杜仲脂氧合酶基因家族全基因组鉴定及其表达特性研究

LOX （脂氧合酶）是动、植物中普遍存在的一种氧合酶,在植物的生长发育和逆境胁迫中发挥重要作用。本研究在杜仲基因组范围内,利用生物信息学方法对LOX基因家族进行全面鉴定,并分析了其基因结构、定位及其所编码蛋白质的理化性质、结构特征、分类和功能等。结果显示：杜仲LOX基因家族有23条LOX基因序列,分别定位于细胞质或叶绿体中,分为9-LOX和13-LOX两个亚家族,其中9-LOX类型仅包含一个,13-LOX类型包含22个;23个LOX基因非平均分布于12条scaffolds上,一些基因发生串联分布;RNA-Seq表达结果显示6个13-LOX类型基因在杜仲叶、果、树皮和种仁中几乎没有表达,而其他17个LOX基因表达具有组织和时空表达特异性。研究结果为揭示杜仲LOX基因家族成员的功能提供重要线索,为进一步研究LOX基因家族提供理论基础。     

PTPN9的表达下调通过抑制STAT3活化促进结直肠癌细胞凋亡

目的:探讨PTPN9对结直肠癌细胞生长和存活的影响及其机制。方法:建立稳定PTPN9高表达的细胞系,使用Real-timePCR检测其内源性变达,使用细胞集落实验及Caspase-3、Caspase-9,检测其细胞活力及凋亡情况。同时我们抑制了细胞中PTPN9的表达,使用实时PCR来验证敲低效率,应用100μM H_2O_2诱导凋亡模型,利用CCK-8测定来确定细胞活力,Caspase-9和Cas-pase-3测定检测其凋亡情况。最后我们应用Western blot技术,检测PTPN9抑制STAT3通路,来调控细胞凋亡。结果:PTPN9的表达在结直肠癌组织中下调。PTPN9的高表达减慢细胞生长和集落的形成,从而诱导结直肠癌细胞凋亡。相反,PTPN9低表达促进细胞生长和存活。此外,PTPN9负责调控STAT3的活化,并在结直肠癌中抑制核易位,并且通过抑制STAT3通路,来抑制PTPN9低表达对细胞凋亡的影响。结论:PTPN9在结直肠癌组织中通过抑制STAT3的活化而抑制细胞生长和存活。     

急诊阵发性心房颤动患者血清肌钙蛋白水平升高的相关影响因素分析

目的:通过比较急诊就诊时不同肌钙蛋白I(TnI)水平阵发性心房颤动(48小时内)患者临床特征的差异,探讨血清肌钙蛋白水平升高的相关影响因素,为临床识别高危房颤患者提供参考依据。方法:选取2016-2017年于宣武医院急诊诊断为阵发性房颤的患者110例,记录既往病史、临床症状体征、实验室检验结果及测定血清TnI水平,并根据TnI水平将患者分为TnI正常组(0.023μg/L)和TnI升高组(0.023μg/L),结合患者既往病史及用药史给予普罗帕酮或可达龙药物转复治疗。结果:急诊阵发房颤患者TnI升高发生率为11.8%,TnI峰值的平均值0.210μg/L,中位数0.067μg/L。TnI正常组和TnI升高组性别构成、血压、心室率、胸闷、头晕、乏力、高血压、糖尿病、慢性阻塞性肺部疾病、射频消融术、转复成功率及NT-proBNP比较差异均无统计学意义(P0.05);年龄、心悸、胸痛、腹背部不适感、冠心病、房颤病史、心电图ST段压低比较差异均有统计学意义(P0.05)。二元logistic回归分析显示既往冠心病史及入室心电图ST段压低为血清TnI升高的影响因素。结论:既往冠心病史及心电图ST段压低为阵发房颤患者肌钙蛋白升高的影响因素,临床上需关注高龄以心绞痛样症状就诊的首次房颤患者。     

三种棉盲蝽对不同棉花品种的选择偏好性及种群动态

【目的】明确我国华北地区棉盲蝽优势种对不同种棉花品种的选择偏好性,以及这几种盲蝽的种群动态及发生规律。【方法】2013和2014年通过小区随机排列田间系统调查的方法,比较分析了中黑盲蝽Adelphocoris suturalis(Jakovlev)、三点盲蝽Adelphocoris fasciaticollis(Reuter)和绿盲蝽Apolygus lucorum(Meyer-Dür)对12个棉花品种的选择偏好性,种群动态及与温度的关系。【结果】3种盲蝽均对石亚系1号表现出明显偏好性,对N73Deltapine FO表现出明显的不偏好性。棉盲蝽在每年7月初开始危害,7月下旬及8月上旬盲蝽种群密度达到峰值,9月上旬种群密度逐渐降低,9月中下旬盲蝽迁出棉田。在本实验调查的温度范围内(17~35℃),盲蝽种群密度随着温度升高而增大。【结论】棉盲蝽对不同品种有明显选择偏好性,盲蝽种群大的地区推荐种植盲蝽厌食品种。     

