成年大鼠雪旺细胞的快速扩增

采用接种雪旺细胞的可降解导管修复外周神经损伤是一种有望替代自体神经移植的方法。如何在短期内利用病人少量的神经碎片获得大量雪旺细胞是该方法用于临床的关键。以大鼠坐骨神经为模型,利用雪旺细胞增殖的内在机制,探索出一种快速增殖成年雪旺细胞的方法。采用预变性7d的坐骨神经,用酶消化分离出雪旺细胞,接种在层粘连蛋白包被的培养瓶中,经过7d的培养,获得纯度为96％、细胞密度为600个／mm^2的雪旺细胞,雪旺细胞的纯度和密度明显高于对照的新鲜神经。未使用霍乱毒素、毛喉素等促有丝分裂剂和抑制成纤维细胞的基因毒素,符合临床使用要求。结果表明,可以利用少量的损伤神经碎片在短期内获得大量可用于临床的雪旺细胞。     

骨髓基质干细胞与雪旺细胞共培养移植治疗脊髓损伤的研究

脊髓损伤是严重的中枢神经系统疾病,脊髓损伤致使大量神经细胞缺失、凋亡,如何补充缺失的神经细胞,建立有利轴突再生的微环境成为脊髓损伤治疗的关键。雪旺细胞（schwann cells,SCs）分泌的多种神经营养因子,能维护神经元的存活及挽救凋亡的神经元。骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）具有多向分化潜能,作为种子细胞替代缺失的神经元。     

人脐带干细胞来源的外泌体促进体外培养雪旺细胞迁移的研究

目的:外泌体是活细胞分泌的来源于多囊泡体的膜性囊泡,其主要作用包括携带与运输。雪旺细胞是周围神经再生中非常优秀的种子细胞,但其迁移能力较差,影响修复效果。本文旨在探讨外泌体和雪旺细胞共培养是否可以促进雪旺细胞迁移。方法:本实验通过分离纯化人脐带干细胞外泌体和大鼠坐骨神经雪旺细胞并鉴定,随后将其共培养于Transwell小室观察雪旺细胞迁移率。结果:通过人脐带干细胞超高速离心法得到的外泌体高表达干细胞标志物CD44(92.2±3.6%)、CD73(99.1±0.6%),并且低表达单核细胞表面抗原CD14(0.5±0.06%)以及造血干细胞表面抗原CD34(0.4±0.07%),外泌体鉴定高表达CD81和CD9;雪旺细胞培养鉴定纯度达(92.3±2.7)%;均符合实验要求。通过Transwell小室实验发现外泌体可以明显促进雪旺细胞的迁移,并且具有一定剂量关系。结论:外泌体可以提高雪旺细胞的迁移能力,从而使雪旺细胞在组织工程领域中的应用产生巨大突破。     

大鼠脂肪干细胞向雪旺细胞诱导分化能力的研究

目的：研究脂肪干细胞（ADSCs）向雪旺细胞的诱导分化,为神经组织工程提供新的种子细胞。方法：取SD大鼠项背处的皮下脂肪,分离出脂肪干细胞并培养传代,流式细胞仪检测细胞表面特异标记CD29,CD34,CD44,CD45,CD90,以评价干细胞的生物学特性;采用b-FGF和forskolin等诱导脂肪干细胞向雪旺细胞分化,光镜观察诱导后细胞形态的变化;免疫荧光染色鉴定雪旺细胞特异性标记物S100、P75和GFAP的表达;PCR检测诱导前后雪旺细胞特异性标记物S100、P75的表达。结果：分离培养的鼠脂肪干细胞CD29、CB90表达呈阳性,而CD34、CD44和CD45表达呈阴性,具有脂肪干细胞的生物学特性;脂肪干细胞经过胶质细胞生长因子的作用,光镜下发现诱导的细胞形态与雪旺细胞相似;免疫荧光染色S100、P75和GFAP阳性;RT-PCR结果显示诱导的雪旺细胞标记物S100和P75表达上调。结论：脂肪干细胞可诱导分化成雪旺细胞,其表型和分子特征与雪旺细胞相似,诱导分化的脂肪干细胞是一种理想的神经组织工程的种子细胞。     

脂肪干细胞上清液培养雪旺细胞的实验研究

目的:研究应用脂肪干细胞上清液培养新生小鼠雪旺细胞的可行性。方法:取新生(出生5-7天)C57BL/6小鼠的坐骨神经,采用0.2%的复合胶原酶NB4消化法分离获取细胞,然后应用雪旺细胞条件培养基(SCCM)和C57BL/6小鼠的脂肪干细胞上清液(ADSC-CM)分别培养雪旺细胞。用0.2%复合胶原酶NB4差速分离纯化这两种方法培养的雪旺细胞,每48 h纯化1次,共进行2次纯化。应用P75免疫荧光染色方法鉴别两组P2代雪旺细胞并比较两组雪旺细胞的纯度和生长情况。结果:脂肪干细胞上清液培养的雪旺细胞纯化两次后,数量明显增多,其纯度与雪旺细胞条件培养基相比没有明显差异(P0.05)。结论:脂肪干细胞上清液可以较好的培养雪旺细胞,可以作为一种新的廉价方便的培养基代替雪旺细胞条件培养基来培养许雪旺细胞。     

