫群落多样性,共采集昆虫标本7313头,隶属于13目、81科、198种。群落特征研究结果显示9月为昆虫多样性最高的月份,Shan-non-Wiener指数分别为解放公园4.7949,月湖公园4.4611;昆虫群落的季节变化情况是温度升高,多样性指数升高,但温度过高会抑制昆虫多样性;不同植物种类间昆虫多样性差别很大,种类极不相似,昆虫群落多样性最高的植物群落是千屈菜。     

葡萄籽中原花青素的提取及应用现状

原花青素（proanthocyanidins,PC)是目前国际上公认的清除人体内自由基最有效的天然抗氧化剂,广泛分布于多种天然植物中。阐述了葡萄废弃物中原花青素的功能,分析了其应用开发现状。结合常用的提取方法,并综合国内外关于原花青素的研究进展,对葡萄籽中原花青素提取的工艺参数进行优化,从而得出葡萄籽中原花青素最优提取方案。以期为葡萄籽的全面利用和原花青素的工业化生产提供科学依据,使原花青素拥有更广泛的应用。     

父儿传播的HBV初步基因分型及变异株检出

为了研究父儿传播的ＨＢＶ基因型别与变 朱,以选择笃配偶无任何ＨＢＶ标志的男性ＨＢＶ携带者及其ＨＢＶ ＤＮＡ最性胎儿为对象,用双脱氧链末端终止法检测父儿ＨＢＶ Ｓ基因４５１～６６０段核苷酸序列。结果４对父儿无论在核苷酸水平带是在氨基酸水平均一致,其中１对在１２６位父儿均有氨基酸替代,别外２对父亲无变异,１例胎儿在１１３、１１４、１３１、１４３位,另１例仅在１４３位有氨基酸替代。根据当前的基因分型方法     

探讨乙型肝炎病毒子宫内传播的病毒群演变

以６名ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ均阳性的女性携带者及其子宫内感染ＨＢＶ的６例胎儿为对象,探讨母儿间病毒群的演变,检测母儿所携ＨＢＶ Ｓ区４５１－６６０、Ｃ区２０２２－２３０１位核苷酸序列。结果表明了母儿间同源性９８％－１００％,检出５３０、５４６、５８１位点变异致使１２６、１３１、１４３位氨基酸替代。２对母儿Ｃ区同源性１００％,其中一对母儿均有原型株、变异株混合感染。结论子宫内感染大部分母亲将本身携带     

全反式维甲酸下调肝癌细胞HepG2内AFP结合蛋白的表达

当成人肝细胞发生癌变,甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)在血清中的含量会急剧增加.AFP可与细胞表面AFP结合蛋白(AFP binding protein,ABP)结合促使细胞增殖分化.全反式维甲酸(al1-trans retinoic acid,ATRA)通过与特异性维甲酸受体(retinoic acid receptor,RAR)结合发挥抑制肿瘤生长的作用.Western印迹检测肝癌细胞HepG2和HLE中ABP的表达.结果显示,ABP在HepG2细胞中高表达,在HLE细胞中无明显表达.这一结果与2种细胞AFP的表达情况一致.激光扫描共聚焦显微镜定位分析显示,ABP存在于HepG2细胞胞膜和胞浆,用80μmol/L ATRA处理HepG2细胞4 h,可导致RAR入核增加.用不同浓度(20～160μmol/L)ATRA处理HepG2细胞后培养36 h.Western印迹结果表明,细胞ABP的表达随着ATRA浓度的增高而越少,ATRA浓度达80μmol/L时,HepG2细胞的ABP表达减少,ATRA浓度为160μmol/L时,ABP几乎无表达;加入80μmol/L ATRA后,随着作用时间延长,HepG2细胞ABP表达逐渐减少,当作用时间为12 h时,ABP表达明显减少.结果表明,ABP的表达对ATRA的反应呈剂量和时间依赖性.免疫共沉淀结果表明,AFP、ABP及RAR这3种蛋白质具有互相结合的作用.这些结果为进一步深入研究AFP在肝癌发生过程中的作用机制提供了依据.