咖啡因预防阿尔兹海默病作用机制的研究

目的:探究咖啡因对阿尔茨海默病(AD)的预防作用。方法:乙醇提取茶叶中咖啡因;颈部皮下注射5%D-半乳糖生理盐水溶液,建立小鼠衰老模型;随机分为实验组(高、低剂量咖啡因)、阳性对照组、阴性对照组;另设正常对照组,连续给药4周。检测超氧化物歧化酶(SOD)以及丙二醛(MDA)的水平,取鼠脑海马组织以western blotting检测脑源性神经营养因子(BDNF)和胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)表达量,同时制作病理切片,行HE染色。结果:Western blot检测脑海马组织BDNF和p-ERK1/2的表达,阴性对照组的BDNF表达水平明显低于正常组、低剂量组和阳性对照组(P0.01);注射D-半乳糖的各组小鼠p-ERK1/2的表达明显低于正常组,阴性对照组与正常组比较,差异显著(P0.05)。模型组SOD活力明显低于正常对照组、高、低剂量咖啡因组和阳性对照组(P0.01),但MDA含量则相反。结论:咖啡因能提高衰老模型小鼠SOD活力,促进BDNF和p-ERK1/2的表达,延缓衰老进程,对阿尔茨海默病(AD)有预防作用。     

流产布鲁氏菌转录调控因子GntR在小鼠模型上诱导的辅助性T细胞免疫应答

[目的] 通过对布鲁氏菌gntR基因进行原核表达,分析其诱导机体产生的Th1和Th2型免疫反应。[方法] 以布鲁氏菌S2308基因组为模板,根据GenBank上公布的S2308 gntR基因序列设计引物,利用分子克隆技术,将gntR基因片段克隆至原核表达载体pET-30a,转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,诱导GntR蛋白表达;利用SDS-PAGE对GntR重组蛋白（rGntR）进行分析;利用AKTAxpress智能多维纯化系统对rGntR进行纯化;利用Western blotting分析其免疫反应性;用rGntR刺激小鼠巨噬细胞RAW 264.7和小鼠脾细胞,利用ELISA试剂盒检测细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-5,以及IgG抗体的水平。将rGntR免疫小鼠,检测小鼠血清中IFN-γ和IL-4的水平。[结果] gntR基因大小为735 bp,编码245个氨基酸,大约在35 kDa处出现蛋白条带,纯化后为单一条带。WB显示,rGntR具有较好的免疫反应性。rGntR可诱导宿主细胞和小鼠产生较高水平的IFN-γ、IL-4和IgG。[结论] rGntR可在体内或体外诱导辅助性T细胞（Th1和Th2型）免疫反应。本研究可为布鲁氏菌病疫苗的研发提供科学依据。