NGF通过抑制内质网应激途径保护SCs在高糖环境诱导的凋亡

已知神经生长因子 (nerve growth factor, NGF) 对糖尿病外周神经病变 (diabetic peripheral neuropathy, DPN) 患者具有良好的治疗效果,内质网应激 (endoplasmic reticulum stress, ERS) 在调控DPN 的发生发展方面扮演着重要的角色。然而,二者间的关系未知。本研究以30 mmol/L的高糖处理RSC-96大鼠雪旺细胞 (RSC96 Schwann cells, SCs),模拟DPN患者外周神经的内环境。研究结果证实,在高糖条件下,NGF通过抑制SCs内 ERS的过度激活进而保护SCs的存活且这种抑制作用依靠P13K/AKT/GSK-3β和ERK1/2两条信号通路的调节实现。MTT检测细胞的存活率,结果显示高糖环境培养的SCs在24 h发生最佳程度的抑制,且此时间点加入的NGF浓度为50 ng/mL 时,其存活率最高。Western 印迹检测ERS和相关蛋白质的表达揭示,高糖能够过度激活SCs内ERS蛋白 (GRP-78、ATF-6、ATF-4、XBP-1、CHOP),给予 50 ng/mL的NGF处理后,ERS蛋白的表达水平大幅下调并接近正常,且此时p-AKT、p-ERK1/2、p-GSK3β蛋白的检测水平明显升高。流式细胞术检测细胞凋亡显示,NGF能显著抑制SCs的早期凋亡。上述结果证明,高糖诱导SCs的凋亡增加是由于自身的ERS被过度激活,NGF可通过调节P13K/AKT/GSK-3β和ERK1/2两条信号通路来抑制ERS的过度激活,达到保护SCs存活的目的。此机制为临床治疗 DPN 提供新的理论基础。     

成年猴雪旺细胞的在体增殖和体外迁移的研究

为了探讨成年猴雪旺氏细胞的在体增殖和体外迁移的能力,我们对用神经结扎术结扎的A组6只3-13岁雄性恒河猴的腓肠神经进行植块培养,部分细胞培养在聚酯纤维上,2-4周后作抗S-100抗体免疫组化染色和电镜观察;B组2只未做结扎的新生猴腓肠神经培养作为对照.结果显示A组雪旺氏细胞平均在培养的第5天从神经段中迁出,年幼者早于成年猴;细胞在纤维上以螺旋状向前迁移;雪旺氏细胞抗S-100蛋白抗体染色阳性;电镜显示,雪旺氏细胞包卷纤维,但是,未见髓鞘形成.B组神经段培养2周仍无雪旺氏细胞迁出.研究表明,结扎神经使其发生瓦勒氏变性,经植块培养、纯化,能够获得可用于移植的成年猴的雪旺氏细胞.     

《科学》：袋獾面部肿瘤起源于雪旺细胞

一个国际科研团队12月31日公布研究报告称,在野生袋獾种群中肆虐了10多年的致命癌症——袋獾面部肿瘤起源于雪旺细胞,这一发现将有助于开发针对这一恶性肿瘤的疫苗和疗法。这项研究成果将刊登在2010年1月1日出版的美国新一期《科学》杂志上。     

新生大鼠雪旺细胞原代培养方法改良

对常用的阿糖胞苷处理及差速贴壁法进行大鼠雪旺细胞原代培养及纯化的方法进行改进。先用阿糖胞苷处理杀死大部分的成纤维细胞,再用抗-Thy-1.1抗体和兔补体处理去除残余成纤维细胞,获得纯化的雪旺细胞。此外,我们对抗-Thy-1.1抗体和兔补体的浓度、处理时间等都进行了改进,避免了由于雪旺细胞状态不好而引起的大量雪旺细胞死亡。此方法能够将雪旺细胞的纯度由90%提高到99%。     

带培养室的倒置显微镜下人雪旺细胞形态和运动的观察

为了显示体外培养条件下三维结构上人雪旺细胞的形态和运动方式,将引产人胎儿坐骨神经的雪旺细胞培养在聚酯纤维上,用带培养室的显微镜观察。结果显示人雪旺细胞呈梭形,绕聚酯纤维作螺旋式迁移;有的细胞同时抓住两根纤维;在相对静止期,细胞虽无位置的迁移,但有频繁的形态变化;分裂后的子细胞有形态和运动时相的不同。