栽培大豆与半野生大豆杂种F_2群体中RFLP标记的偏分离及其形成原因的分析

本文研究了大豆５６个ＤＮＡ限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）标记在一栽培大豆／半野生大豆杂种Ｆ２群体中的分离。结果表明,２５％的ＲＦＬＰ标记表现了偏分离,偏离的方向主要趋于栽培大豆亲本,其形成原因主要是存在着配子体选择。这对研究大豆的遗传及育种选择等有着重要的指导意义。     

大豆遗传图谱的构建和分析

分子标记连锁图的构建为植物基因组的结构和功能分析提供了有力的工具。较高密度的遗传图谱在数量性状基因定位、图位克隆重要农艺性状基因等研究中发挥了巨大作用。应用栽培大豆长农４和半野生大豆新民６杂交得到的Ｆ８代重组自交系,构建了一张较高密度的遗传图谱。该图谱共有２４０个标记,其中包括２个形态标记、１００个ＲＦＬＰ标记、３３个ＳＳＲ标记、４２个ＡＦＬＰ标记、６２个ＲＡＰＤ标记和１个ＳＣＡＲ标记,分布在２２     

糖单孢菌16S rDNA的PCR-RFLP分析

ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析适用于种和种间水平的多相分类研究。文章对ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法应用于糖单孢菌属分类有具体方法进行了探讨;报道了一组适于糖单孢菌属ＰＣＲ－ＰＦＬＰ分析的限制性内切酶,并用这组酶对６株糖单孢菌属分离株进行了研究,进一步探讨了实验菌株在该属的分类地位。同时指出了ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法应用中应注意的问题。     

栽培大豆中一个线粒体atp６基因的分离与鉴定

线粒体ＡＴＰ酶（mtATPase)复合体在高等植物生命活动中起重要作用。从栽培大豆（Glycine max(L.)Merr.)中分离鉴定了一个新的mtATPase第六亚基（ＥＣ３．６．１．３４）基因（atp６）,它编码具２２３个氨基酸的ＡＴＰ６亚基,是所有已克隆的atp６基因中最短的一个,并把它命名为atp６copy3(atp６-3)。通过对９种栽培大豆的ＰＣＲ分析及序列分析表明atp６－３广泛在于栽培大豆中,以atp６－３为探针对大豆重组近交系的ＲＦＬＰ分析初步表明栽培大豆线粒体有父性遗传的可能性。水杨酸处理明显抑制atp６的表达,并对其可能作用进行了鉴定。     

用RFLP和PCR—RFLP技术研究东北虎和华南虎线粒体DNA多态性

采用ｍｔＤＮＡＲＦＬＰ和ＰＣＲＲＦＬＰ技术研究了东北虎和华南虎的ｍｔＤＮＡ的多态性。在ｍｔＤＮＡＲＦＬＰ研究中,分离纯化了东北虎和华南虎肝、肾和心脏组织的ｍｔＤＮＡ,用２０种识别６碱基对的限制性内切酶消化,结果只有１种限制性内切酶（ＸｂａⅠ）检测到多态性片段,其余１９种限制性内切酶消化产生的限制性格局在东北虎和华南虎完全一致。在ＰＣＲＲＦＬＰ研究中,用ＰＣＲ技术分别扩增了东北虎和华南虎ｍｔＤＮＡ的控制区（ｃｏｎｔｒｏｌｒｅｇｉｏｎ）,用８种识别４碱基对的限制性内切酶分别对扩增产物进行消化,结果只有１种限制性内切酶（ＲｓａⅠ）检测到多态性片段。ｍｔＤＮＡＲＦＬＰ及ＰＣＲＲＦＬＰ的结果均提示东北虎和华南虎之间的遗传距离极小。这可能与下列因素有关：两者分布区间无天然隔离屏障;具有强扩散能力;近几百年才被相互隔离。     

AFLP分子标记及其在植物育种上的应用

扩增酶切片段多态性（ＡｍｐｌｉｆｉｅｄＲｓｔｒｉｃｉｔｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ,简称ＡＦＬＰ）是由Ｚａｂｅａｕ等１９９２年发明的一项新的ＤＮＡ指纹技术,它结合了ＲＦＬＰ和ＰＣＲ技术的特点,具有ＲＦＬＰ技术的可靠性和ＰＣＲ技术高效性,其基本原理是对基因组ＤＮＡ酶切片段的选择性扩增,ＡＦＬＰ扩增片段的谱带数取决于采用的内切酶及引物３′端选择碱基的种类数目和所研究基因组的复杂性,实验     

