不同光照及赤霉素处理对菟丝子寄生关系建立的影响

首次使用LED作为光源,研究不同光照条件及GA3对菟丝子(Cuscuta spp.)弯钩打开、缠绕发生与吸器形成的影响.结果表明,光照信号作为一个必要条件参与了菟丝子对寄主的识别及缠绕发生的调控,而化学信号可能起到一定的促进作用;GA3参与了对菟丝子缠绕发生的调控,但对弯钩打开没有明显的作用.除了典型的光敏色素作用外,还有另一类光反应(HER)参与了上述过程,这类光反应可由879 nm远红光引发,证明菟丝子存在HER,还有Pfr向Pr的暗转化过程,在缠绕发生过程中光敏色素和隐花色素发生相互作用.     

利用高保真酶扩增特性调整基因读码框的方法

在基因工程研究中,经常要涉及到对目的基因读码框进行调整的研究。本文报道了利用高保真DNA聚合酶扩增DNA后产生平末端的特性,及限制性内切酶对一重组的原核表达载体pET28a-HA进行读码框调整的研究,测序结果显示读码框按照预期设计正确调整,表明高保真DNA聚合酶可以用于DNA 3'凹陷端的补平,在DNA 3'凹陷端平滑化时多了一个有效的选择。     

霍乱弧菌CTB基因的克隆、表达及重组蛋白活性分析

霍乱弧菌CTB蛋白具有免疫佐剂活性。本研究根据已发表CTB基因的序列设计一对引物,从一株霍乱弧菌中扩增出CTB基因,测序后发现该基因全长375 bp,与国内分离的六株CTB基因的同源性达96.0%～99.2%。将该基因与pTWIN1连接构建了原核表达载体pTWIN1-CTB,重组表达载体转化BL21（DE3）表达菌株,0.8 mmol/L IPTG诱导4 h后,收获的细菌总蛋白SDS-PAGE电泳显示CTB在原核表达系统中得到表达,融合蛋白大小与理论值符合,蛋白产量占细菌总蛋白的20%左右,主要以包涵体形式存在,western杂交和GM1-ELISA结果表明重组蛋白具有免疫原性和粘膜佐剂活性。     

中国菟丝子离体再生体系的建立

选取萌发3～5d、长度3～5cm的中国菟丝子（Cuscuta Chinensis Lam）幼苗,将其分为上、中、下3部分并作为外植体进行离体培养与植株再生研究。结果表明,其上、中部片段更适宜愈伤组织诱导;诱导培养基以添加1mg L^-1 NAA和1mg L^-1 BA的MMS培养基效果最好,此培养基也可用于愈伤组织的继代培养,愈伤组织在上述培养基中已生长一年之久。分化培养基为添加1mg L^-1 BA的MMS培养基,平均每块愈伤组织可以产生2．8株植株。     

含口蹄疫病毒IRES RNA病毒样颗粒表达载体的构建

利用PCR技术扩增大肠杆菌MS2噬菌体的外壳蛋白和成熟酶蛋白基因,将其克隆到pET32a中构建中间载体pET32a-CP。将FMDV的内部核糖体结合位点（IRES）保守序列连接到中间载体噬菌体基因的下游,构建原核表达载体pCPES。将重组质粒pCPES转化宿主菌BL21(DE3),1 mmol/L IPTG诱导表达。蔗糖密度梯度离心纯化表达产物。透射电镜观察到直径大约26 nm的圆形病毒样颗粒。检测病毒样颗粒的稳定性并进行RT-PCR鉴定。结果表明该病毒样颗粒含口蹄疫病毒IRES RNA序列,并且稳定性良好,本研究构建的病毒样颗粒可以作为RNA病毒检测时的标准品和质控品使用。