排序方式: 共有23条查询结果,搜索用时 15 毫秒
21.
利用λRed重组系统和pBAD原核表达载体构建鼠伤寒沙门菌spvBC质粒毒力基因修饰菌株,为深入探究沙门菌毒力基因spv的功能和致病机制及宿主抗感染免疫提供工具菌。以pKD4为模板,PCR扩增含spvBC同源臂的卡那霉素抗性基因以构建同源打靶片段,再将其电转入含有质粒pKD46的鼠伤寒沙门菌中进行同源重组,随后将质粒pCP20电转导入阳性转化子,消除卡那霉素抗性基因,PCR鉴定敲除株的构建。PCR扩增含酶切位点的spvBC基因片段,扩增产物与原核表达载体pBAD/gⅢ分别双酶切后连接构建pBAD-spvBC重组质粒,PCR筛选阳性菌落并测序鉴定。将构建成功的pBAD-spvBC重组质粒电转导入spvBC敲除株中,Western blot测定不同浓度L-阿拉伯糖诱导SpvB和SpvC蛋白表达情况。PCR结果表明鼠伤寒沙门菌spvBC基因敲除成功;PCR及测序结果表明pBAD-spvBC重组质粒构建成功,Western blot结果表明13 mmol/L L-阿拉伯糖可诱导SpvB和SpvC蛋白正常表达。λRed重组系统可用于沙门菌质粒上大片段基因的敲除,pBAD原核表达载体可用于沙门菌质粒上大片段基因的回补,丰富了细菌质粒的基因修饰和编辑策略。 相似文献
22.
23.
鼠伤寒沙门菌的致病基因 总被引:3,自引:0,他引:3
在鼠伤寒沙门菌(鼠伤寒杆菌STM)与宿主相互作用过程中,有众多的致病基因参与。这些基因少数位于毒力相关的大质粒上,绝大多数位于染色体上的病力岛目前已发现了3种毒力岛(SPI-1,SPI-2,SPI-3)和一些病力小岛,这些特殊基因构成了其致病性的分子基础。此外,它们还具有复杂,重叠的调节网络,可将环境信息传至调节蛋白,使基因表达随其感染宿主时动态环境的变化而变化。 相似文献