血浆磷脂酶A2与糖尿病合并心肌梗死患者预后的临床研究

目的:研究血浆磷脂酶A2(plasma phospholipase A2,PLA2)与糖尿病合并心肌梗死(myocardial infarction,MI)患者预后关系。方法:前瞻性研究分析2009年6月至2012年9月期间入住我院心内科或内分泌科158例半年内有MI病史的患者根据有无2型糖尿病分为糖尿病合并MI患者组(80例)与单纯MI患者组(对照组,78例)。两组患者均在6个月内因急性MI在我院行经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)并置入药物涂层支架。观察两组患者PLA2的水平,分析其与患者心功能的变化及预后的相关性。两组患者行2年随访,随访结束后通过K-M模型观察组间心血管不良事件(major adverse cardiovascular events,MACE)的发生率,将单因素分析有意义的变量包括,PLA2、高血压、低密度脂蛋白、吸烟、性别、年龄、超敏C反应蛋白、肾小球滤过率、白细胞计数等纳入Cox比例风险回归模型对预后进行多因素分析。结果:糖尿病合并MI组患者PLA2的水平显著高于单纯心肌梗死组(11.67±4.26μg/L vs.5.36±1.1μg/L,P0.001)。这些患者外周血中CD14+单核细胞亦显著高于单纯心肌梗死组(53.36%±17.41%vs.35.23%±11.57%,P0.001)。糖尿病合并MI组患者血浆磷脂酶A2的水平与患者心功能呈负相关(r=-0.25,P=0.02),而单纯MI患者组未显示统计学意义(r=-0.20,P=0.07)。Kaplan-Meier生存分析显示糖尿病合并MI患者主要心血管不良事件的发生率明显高于单纯心肌梗死组(P=0.046)。通过COX模型分析影响生存因素发现血浆磷脂酶A2(HR:4.29,95%CI:2.305-7.975,P0.001)仍与这些患者心血管不良事件发生显著相关。结论:血浆磷脂酶A2反应糖尿病合并MI患者体内的炎症剧烈程度,高水平的血浆高磷脂酶A2与糖尿病合并MI患者的预后密切相关。     

腹腔镜胆囊切除术中Rouviere沟引导定位的临床应用价值

目的:研究Rouviere沟引导定位对腹腔镜胆囊切除术的应用价值。方法:选择2010年7月至2014年10月在我院进行胆囊切除术的患者300例,根据手术方式不同将患者分为研究组和对照组,每组各150例。研究组患者在Rouviere沟引导下行腹腔镜胆囊切除术,对照组采用传统定位手术。观察并比较两组手术时间、并发症及手术效果。结果:研究组患者Rouviere沟分型为开放型89例(59.33%)、融合型32例(21.33%)、缺失型29例(19.33%),分型的性别构成存在统计学意义(P0.05);与对照组比较,研究组手术时间较短、并发症少和中转开腹率低,差异有统计学意义(P0.05)。两组术后未出现任何病例胆管损伤和手术死亡,手术后恢复较好。结论:Rouviere沟引导定位行腹腔镜胆囊切除术的临床效果较好,值得临床进一步推广应用。     

NID1促进人卵巢癌细胞OVCAR-3侵袭转移及分子机制的研究

Nidogen-1(NID1)是新发现的一个候选卵巢癌诊断标志物,该研究旨在初探其在卵巢癌细胞中的生物学功能。首先构建稳定过表达外源NID1的人卵巢癌细胞系OVCAR-3,然后采用划痕实验和Transwell迁移和侵袭实验检测细胞的迁移侵袭能力,并通过荧光定量PCR和Western blot检测细胞中上皮–间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白和ERK/MAPK通路蛋白的表达情况。结果显示,与空载细胞相比,稳定过表达NID1的OVCAR-3细胞其划痕愈合能力、细胞迁移和侵袭能力均明显增强。较之空载细胞的上皮细胞样外形,稳定过表达NID1的OVCAR-3细胞呈间质细胞样外形,其上皮细胞标志分子E-cadherin表达下调,间质细胞标志分子(包括Vimentin和N-cadherin)和EMT相关转录因子Twist-2表达上调。此外,稳定过表达NID1的OVCAR-3细胞中ERK1/2的磷酸化水平升高,经ERK/MAPK通路的抑制剂U0126下调ERK1/2的磷酸化水平后其Ecadherin、Vimentin、N-cadherin和Twist-2表达水平出现逆转。这些结果提示,NID1可能通过激活ERK/MAPK通路促进卵巢癌细胞的EMT过程,进而增强其侵袭转移的能力。     

