化学诱导的B95-8细胞中TK酶的分离和性质研究

巴豆油和正丁酸钠(nSB)诱导Raji和B95-8细胞株生成胸腺嘧啶核苷激酶(TK),其粗提液,经DEAE—纤维素柱层析,可分成两个性质不同的TK活性峰—峰Ⅰ和峰Ⅱ:(1)峰Ⅰ是穿过峰,峰Ⅱ为洗脱峰,在120mMol/L从K_2HPO_4缓冲液时洗脱下来;(2)峰Ⅱ含量在病毒生产性细胞B95-8中高于非生产性的Raji细胞;(3)B95-8细胞经联合诱导48小时后,峰Ⅱ比活性最高;(4)TTP对峰Ⅰ和峰Ⅱ的抑制效应不同,两峰利用GTP能力也不同;(5)PAGE结果表明:峰Ⅰ的Rm值为0.044,峰Ⅱ呈现两条带,Rm值分别为0.015和0.276;(6)峰Ⅰ的Km值为0.86μMol/L,峰ⅡKm值为0.29μMol/L。根据以上的结果,我们认为:峰Ⅰ是细胞TK(C-TK),而峰Ⅱ具有许多疱疹病毒TK的特性,因此,峰Ⅱ是EB病毒相关TK(EBV-TK)。     

赤子爱胜蚯蚓(Eisenia Foetida)纤溶酶的研究,Ⅳ纤溶酶组成成分的分子量测定

本文报告了用SephadexG—100柱层析法纯化样品和聚丙烯酰胺凝胶电泳测定纤溶酶组成成分的分子量的研究结果。经柱层析分离的纤溶酶电泳测定分子量结果为11条带,分别为68,000、49,000、42,000、41,000、36,000、29,000、27,000、26,000、25,000、21,000和12,000。而纤溶酶的主要组分集中在21.000与42.000之间,为其活性组分。     

黄连木叶粗多酚的纯化及其抗氧化研究

采用硅胶柱层析法对黄连木叶粗多酚进行纯化,并且对纯化后的多酚、单宁、黄酮组分进行测定。结果表明,纯化产物中的多酚、单宁、黄酮含量分别为1．0125g当量没食子酸每克样品、0．8600g当量单宁酸每克样品和0．1453g当量芦丁每克样品。与粗多酚相比,多酚含量提高了20．54％,单宁含量提高了13．53％,黄酮含量提高了12．03％。采用DPPH自由基清除法、FRAP总抗氧化法对纯化产物进行体外抗氧化活性检测。同时,以秀丽隐杆线虫（Caenorhabditiselegans）为模式动物检测纯化产物对胡桃醌诱导线虫体内活性氧（ROS）的抑制效应和对线虫存活率的影响。结果表明,黄连木多酚纯化产物体外抗氧活性强于黄连木叶粗多酚,强于维生素C,但稍逊于纯茶多酚;且能显著提高线虫的存活率和降低线虫细胞内ROS浓度。以上结果说明黄连木叶多酚是很好的天然抗氧化剂,具有在食品、医药、化妆品等领域广泛应用的潜力。     

ATP和钾离子对肌动蛋白与前纤维蛋白结合的影响及其在植物肌动蛋白纯化中的应用

根据ATP和钾离子影响肌动蛋白聚合及肌动蛋白及肌动蛋白与前纤维蛋白结合的实验结果,通过对以往报道的利用多聚脯氨酸-琼脂糖亲和柱层析法纯化植物肌动蛋白过程中ATP及钾离子浓度的改变,不需要加源前纤维蛋白。可得到较大量高纯度具活性的花粉肌动蛋白。SDS凝胶电泳、免疫印迹、电镜负染及紫外检测表明,所得肌动蛋白在纯度、聚合特性等方面均与原方法所得结果相同,肌动蛋白产率为原方法的73.5%,而整个肌动蛋白提纯过程所需时间缩短了1/3,节省了纯化重组前纤维蛋白所需的费用,消除了外源前纤维蛋白的使用对一些实验室的限制,而且同时得到了大量纯化的花粉前纤维蛋白。     

