高效液相层析法纯化人胎盘谷胱甘肽硫转移酶

足月分娩的新鲜胎盘组织制成匀浆后,经高速离心、超速离心,谷胱甘肽(GSH)Sepharose 6B亲合层析,Amicon pM-10膜超过滤及高效液相层析,最终经SDS-PAGE鉴定,结果呈现单一亚基区带,其亚基分子量为25000。 根据我们现有高效液相设备条件,用ODS柱代替RadulovicL等报道的特异阴离子柱,用磷酸盐洗脱液代替含谷胱甘肽、二硫苏糖醇及氯化钾的梯度洗脱液,从人胎盘组织成功地制备了谷胱甘肽硫转移酶(GST)纯酶,全过程在15min内完成,保留时间及主峰面积的重复性均较理想,7次实验结果的变异系数为0.2％,最终纯化578.9倍。本研究为各种形式GST的纯化制备提供了一个新的、重复性好、分辨率高及回收理想的简易方法。     

中药金莲花质量标准的建立与优化

通过显微鉴别、薄层鉴别和含量测定试验对不同来源的金莲花药材质量控制进行研究。对不同来源金莲花粉末显微特征进行观察,以确定粉末显微鉴别特征;以主要活性成分牡荆素和荭草苷为指标,对不同来源的金莲花药材进行薄层鉴别和含量测定;初步确定了金莲花药材的粉末特征,建立了薄层定性鉴别和含量测定方法,8个不同来源的金莲花样品中,荭草苷含量为0.463%～0.933%,牡荆素含量为0.192%～0.283%。结果表明：薄层和显微鉴别可以很好地对金莲花药材进行定性,含量测定中牡荆素较稳定,可用于金莲花质量控制,而荭草苷含量差异较大,有待进一步增加样本量,才能制定合理的限度。     

高效养蛇方法

1　蛇住“楼房”最理想　　蛇类与人类一样 ,需要有个安全、舒适的居住环境。能否给蛇造个理想的窝 ,是人工养蛇成功的关键之一。因蛇是比较惰懒成性的野生动物 ,饱食一顿后盘踞在窝内连续几天 ,甚至十几天不动 ,直到腹内的食物完全消化掉 ,才会再次爬出窝外去喝水和觅食。鉴于这种情况 ,我们在多年的养蛇基础上设计了这种楼房式的“多层立体地下 (土 )蛇房”,蛇房深入地下 1～ 2 m左右 ,用砖有规律的层叠在一起 ,形成 9～ 1 4层的地下 (土 )蛇房 ,供蛇自由的选择它理想居住层次。此蛇房的应用不仅扩大了原有养殖面积 ,也扩大了存蛇量 ,储蛇…     

乌头类双酯型生物碱水解产物-苯甲酸的含量测定研究

目的:建立RP-HPLC测定乌头类双酯型生物碱水解产物苯甲酸含量的方法.方法:色谱柱:Waters C18(150×4.6 mm),流动相:甲醇-0.02 mol/L乙酸铵溶液(5∶95),检测波长:230 nm,流速:1.0 ml/min,柱温:30℃.结果:苯甲酸在0.432～3.888μg(r=0.9999)之间呈线性关系,苯甲酸加样回收率为98.62%(RSD=1.89%).结论:该方法简便、稳定、准确,可做为乌头类双酯型生物碱水解产物苯甲酸含量测定的方法.     

编码Synechococcus sp. PCC 7002 FNR 中FNR区的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

用ＰＣＲ的方法克隆出了编码蓝细菌Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓｓｐ．ＰＣＣ７００２ＦＮＲ中ＦＮＲ区的基因ｐｅｔＨＬ,克隆到达载体ｐＥＴ３ａ上,转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）后实现了大量表达。重组ＦＮＲ区（ｒＦＮＲＤ）经ＤＥＡＥＳｅｐｈｄｅｘＡ５０离子交换层析及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００凝胶层析得到大量的电泳均一的ｒＦＮＲＤ。Ｎ末端氨基酸序列分析表明,表达产物确为ｐｅｔＨＬ所编码。且起始Ｍｅｔ翻译后未被除去。ｒＦＮＲＤ与ｒＦＮＲ的吸收光谱相同,其黄递酶活性的最适ｐＨ和最适温度也相同。ｒＦＮＲＤ能在体外催化电子从Ｐ７００到ＮＡＤＰ＋的传递     

HPLC法测定神安颗粒中五味子醇甲含量的研究

以高效液相色谱法测定神安颗粒中五味子醇甲含量,建立神安颗粒多指标质量控制体系中脂溶性成分的控制指标。采用Kromasil C18色谱柱,流动相为甲醇-水(60∶40),检测波长为250 nm,流速为1.0 m L/min,柱温为室温,进样量为10μL。结果五味子醇甲进样量在0.15~6.0μg范围内与峰面积积分值线性关系良好(R2=1),平均回收率为97.38%(RSD=2.05%),测定神安颗粒中五味子醇甲含量约为1.30 mg/g。本方法简便、快捷、专属性强、重现性好,可用于神安颗粒天麻苷类成分的质量控制。     