鸭源致病性大肠杆菌Ⅰ型菌毛pilA基因的原核表达及重组蛋白对强毒攻击的免疫保护作用

根据GenBank中人源大肠杆菌pilA基因序列,用OLIGO6.0设计PCR引物,从鸭源致病性大肠杆菌GH1.2中扩增到pilA基因并将其克隆至pMD18-T载体,经PCR、酶切和DNA测序鉴定后,将鸭源致病性大肠杆菌pilA基因正向插入原核表达载体pET-32a（+）的BamHⅠ和HindⅢ位点间,成功构建了重组表达质粒pET-32a-pilA。重组表达质粒pET-32a-pilA转化表达宿主菌BL21（DE3）,用IPTG诱导,表达出了大小约为36kD的pilA重组蛋白。表达产物用镍柱亲和层析纯化,与等量弗氏佐剂混合制备pilA重组蛋白疫苗,分别在1日龄、8日龄时两次对雏鸭进行免疫,二免后2周测定鸭血清中的ELISA抗体效价,并以10⁹PFU同源菌株GH1.2攻毒,根据攻毒后鸭的死亡率、E.coli分离率和各组织器官的病变等级来判定pilA重组蛋白的免疫保护效果。结果pilA重组蛋白免疫鸭的血清中ELISA抗体效价为1∶12800,全菌灭活苗免疫组的血清ELISA抗体效价为1∶200;同源菌株攻毒后,pilA重组蛋白免疫保护组鸭的死亡率、E.coli分离率和各组织器官的病变程度均比攻毒对照组下降且差异显著或极显著,与全菌灭活苗免组比较差异不显著。表明pilA重组蛋白对同源菌株GH1.2的感染具有一定的保护效果     

红莲型水稻细胞质雄性不育花粉总蛋白质初步比较分析

采用固相pH梯度/SDS-PAGE双向电泳对红莲型细胞质雄性不育水稻的不育系(YTA)和保持系(YTB)二核期花粉总蛋白质进行了分离,通过银染显色,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱。用PDQuest2DE软件可识别约1500个蛋白质点,其中差异表达的蛋白质点数为120。将其中15个差异点采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption/ionizaton time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)进行了肽质指纹图分析,通过采用Mascot软件对MSDB数据库查询,其中7个蛋白质点得到了鉴定。YTA相对于YTB有部分参与物质和能量代谢的蛋白质缺失或表达量降低,这些蛋白质分别是水稻线粒体H -转运ATPase(H -ATPase)α链、盐诱导型膜联蛋白、线粒体NAD -依赖型苹果酶和磷酸核糖焦磷酸合成酶等。这些蛋白质的表达下调或缺失可能与线粒体提供能量不足而导致的花粉不能正常发育有关。线粒体电压依赖性阴离子通道(VDAC)这一重要蛋白质在YTA中的上调表达有可能与花粉败育过程中细胞的程序性死亡相关。     

施硫对'豫麦50'籽粒灌浆特性及产量的影响

选用弱筋小麦品种‘豫麦50’为材料,通过大田试验研究了较高供氮水平下（施纯氮330kg／hm^2）施用低量（S20kg／hm^2）、中量（S60kg／hm^2）和高量（S100kg／hm^2）硫肥对小麦籽粒灌浆特性和产量的影响。结果显示,不同施硫处理的小麦籽粒灌浆进程均呈“慢-快-慢”的S型曲线,拟合的Logistic方程决定系数均大于0．9932,并达到极显著水平;灌浆持续期（T）、渐增期平均灌浆速率（V1）,快增期和缓增期持续期（T2、T3）、灌浆期各阶段干物质积累量（m1、m2、m3）和理论最大千粒重（K）均随施硫量增加而提高,并以中硫处理的各项灌浆参数表现较优;中硫处理的千粒重（46．47g）和籽粒产量（7416．0kg／hm^2）显著高于低硫处理,极显著高于对照（不施硫）和高硫处理。表明在当前较高施氮水平下,每公顷施纯硫60kg可有效改善小麦灌浆特性,显著提高籽粒产量。