百日咳杆菌粘附素对猪源支气管败血波氏杆菌的保护性抗原的筛选

摘要：【目的】本研究通过百日咳杆菌黏附素(PRN)基因的分段克隆表达及其在BALB/c小鼠的主动和被动免疫保护试验筛选PRN中的保护性抗原肽。【方法和结果】利用大肠杆菌进行PRN的完整蛋白、N端和C端多肽及其RI和RII区域多肽（双拷贝）的表达,命名为GST-PRN、GST-PN、GST-PC、GST-2PRI和GST-2PRII。Western blot检测证实5种表达产物均具有良好的反应原性。在主动免疫保护试验中,5种表达产物均能诱导小鼠产生较高的PRN抗体水平;当使用3 LD50的支气管败血波氏杆菌     

三种林-茶复合林分中环境因子和茶的光合特征参数的EI变化规律

对栾树-茶（Koelreuteria paniculata—Camellia sinensis）、香樟-茶（Cinnamomum camphora—Camellia sinensis）和枫香-茶（Liquidambar formosana—Camellia sinensis）3种林-茶复合林分中环境因子的日变化及茶[Camellia sinensis（L．）O．Ktze．]的光合特征参数日变化和相关性进行了分析研究。结果显示,在3种林-茶复合林分中,光合有效辐射强度和气温的日变化呈单峰曲线,均在12：00达到最高值;空气相对湿度和大气CO2浓度呈先降后升的日变化趋势,分别在10：00和14：00达到最低值;各环境因子在全天不同时刻均有极显著差异（P〈0．01）。3种林-茶复合林分中茶的净光合速率日变化均表现为不对称的双峰型曲线,峰值分别出现在10：00和14：00,其中枫香-茶复合林分中茶的净光合速率日均值最高（0．80μmol·m^-1·s^-1）;茶的气孔导度与蒸腾速率均在每日的早、晚较低,并在10：00达到最高;胞间CO2浓度日变化整体呈“W”型曲线,每日的早、晚较高,在10：00最低,其中栾树-茶复合林分中茶的胞间CO2浓度的日均值最高;茶的净光合速率和蒸腾速率日均值在3种林-茶复合林分间有极显著差异（P〈0．01）,气孔导度和胞间CO2浓度日均值差异不显著。除气温与茶的净光合速率,以及光合有效辐射强度与茶的胞间CO2浓度、气温和空气相对湿度间相关性不显著外,其余环境因子与茶的净光合速率以及两两指标之间的相关性均达显著或极显著水平。综合分析结果表明,枫香-茶复合林分可改善茶的生长环境,促进茶生长,适合在安徽芜湖推广种植。     

表达T~+Pm保护性抗原的重组猪霍乱沙门氏菌C500株的构建及其生物学特性

【目的】本研究利用Asd+平衡致死系统构建表达巴氏杆菌毒素(Pasteurella multocida toxin,PMT)的重组猪霍乱沙门氏菌株,并对重组菌株的生物学特性进行比较研究。【方法和结果】通过基因克隆的方法构建表达PMT的重组质粒pYA-PmtC,再将其电转化减毒猪霍乱沙门氏菌C500的asd基因缺失株C501,构建口服活疫苗菌株C501(pYA-PmtC)。研究结果表明重组菌株C501(pYA-PmtC)的生化特性、血清型和生长速度与亲本菌株C500一致;在没有选择压力的条件下,C501(pYA-PmtC)能够稳定遗传重组质粒及其外源基因片段,并能稳定、高效、分泌性表达30.5kDa的外源保护性抗原rPmtC。C501(pYA-PmtC)腹腔感染BALB/c小鼠的LD50为8.5×106CFU,毒力稍低于C500(LD50为4.4×106CFU);口服接种C501(pYA-PmtC)和C500的所有仔猪未见任何发病症状,两者没有显著差别。【结论】本研究利用Asd+平衡致死系统的原理构建表达T+Pm保护性抗原重组猪霍乱沙门氏菌弱毒菌株C501(pYA-PmtC),为进一步开发猪萎缩性鼻炎-副伤寒的双价基因工程疫苗奠定基础。     

