人胚肺二倍体成纤维细胞端区长度的代龄变化

以体外培养的不同代龄的人胚肺二倍体成纤维细胞为实验对象,ＨｅＬａ细胞为对照,分别观察其端区长度随代龄的变化。结果显示年轻２ＢＳ细胞端区长度约９．１３ｋｂ;衰老２ＢＳ细胞端区长度约７ｋｂ,丢失约２ｋｂ。２ＢＳ细胞端区长度随代的增长而缩短。     

芥子气暴露的确证：家兔皮肤染毒后血红蛋白N端缬氨酸加合物的同位素稀释-NCI-GC/MS溯源性检测

素有＂毒剂之王＂之称的芥子气（HD）是目前危害最大的化学战剂之一,染毒后在体内可产生不同类型的特征性生物标志物,其对中毒诊断、溯源性分析以及毒理机制等研究有着重要的意义.本文首先采用同位素稀释-NCI-GC/MS分析方法监测和鉴定了HD体外全血染毒后产生的血红蛋白N端缬氨酸加合物（HETE-Val）;其次,研究了不同剂量HD（0.02～0.15LD50）经皮染毒家兔体内HETE-Val的时效、量效关系.结果表明,HETE-Val与家兔中毒剂量间有良好的量效关系,而时效关系表明染毒后15min内即可产生并检测到HETE-Val,一周内达到最大,随后逐渐下降,但至染毒后第103天仍可监测到该加合物.与血红蛋白N端缬氨酸加合反应的HD仅占HD染毒总量的～0.15‰,与家兔血液反应的HD约占HD染毒总量的～1%.表明HETE-Val是一种重要的生物标志物,并可应用于HD暴露的确证和化学武器核查的溯源性检测.     

致病性钩端螺旋体的三个新血清型

自云南省分离出3株(M48、A31、A82)钩端螺旋体,经鉴定它们分别属于3个新血清型。M48系1960年从耿马县猪肾分离,A31与A82分别于1962、1970年自勐腊县病人血培养物中分离。拟分别命名为耿马型(M48)、版纳型(A31)和勐捧型(A82)钩端螺旋体[Leptospirainterrogans serovars gengma (M48),banna (A3I)和mengpeng (A82)]。其中耿马型应属于塔拉索夫血清群;版纳型和勐捧型的血清学性质界于塔拉索夫和歇尔曼二群之间,其血清学归属尚难肯定。     

无色杆菌蛋白酶Ⅰ肽链N端作用的突变研究

无色杆菌蛋白酶Ⅰ是高度专一于赖氨酸的丝氨酸蛋白酶,比较其它典型同类蛋白酶的一级结构,该酶的成熟体肽链在Ｎ端和Ｃ端分别长出９个和２６个氨基酸残基。在其Ｎ端设计和构建一些突变体。它们分别具有缩短或延长的Ｎ端。这此突变体低于天然酶的活性和稳定性的结果揭示,Ｎ端这部分延长在稳定该酶的活性构象方面起着重要作用。     

半胱胺盐酸盐在大口黑鲈饲料中的应用及耐受性评价

实验结合营养学和毒理学的实验方法, 对饲料中不同剂量半胱胺盐酸盐预混剂(Cysteamine Hydrochloride,CSH,含量27%)对大口黑鲈(Micropterus salmoides)生长性能、血液生理生化指标、消化酶活性和器官组织学的影响进行了评估, 研究其对大口黑鲈生长性能的影响, 并对CSH作为大口黑鲈饲料添加剂的安全性进行评价。结果表明:CSH添加量为648 mg/kg组的鱼体特定生长率和摄食率以及肠道胃蛋白酶、胰蛋白酶活性均显著高于对照组(P0.05), 该组大口黑鲈肝脏和肠道显示轻微损伤。添加32400 mg/kg组, 各项生长指标、存活率、胃蛋白酶和胰蛋白酶活性均显著小于对照组(P<0.05)。根据大口黑鲈生长、消化酶活性及组织切片结果确定受试物(含CSH27%)对大口黑鲈56d最大未观察到有害作用剂量(NOAEL)为24 mg/kg.w.d, 折算CSH对大口黑鲈56dNOAEL为6.5 mg/kg.w.d。       

中国人雄激素受体N端转示激活区的测序及突变检测

雄激素受体（ａｎｄｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＡＲ）Ｎ端转录激活功能区（ＡＦ１）是ＡＲ发挥转录激活所必需的。用４对引物（Ａ３－Ａ４）ＰＣＲ扩增２０例中国正常男性ＡＲ的ＡＦ１,双链ＤＮＡ循环测序以确定正常中国人ＡＲ的ＡＦ１的核苷酸顺序。在此基础上,用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析和双链ＤＮＡ循环测序法对２例雄激素抵抗征（ＡＩＳ）患者外周血白细胞和１５例前列腺癌（ＰＣ）患者癌组织中ＡＲ的ＡＦ１区进行突变检测。     

钩端螺旋体脂多糖非特异性抗感染的研究II.非特异性保护作用的机制

对钩端螺旋体脂多糖提高机体非特异性抗感染力的作用机制进行了研究。试验结果表明,L—LPS和E—LPS均能增强豚鼠腹腔巨噬细胞的非特异性吞噬功能。两者激活小鼠腹腔巨噬细胞,使胞体增大,并提高细胞内酸性磷酸酶的含量与活性。L—LPS可能对酶的合成具有较强的作用,而E—LPS相对增强酶的活性。两者具有免疫调节作用。小鼠在免疫3d后接受L—LPS,产生免疫佐剂作用,而在免疫前24h给予L—LPS,却导致免疫抑制。     

人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的克隆及在毕赤酵母中的表达

采用加长引物5＇端的方法克隆了hGM-CSF的编码基因,克隆过程中对该基因的局部做了密码子优化。然后克隆进毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K,电击转化毕赤酵母。PCR、SDS-PAGE与Western blotting证实hGM-CSF已整合进酵母基因组,摇瓶水平粗蛋白表达量达389mg/L,动物实验证实蛋白产物活性正常,SDS-PAGE与N-糖苷酶F去糖基化分析发现hGM-CSF被糖基化。     

重组人粒细胞集落刺激因子的N端氨基定点PEG化修饰

尽管重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)具有重大的治疗价值,然而在实际应用却受到体内半衰期过短因而需要频繁重复注射的限制．为了解决这一问题,我们利用两种不同分子量（5 kD和 20 kD）的单甲氧基聚乙二醇丙醛（mPEG-PAL）对rhG-CSF的N端氨基进行了定点PEG化修饰．通过正交实验的统计学方法得到了最适修饰条件．研究发现,PEG化后的rhG-CSF具有了更高的体外稳定性,其体内活性也得到了很大提高,体内作用时间得到很大延长．因此,对于rhG-CSF的N端氨基定点PEG化修饰,可以显著提高rhG-CSF的临床应用价值．