低分子肝素的绿色荧光蛋白荧光标记及其活性检测

增强型绿色荧光蛋白（EGFP）是生物领域常用的标记物. 本实验首先利用高碘酸法活化低分子肝素（LMWH）,与EGFP连接得到LMWH EGFP.然后用Sephacryl S-200 HR对其进行初步分离,再用Sephadex G-10 HR进行脱盐纯化. 采用Sephacryl S 200 HR检测LMWH EGFP的纯度,为单一对称峰. 经检测,LMWH-EGFP具有良好的热稳定性和耐碱性. 通过荧光分光检测器检测LMWH-EGFP的λEx为488 nm,λEm为509 nm. 通过抗凝实验发现LMWH EGFP仍具有抗凝活性. 本实验建立了LWMH荧光标记的方法,为多糖的荧光标记提供了新的选择.     

中国柴胡属染色体数目和核型研究

采用植物染色体常规压片技术,报道了中国柴胡属(Bupleurum L .)13种5变种24个居群的染色体数目,其中4种5变种为首次报道,同时报道了5种1变种的细胞核型.除天山柴胡两个居群、紫花鸭跖柴胡一个居群和北柴胡一个居群是多倍体外,其它均为二倍体.主要结论如下:(1)秦岭柴胡和细茎有柄柴胡处理为独立的种更为合适;紫花阔叶柴胡作为大叶柴胡变种的处理是合理的;黄花鸭跖柴胡处理为紫花鸭跖柴胡的变种是不合理的.(2)紫花鸭跖柴胡和北柴胡可能都是还没有被完全认识的复合类群,需要进一步研究.(3)x=7可能是柴胡属的原始基数.     

多发性四肢骨折致失血性休克急救的体会

目的:研究与分析对于多发性四肢骨折所致的失血性休克应采取的最有效急救措施,以提高急救水平,并为今后的急救策略作出明确的指导.方法:通过对我院1998年1月至2012年6月、接诊的121位、因多发性四肢骨折而致的失血性休克伤员的救治,进行分析,总结出最有效的急救措施和应遵循的规章制度.结果:121例伤员中,经急救处理后,存活118例,死亡3例,总体存活率97.5％.结论:我们采用止血、支持呼吸与循环、观测生命体征、判断伤情、简单外固定伤肢、补液、输血、处理重要脏器损伤等一系列有效的、综合性的急救措施,平时完善医疗工作制度、经常性地进行急救演练,提高医护人员的医疗水平,能有效地降低多发性四肢骨折所致的失血性休克的死亡率.     

男性冠心病患者血清同型半胱氨酸、睾酮、肌钙蛋白Ⅰ水平变化及临床意义

目的:探讨男性冠心病(CHD)患者血清同型半胱氨酸(Hcy)、睾酮(T)及肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)水平变化及临床意义.方法:将110例男性冠心病患者分为三组:SAP组51例、UAP组36例、AMI组23例,对各冠心组患者血清Hcy、T及cTnI等指标水平进行检测,并与健康对照组40例健康受试者进行比较分析.结果:与健康对照组比较,冠心病组血清Hcy、cTnI水平均显著升高,而血清T水平显著降低,组间差异均具有统计学意义(P＜0.05);与AMI组比较,SAP组、UAP组血清Hcy、cTnI水平均显著降低,T水平显著升高,组间差异亦均具有统计学意义(P＜0.05);与UAP组比较,SAP组血清Hcy、cTnI水平均显著降低,血清T水平显著升高,组间差异亦具有统计学意义(P＜0.05).冠心病患者血清Hcy与cTnI水平呈正性显著相关(P＜0.05);血清T与Hcy、cTnI水平之间均呈负性显著相关(P＜0.05).结论:检测男性冠心病患者血清Hcy、T及cTnI水平对患者疾病预防及治疗具有重要的临床意义.     

端粒长度及端粒酶活性与儿童先天性心脏病发病机制的相关性研究

目的:探讨不同年龄儿童外周血白细胞端粒长度及端粒酶活性与儿童先心病发病机制的相关性.方法:采用实时荧光定量PCR检测先天性心脏病2个年龄组及健康受试者外周血白细胞的端粒长度及hTERT mRNA(端粒酶催化亚基).比较相同年龄的先天性心脏病与健康受试者外周血白细胞的端粒长度及hTERT mRNA差异,并比较不同年龄组间外周血白细胞的端粒长度及hTERT mRNA差异.结果:先天性心脏组3-6岁组的受检者及健康受试者3-6岁组平均外周血白细胞端粒(1.63± 0.61)长于先天性心脏组7-10岁组的受检者及健康受试者7-10岁组(1.36± 0.46)(t=1 1.37,P＜0.05);各组均无端粒酶表达.结论:外周血白细胞的端粒长度随着年龄的增长而缩短.端粒酶活性与先天性心脏病发病并无直接相关性.     

局部血含量和血氧含量在乳腺肿块诊断中的临床应用

目的:研究乳腺肿块中血含量和血氧含量的变化,探讨其在乳腺肿块早期诊断中的应用价值.方法:选取我院103例乳腺肿块住院患者进行乳腺血氧成像,超声,钼靶检查,通过与术后病理对比,比较3种检查方法的准确性、敏感性、特异性、阳性预测值及阴性预测值.结果:血氧成像技术,超声,钼靶准确率分别是95.1％,90.3％,85.4％;敏感性分别是95.2％,76.2％,66.7％;特异性分别是95.1％,93.9％,90.2％;阳性预测值分别是83.3％,76.2％,63.6％.阴性预测值分别是98.7％,93.9％,91.4％.血氧成像技术对乳腺肿块诊断的准确性、敏感性、特异性、阳性预测值及阴性预测值优于钼靶,但与超声相比无统计学意义.结论:检测乳腺肿块中血含量和血氧含量的变化,可为乳腺良、恶性肿块鉴别诊断提供依据,其敏感性,特异性,准确性,阳性预测值,阴性预测值均不低于超声或钼靶,对临床乳腺肿块的辅助诊断有较大的应用价值.     