泽泻个体发育早期器官发育顺序的研究

研究了泽泻个体发育早期的器官发育顺序。认为可以划分为两个阶段：原胚－成熟种子胚阶段,以苗端发育先于根端和胚芽节生根原基并快于胚根原基为特点;种子萌发一种苗形成阶段,以胚根生长快于胚芽节生根为特点。并指出前者与水生植物芡和睡莲一致,后者与陆生植物条叶龙胆一致。     

大花睡莲种子至种苗的发育形态学研究

为了探索睡莲目与泽泻目个体发育早期的共性,追踪观察了大花睡莲种子至种苗的发育过程。结果发现：种子胚苗端发育先于根端;萌发时首先出现下胚轴,继而末端膨大产生下胚轴毛,最后胚根分化;初生根短命;节生根后发生但较粗壮,浮水叶开始产生时根茎第一节以下部分随即烂掉;种苗的各器官中均有发达的通气组织等基本上与芡、泽泻和黑藻相似。     

细叶马先蒿根系发育形态学研究

细叶马先蒿为玄参科多年生草本植物。年生产周期明显缩短。根系营养生长至花期为粗壮主根与纤细侧根并存,果期侧根几乎全部枯萎脱落,所存留根系皆呈乳白色。由胚根形成的初生主根根毛密集,初生木质部二原型。侧生分生组织只有形成层而无木栓形成层。根表皮细胞经解离后略呈不规则方形片状,横切面为平周长梭形,进行垂周分裂增加梭形根表皮细胞长度,以适应根的增粗生长。根表皮脱落时,外皮层以同样生长方式代替脱落的表皮。在年     

东北产苍术属植物的细胞学研究

报导了中国东北产三种苍术属植物的核型资料,核型公式分别为;北苍术「Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（ＤＣ．）Ｋｏｉｄｚ．」Ｋ（２ｎ）＝２４＝１２ｍ＋６ｓｍ＋６ｓｔ（４ＳＡＴ）,关苍术「Ａ．ｊａｐｏｎｉｃａ Ｋｏｉｄｚ．」（２ｎ）＝２４＝１４ｍ＋１０ｍ（２ＳＡＴ）朝鲜苍术「Ａ．ｋｏｒｅａｎａ（Ｎａｋａｉ）Ｋｉｔａｍ．」Ｋ（２ｎ）＝２４＝１０ｍ＋１４ｓｍ（２ＳＡＴ）,三者核型对称性均为２Ｂ     

东北蒿属艾组12种植物核型研究

报道东北蒿属艾组12种植物的染色体数及核型资料,结果如下：宽叶山蒿（Artemisia stolonifera (Maixm.)Komar.)2n=4x=36=28m 4sm(4SAT) 4st(4SAT);野艾蒿（A.lavandulaefolia DC)2n=2x=50=40m 4sm 6st(6SAT); 矮蒿（A.lancea Van.)2n=2x=16=10m 4sm 2st;蒙古蒿（A.mongolica (fisch.ex Bess.)Nakai]2n=2x=16=14m 2st;红足蒿（A.rubripes Nakai)2n=2x=16=14m 2st;歧茎蒿（A.igniaria Maixm.)2n=2x=34=28m 2sm 4st(4SAT);柳叶蒿（A.integrifolia Linn.)2n=4x=36=20m 12sm 4st;线叶蒿（A.subula 4st(4SAT);柳叶蒿（A.integrifolia Linn.)2n＝4x=36=20m 12sm 4st;线叶蒿（A.subulata Nakai)2n=2x=16=14m 2st;高岭蒿（A.brachyphylla Kitam.)2n=2x=18=14m 2sm 2st;林文稿[A.uiridissima(Komar.)Pamp.]2n=2x=18=14m 4sm;奄癌（A.keiskeana Miq.)2n=2x=18=16m 2sm;阴地蒿（A.sylvatica Maxim.)2n=2x=16=14m 2sm,核型对称性野艾蒿（A.lavandulaefolia)为2B型,其余均为2A型,依据核型资料对个别种的演化 分类进行了初步探讨。     