不同地区苹果绵蚜对三种杀虫剂的抗性监测

【目的】了解苹果绵蚜Eriosomalanigerum对不同类别杀虫剂的抗药水平,为田间苹果绵蚜化学防控过程中的药剂选择提供理论基础。【方法】2018年6-7月间,采用玻璃管药膜法测定了3省14个地区苹果绵蚜对阿维菌素、高效氯氰菊酯和吡虫啉的抗药性。【结果】研究表明,西安杨凌地区苹果绵蚜种群对阿维菌素的抗性水平最低,LC50值仅为6.813 mg/L;烟台招远地区苹果绵蚜种群对阿维菌素的抗性水平最高,LC50值为79.496 mg/L。多数地区苹果绵蚜种群对高效氯氰菊酯的抗药水平较低,其中烟台龙口地区抗药水平最低,LC50值为4.341 mg/L,烟台栖霞地区抗药性最高,LC50值为37.689 mg/L。青岛即墨地区苹果绵蚜种群对吡虫啉的抗性水平最低,LC50值仅为5.261 mg/L;烟台招远地区苹果绵蚜种群对吡虫啉已经产生了中等水平的抗性(RR=10.859),LC50值为57.128 mg/L。不同虫态抗药性检测表明,除了烟台蓬莱地区的若蚜对阿维菌素和吡虫啉出现了抗药性提高的现象外,其它大部分苹果绵蚜3龄若蚜对药剂的抗性与成蚜相近。【结论】苹果绵蚜在北方大部分地区对常用杀虫剂的抗药性保持在低水平或敏感状态。在今后防治中应继续坚持交替轮换的用药原则,防止苹果绵蚜抗药性的产生。     

角毛壳菌几丁质酶基因chi58多点突变及在毕赤酵母中的高效表达

应用重叠延伸PCR技术(gene splicing by overlap extension PCR,gene SOEing),简称SOE-PCR对角毛壳菌(Chaetomium cupreum)的几丁质酶基因chi58进行多点突变.依据毕赤酵母密码子偏爱性,将毕赤酵母中编码Arg使用频率几乎为0的密码子CGC突变为使用频率高的AGA,构建了含有正确突变的酵母表达载体pPIC9K-chi58A,电转化毕赤酵母GS115,获得的重组酵母株在诱导120 h酶活力最高,平均可达101.71 U/mL±3.33 U/mL;其活力比未优化重组酵母株(31.83 U/mL±4.85 U/mL)提高了约3倍,且经10代传代培养后遗传稳定性良好.表达产物的SDS-PAGE分析表明,酶蛋白分子大小为58 kD.     

人重组白蛋白基因在巴斯德毕赤酵母中的高效表达

The yeast Pichia pastoris was transformed by the multi\|copy Pichia expression vector that can express secreted human albumin.The high level expression of cell line was selected after screening.The expression of human recombinant albumin in Pichia pastoris induced by different methods were compared.The retio of secreted human albumin is 80% in total secreted proteins and the expression level reaches as high as is 10g/L.     

板栗雏梢分化期内源激素的动态变化特征

以3个品种板栗上部芽为材料,采用石蜡切片法确定板栗雏梢分化进程,再运用高效液相色谱(HPLC)对雏梢分化期内源激素含量进行分析,探讨板栗内源激素与花芽分化的关系.结果表明:板栗雏梢分化进程可划分为冬前花序原基分化期、休眠期、冬后花序原基分化期、花簇苞片原基分化期和花簇原基分化期5个时期.在板栗整个雏梢分化过程中,各品种芽内源ZT含量总体呈"M"形双峰曲线变化,分别在11月中旬和翌年1月中旬出现峰值;芽内源GA3含量也总体呈双峰曲线变化,分别在冬前花序原基分化期(10月中旬)和冬后花序原基分化期(翌年2月中旬)达到峰值;内源ABA含量在冬前花序原基分化期达到最大值,之后呈逐渐下降,于1月中旬降到一个较低的水平并一直维持至花簇原基分化期(3月中旬).内源激素GA3/ZT值从9月中旬开始持续下降,于冬前花序原基分化过后下降到低水平状态并保持至花簇原基分化期.可见,在整个板栗雏梢分化过程中,较高浓度GA3有利于花序原基的分化,低水平的ABA有利于休眠期的解除和冬后花序原基的分化;内源激素GA3和ZT间的平衡关系在板栗雏梢分化的过程中起着重要的调控作用.