蝎毒抗癌组分SVⅡ分离法的优化研究

目的比较三种柱径的分子筛G-50凝胶层析柱分离东亚钳蝎蝎毒的柱效;并对分离所得组分作MTT（酶反应比色法）抗肿瘤活性作用研究,为从中研制和开发出高效、低毒的新型抗癌特效药筛选出目标组分。方法（1）采用三种规格的分子筛层析柱分离蝎毒;（2）HPLC色谱分析比较各组分的指纹图谱;（3）MTT法观察不同浓度（1、10、100mg／L）的蝎毒及其组分对四种肿瘤细胞（HL-60、A549、K562／ADR、K562／S等）的毒性作用。结果经过分子筛柱层析,可从蝎毒（Scorpion venom,SV）获取三个组分SVⅠ、SVⅡ、SVⅢ;经HPLC色谱分析,各组分明显含有四种以上单体成分;MTT法研究表明,SVⅡ对四种肿瘤细胞的细胞毒性较原毒强,剂量-效应关系较好,而SVⅠ、SVⅢ对四种肿瘤细胞抑制作用不明显。结论（1）利用大柱径的层析柱分离蝎毒的柱效较高;（2）组分SVⅡ是蝎毒抗癌的目标组分,且其对耐药细胞株（K562／ADR）的抑制作用比阳性对照组强,有待进一步的分离纯化,筛选出色谱纯的抗癌活性成分（多肽单体）。     

蛹虫草子实体多糖的分离纯化

目的:研究人工培养蛹虫草子实体多糖的分离纯化方法.方法:多糖经脱色、醇析、除蛋白及乙醇分级沉淀,采用Seph-adex G100柱层析纯化.结果:60℃脱色9h脱色率达70.72％.醇析最优条件为:无水乙醇,24h,4倍乙醇.Sevag法抽提30min重复6次除蛋白率达84.09％;抽提lh重复3次、6次除蛋白率分别为81.14％、84.47％,多糖损失率分别为27.03％、43.16％.木瓜蛋白酶除蛋白最优条件为70℃,1:10,2h,除蛋白率为25.67％.粗多糖经乙醇分级沉淀得2种粗多糖成分,分别经Sephadex G100柱层析可进一步纯化为3种较纯多糖成分.结论:采用乙醇分级沉淀及Sephadex G100柱层析纯化粗多糖可得到3种较纯多糖成分,纯化效果较好.     

胶陀螺的光敏活性组分

用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和丙酮对胶陀螺子实体进行梯度提取,得到的粗提物做光敏活性药理试验,结果表明:胶陀螺的氯仿和乙酸乙酯粗提取物有明显的光敏活性。将氯仿和乙酸乙酯的粗提物分别用不同比例的氯仿—甲醇进行反复柱层析,同时配合光敏活性药理试验,得到6个有光敏活性的组分,分别为c2、c3、c4、c5、c6和c11。将6个组分合并后继续分离,最终得到1个有橙黄色荧光点的成分,对其进行光敏活性药理试验,结果证明其为胶陀螺的光敏活性成分。     

(山王丌)岗通城虎化学成分的研究

<正> (山王丌)岗通城虎Aristolochia longgangensis C.F.Liang.民间用于治疗小儿高烧,损伤,虫伤等疾病。(山王丌)岗通城虎是一新种,其化学成分还未研究过。我们对其化学成分进行了研究,报告如下: 采用热乙醇提取其总成分,然后用冷乙醇溶解,再用石油醚洗涤,不溶物用硅胶柱层析     

固定化胰蛋白酶的快速制备

目的：快速制备高活力的固定化胰蛋白酶,用于转肽反应。方法：将壳聚糖与硅胶搅拌均匀,同时用戊二醛进行活化制成活化载体,再通过交联反应将胰蛋白酶固定至载体制备固定化胰蛋白酶。用正交法进行优化。结果：用快速工艺制得的固定化胰蛋白酶的活力单位为5990．5U/g,活力回收为16．7％,整个制备过程耗时21h。结论：快速工艺的制备过程较之改进前更为快捷简便,制备的固定化胰蛋白酶活力单位显著提高,利于工业应用。     

棉株根系伤流中的细胞分裂素类物质

棉株根系伤流有明显昼夜节奏,白天多,夜晚较少。白天中又以上午9～12时的伤流量为最高。伤流中CTK量及其浓度也以白天为高。在切除地上部4天以后,从蕾期和铃期棉株已不再能收集到伤流液,但盛花期棉株在切除地上部6天以后,仍产生了相当多的伤流,其中仍含有丰富的CTK类物质。盛花期棉株根系伤流量及其中CTK水平高于铃期棉株,提示铃期棉株根系活力已开始趋向衰老。根据Sephadex LH-20柱层析及高效液相层析鉴定出棉株根系伤流中的CTK类物质有Z,ZR,和IPA。