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91.
蛋白芯片生产用醛基化玻片制备的条件优化及初步检定 总被引:6,自引:0,他引:6
建立一种以玻片为基质的蛋白芯片制备的优化及检定方法。将经过清洗处理的玻片,用不同浓度的氨基硅烷试剂和戊二醛试剂,在不同的时间内,进行氨基化和醛基化处理,通过蛋白结合强度与处理时间及溶剂浓度的动力学相关性分析,确定最佳的优化条件,将不同浓度梯度的人IgG抗体结合于该玻片表面,经过洗涤、封闭,再加入Cy3荧光标记的二抗,孵育,洗涤后检测各点的荧光强度,确定其线性范围及其检测灵敏度。氨基硅烷试剂浓度为5%,作用时间为30min;戊二醛试剂浓度为2.5%,作用时间为60min时,蛋白结合强度达到饱和。蛋白芯片在2~2×4-7mg/ml浓度范围内有良好的线性,能够检测出人IgG的最低浓度为2×4-8mg/ml。 相似文献
92.
为研究水杨酸(SA)和霜霉病两种处理诱导黄瓜PCD过程中线粒体相关基因的表达差异及其引发的黄瓜叶片PCD发生方式。选择长出4片真叶的黄瓜植株为试材,用10 mmol/L SA处理叶片,用5×105-10×105个孢子囊/m L的霜霉菌菌液接种叶片,分别取SA处理0、3、12和24 h及接种菌液0、36、72和96 h的叶片提取RNA,用q RT-PCR技术分析16个线粒体相关基因的表达动态。实验结果表明:16个基因在SA处理和霜霉病接种后都表达,呈现相似或相悖的表达趋势,说明SA诱导的PCD相关基因与霜霉病诱导的PCD信号通路有明显的相互联系,其中11个基因在霜霉病处理中结果与SA处理相似皆为上调,5个基因在SA处理中为上调表达,在霜霉病处理过程中却是下调表达,这也表明SA和霜霉病引发抗病信号途径存在差异,从而使黄瓜叶片PCD发生方式不同。通过查找文献分析16个基因的功能及研究现状,这些基因属于4个功能类群,主要包括参与线粒体膜转运、细胞呼吸作用、蛋白质合成、折叠和转运、线粒体信号转导以及其他或未知功能。 相似文献
93.
该研究以14~18天胎兔为试验对象,体外分离培养扩增原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs),观察其形态变化及集落形成过程。用AKP染色(alkaline phosphatase staining)及分子生物学等方法鉴定兔PGCs,结果均为阳性,将兔PGCs分别接种于鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibroblast,MEF)、兔胚胎成纤维细胞(rabbit embryo fibroblast,REF)制成的不同密度饲养层来确定种属跟密度对体外培养兔PGCs的影响。结果显示,兔PGCs接种于用同源胚胎成纤维细胞所制成的密度为6×104的饲养层上所得到的集落个数最多,集落形态最好,分化速度较慢。 相似文献
94.
探索恒河猴骨髓间质干细胞(MSC)的体外分离培养方法,为其应用提供实验基础。取恒河猴骨髓细胞悬液,经梯度离心去除大部分血细胞,取含有MSC的中间单核细胞层,在含10%胎牛血清及1 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子的L-DMEM中培养扩增,并不断换液去除杂细胞,经过18 d的原代培养,获得呈致密单层生长的MSC,其形态为较规则的长梭形细胞,排列有方向性,呈现一定的漩涡状、辐射状生长趋势。将原代细胞以1∶2传代,传代培养后期,细胞增殖速度逐渐变缓,细胞形态逐渐出现三角形、多边形及扁平宽大形等不规则形态。结果显示,恒河猴骨髓间质干细胞可在体外进行传代培养,但需进一步优化其培养条件。 相似文献
95.
96.
转基因在玉米中的遗传分离与整合特性的研究 总被引:23,自引:0,他引:23
用PCR和DNA分子杂交方法研究了转基因Bt在3种不同方法获得的8个转化体后代中的遗传分离、整合性质及其稳定性,结果表明:(1)转基因在大多数转化体后中呈简单的孟德尔遗传;在R1至R2代,部分家系中转化体比例偏低,有的发生转基因丢失,但到R3代以后均趋于正常的孟德尔遗传方式,在群体中固定下来;(2)转基因在不同转化体中的整合类型有一定差异,但整合的位点和拷贝数都较少,且多呈串联或紧密连锁的整合;( 相似文献
98.
目前一般认为,衰老与长寿的机理是受综
合性而非单一因素的影响,其中遗传是一个公
认的重要或主要因素〔7,9,12,15,161。研究各种族或各
地区人体白细胞抗原(HLA)与长寿老人(>90
岁)的关系,有可能对衰老与遗传的关系提供
有价值的资料及进一步研究的线索。国外对
HLA与衰老及寿限的关系尚无一致的意见[5,810
鉴于遗传可能仅在极端长寿对象中方可显示其
对寿限的效应‘,,, 选择长寿老人作为观察对象
可能较为适当[141。国外应用长寿老人作HLA
与寿限相关性的探讨,只在近年有少数资
料17,8,10,141,国内尚未见到这方面的报道。我们
于1983年检查了50例长寿老人,8例高龄老
人(80-89岁)的HLA 分型,并与210例2 0-
知岁组对照比较,同时用化学比色法测定红细
胞超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)
含量及其他有关检查。兹将结果分析讨论如
下。 相似文献
99.
高等师范院校"植物生理学实验"课程改革初探 总被引:2,自引:0,他引:2
在高等师范院校(以下简称高师)生物专业课中“植物生理学”是与中学生物特别是高中生物联系最密切的课程之一,该课程的实验教学不仅是理论课教学的重要补充,而且是培养学生操作能力、观察能力、综合分析能力和创新能力的主要 相似文献
100.
蔗糖非发酵相关激酶(sucrose non-fermenting related protein kinases, SnRKs)是广泛存在于植物中的一类Ser/Thr蛋白激酶,在植物的生长、发育、代谢和抗逆等方面具有重要调节作用。大豆(Glycine max L.)基因组中含有4个SnRK1同源基因,其中GmSnRK1.1和GmSnRK1.2为两个主要表达基因,可能参与大豆多种抗逆途径。为解析大豆GmSnRK1.1和GmSnRK1.2对ABA及碱胁迫的响应,本研究构建了双靶点CRISPR载体定向敲除GmSnRK1.1和GmSnRK1.2基因,利用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)介导大豆遗传转化,获得双基因敲除突变体毛状根,经测序鉴定双基因突变率为48.6%;同时,利用实验室前期构建的植物超量表达载体获得超量表达GmSnRK1基因大豆毛状根。经25 μmol/L ABA处理15 d,对照组和超量表达毛状根的生长受到明显抑制,其根长与根鲜重均显著低于双基因敲除突变体毛状根;经50 mmol/L NaHCO3处理15 d,对照组和双基因敲除突变体毛状根的生长受到明显抑制,其根长与根鲜重均显著低于超量表达毛状根。本研究建立的CRISPR/Cas9系统能够有效地对大豆进行GmSnRK1.1和GmSnRK1.2双基因敲除,基因敲除突变降低了植物对ABA的敏感性及对碱胁迫的耐性,研究结果初步说明SnRK1激酶在植物响应非生物胁迫中具有重要作用。 相似文献