法氏囊活性五肽BP5的抗肿瘤作用

【目的】法氏囊活性五肽Bursopentin(BP5)是一种多功能生物学活性因子,不仅具有免疫调节和抗氧化功能,还具有抗肿瘤活性。目前,BP5发挥抗肿瘤生物功能的作用机制尚不清晰。【方法】本研究利用T7噬菌体展示技术构建鸡DT40细胞T7噬菌体c DNA文库,以BP5-BSA为靶分子对文库进行亲和淘选,通过序列测定和生物信息学分析,获得BP5的结合蛋白。通过分析BP5诱导的鸡DT40细胞mRNA基因表达谱和检测BP5对HCT116细胞中p53 Luciferase活性和p53信号通路中相关蛋白表达的影响来探讨BP5抗肿瘤的作用机制。【结果】构建的鸡DT40细胞T7噬菌体c DNA文库原始滴度为1.2×104pfu/m L,重组率为91.7%,扩增后滴度为1.9×109pfu/m L;通过生物淘选获得3条与BP5结合的鸡源蛋白血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A)、细胞周期蛋白E1(cyclin E1)和运输蛋白颗粒复合体2(trafficking protein particle complex 2)。基因表达谱分析结果显示,BP5参与调节多条与抗肿瘤功能有关的通路,其中包括p53信号通路,且p53信号通路涉及的5个差异表达基因均与细胞周期调控或抗肿瘤相关,其中SIAH1、TP53(p53)、CIP1(p21)基因被上调,CHEK2、CCNE1基因被下调。RT-PCR方法检测10个表达水平有明显变化的差异基因,其结果与基因芯片分析结果相符;BP5对p53 Luciferase活性的影响实验结果显示,BP5在0.2-20μg/m L浓度下能够明显提高HCT116细胞中p53相对Luciferase活性,Western blotting结果证实,BP5能显著促进p53、p21蛋白的表达水平,而CCNE1和CHEK2蛋白的表达水平则明显降低。【结论】本研究结果表明BP5通过p53信号通路途径发挥其抗肿瘤生物学功能,为进一步研究BP5抗肿瘤具体的分子机制提供了参考依据。     

基于环境微生物资源库快速构建易腐垃圾高效堆肥复合菌剂

【目的】针对易腐垃圾成分快速构建一种高效堆肥复合菌剂。【方法】研究以"中国科学院战略生物资源服务网络计划"支持建设的微生物资源库为基础,根据菌株产酶活功能信息,针对易腐垃圾有机成分定向挑选出高产酶(蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、木质素酶、脂肪酶)菌株,通过测定菌株间拮抗作用,构建了一种高效堆肥复合菌剂CM菌剂。进行了菌剂发酵条件优化和易腐垃圾堆肥应用研究。【结果】CM菌剂最适发酵条件为接种7%的种子液于红糖培养基中,30°C下培养48h,此时菌剂产生蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、木质素酶、脂肪酶酶活分别为181.76、52.92、1.57、12.81、9.94 U/mL。堆肥结果表明CM菌剂堆肥产品pH、含水率、有机质含量均满足生物有机肥标准(NY884-2012)。CM菌剂堆肥过程中最高温度为63.5°C,高温期9–12 d,30 d后含水率为28.7%,有机质降解率为30.4%,C/N为8.93,与商品菌剂BM相比堆肥效果更好,可使堆体高温期延长4–7d、含水率降低3.8%,可加快易腐垃圾中有机质降解,降解率提升6.2%,并具有更强的固氮能力,缩短腐熟时间,提升堆肥产品品质。【结论】基于环境微生物资源库功能信息构建堆肥复合菌剂是一种快速有效的菌剂构建方法。