卵巢癌生物治疗的现状与进展

由于卵巢癌的早期临床症状较不明显,大部分患者就诊时就处于晚期阶段,这对其有效治疗造成了很大困难,使其成为妇科病死率最高的恶性肿瘤,一直广受关注。但目前传统的手术与放化疗方法的治疗效果不佳。近年来随着基础研究工作的不断发展与深入,生物治疗作为新的肿瘤治疗方法引起了人们的重视。生物治疗作为第四种卵巢癌的治疗模式,其采取的针对不同靶位点和靶途径的策略很大程度上促进了卵巢癌治疗的理论和实践研究。生物治疗主要是运用基因治疗、免疫治疗和重组病毒治疗的方法对患者进行治疗,基因治疗包括细胞毒性或自杀基因治疗、纠错性基因治疗、免疫增强性基因治疗和抗肿瘤血管生成基因治疗等。而免疫治疗又分为主动和被动免疫治疗,前者包括树突状细胞疫苗、自体肿瘤疫苗和分子疫苗治疗等,后者如细胞因子治疗、单克隆抗体拮抗治疗以及细胞过继免疫治疗等。上述目前在卵巢癌治疗研究中已取得了一些成果,本文就其卵巢癌的生物治疗现状与进展做一综述。     

蝇蛹俑小蜂对寄主及果实的趋性反应

【背景】蝇蛹俑小蜂是实蝇类害虫蛹期重要的寄生蜂之一。有关植物果实和寄主挥发物在蝇蛹俑小蜂寻找寄主过程中的作用尚不明确。【方法】采用"Y"型嗅觉仪测试了寄主和果实(健康果实和虫害诱导果实)对蝇蛹俑小蜂的引诱作用。【结果】虫伤1 d的番石榴和杨桃果实对蝇蛹佣小蜂雌蜂具有显著的引诱作用;寄主蛹——3日龄橘小实蝇蛹和4日龄瓜实蝇蛹对蝇蛹俑小蜂雌蜂也具有显著的引诱作用。蝇蛹俑小蜂雌蜂对雄蜂有显著的吸引作用。橘小实蝇性诱剂甲基丁香酚对蝇蛹俑小蜂的搜索行为则无显著影响。【结论与意义】寄主蛹和幼虫危害1 d的果实能释放对蝇蛹俑小蜂有引诱作用的物质,这可为利用蝇蛹俑小蜂防治实蝇类害虫提供基础信息。     

好氧反硝化微生物学机理与应用研究进展

近年来,关于好氧反硝化过程的研究主要集中在三个方面:分别是好氧反硝化菌株的分离和脱氮性能表征,好氧反硝化微生物的应用潜力分析,以及好氧反硝化过程的机理研究。好氧反硝化菌株分布范围广泛,可从多种环境中分离得到,种属以Pseudomonas sp.、Alcaligenes sp.和Paracoccus sp.为主。好氧反硝化菌株及菌群在实验室条件下表现出优良的耐冷、耐盐特性,并具有可降解毒性有机物及N_2O减排的潜力。关于好氧反硝化过程的机理研究表明,虽然硝酸盐作为电子受体的竞争力比氧气弱,但反硝化作为辅助电子传递途径,可提高产能效率,防止NAD(P)H的过量积累。因此,硝酸盐可与氧气同时参与微生物的新陈代谢,即发生好氧反硝化现象。未来除了继续分离更新更好的好氧反硝化菌株外,应加强对好氧反硝化机理及实际生物强化方面的研究。     

基于CRISPR/Cas9系统构建精准调控Wnt信号通路的表达载体及其效果的验证

目的:构建基于CRISPR/cas9系统调控Wnt信号通路的载体,并在细胞水平验证其调控基因表达的效率。方法:选取Wnt信号中负性调控分子,设计并合成能够表达靶向上述分子gRNA的互补DNA克隆序列,BsmBI限制性内切酶酶切载体后,采用分子克隆的方法将上述序列克隆至目的载体lenti-sgRNA-Ms2-zeo,测序正确的克隆通过Lipofectamine2000与lenti-Ms2-P65-HSF1-Hygro和lenti-dcas9-VP64-blastine共同转染入293细胞;转染24h后收集细胞,qRt-PCR检测目的基因的表达。结果:筛选了Wnt信号通路中已知的19个负性调控基因;针对每个基因设计了两对gRNA序列,并构建了能够表达gRNA和MS2融合序列的载体,测序结果显示重组质粒的DNA序列与预期完全相符。随机挑选了4个表达载体与lenti-Ms2-P65-HSF1-Hygro和lenti-dcas9-VP64-blastine共转进入细胞,qPCR结果显示构建的目的载体联合lenti-Ms2-P65-HSF1-Hygro和lenti-dcas9-VP64-blastine载体可以协同促进靶分子表达。结论:本研究成功构建了基于CRISPR/cas9基因编辑系统调控Wnt信号的载体。