扩增片段长度多态性(AFLP)——一种新的分子标记技术

ＡＦＬＰ（扩增性片段长度多态性）是一种新的ＤＮＡ分子标记。与ＲＦＬＰ、ＲＡＰＤ相比,ＡＦＬＰ具有在一次试验中可同时观察到大量的限制性片段的优点。本文阐述了ＡＦＬＰ的原理和方法,综述了ＡＦＬＰ目前在植物遗传育种研究中的应用进展,并对ＡＦＬＰ技术在植物遗传育种中的应用前景提出了初步设想。     

用RT-PCR和RFLP对禽传染性支气管炎病毒中国分离株的分型

用ＲＴ－ＰＣＲ方法获取了禽传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）标准毒株Ｍ４１、Ｈ５２、Ａ５９６８和国内分离株Ｄ４１、Ｆ、Ｇ的Ｓ１基因,对它们做ＲＦＬＰ分析,发现Ｄ４１、Ｆ株属于马萨诸塞血清型、Ｇ株为变异株。对用ＲＴ－ＰＣＲ和ＲＦＬＰ来区分ＩＢＶ的分型方法的应用理论和前景进行了论述。     

利用RFLP,SSR,AFLP和RAPD标记分析玉米自效系遗传多样性的比较研究

利用ＲＦＬＰ、ＳＳＲ、ＡＦＬＰ和ＲＡＰＤ４种分子标记方法研究了１５个玉米（Ｚｅａ ｍａｙｓ Ｌ．）自交系的遗传多样性,同时对４种标记系统进行比较。在供试材料中筛选到具多态性的ＲＦＬＰ探针酶组合５６个,６７６对ＳＳＲ引物,２０个ＲＡＰＤ引物和９个ＡＦＬＰ引物组合,分别检测到多态性带１６７、２０１、８７和１０８条。ＳＳＲ标记位点的平均多态性检测效率（Ａｉ,３２．２）。４种分子标记所得遗传相似自交系划分     

利用RFLP、SSR、AFLP和RAPD标记分析玉米自交系遗传多样性的比较研究

利用 ＲＦＬＰ、ＳＳＲ．ＡＦＬＰ和ＲＡＰＤ ４种分子标记方法研究了 １５个玉米（Ｚｅａ ｍａｙｓ Ｌ．）自交系的遗传多样性,同时对４种标记系统进行比较。在供试材料中筛选到具多态性的ＲＦＬＰ探针酶组合５６个,６６对ＳＳＲ引物,２０个ＲＡＰＤ引物和９个ＡＦＬＰ引物组合,分别检测到多态性带１６７、２０１、８７和１０８条。ＳＳＲ标记位点的平均多态性信息量（ＰＩＣ）最大（０．５４）,ＡＦＬＰ标记位点最小（０．３６）,但ＡＦＬＰ标记具有最高的多态性检测效率（Ａｉ,３２．２）。４种分子标记所得遗传相似系数相关性显著,比较相关系数表明 ＲＡＰＤ可靠性较低。依据 ４种分子标记结果将 １５个供试自交系划分为塘四平头、旅大红骨、兰卡斯特、瑞德和ＰＮ共５个类群,与系谱分析基本一致。认为ＳＳＲ和ＲＦＬＰ两种分子标记方法适合进行玉米种质遗传多样性的研究。     

用PCR—RFLP方法研究藏族HLA0—DQA1和—DQB1基因多态性

应用目前ＨＬＡ研究领域中成熟的、有效的ＰＣＲ－ＲＦＬＰ基因分型技术,从ＤＮＡ水平对藏族健康群体进行了ＨＬＡ－ＤＱＡ１（４９人）和－ＤＱＢ１（４９人）基因分型,这在国内外属首次。所采用的ＰＣＲ－ＲＦＬＰ基因分型技术是在ＨＬＡ－ＤＱＡ１和－ＤＱＢ１各等位基因全部序列已知的情况下,对其第２个外显子碱基序列扩增进而进行ＲＦＬＰ分析的方法。这种方法得到的ＲＦＬＰ的所有片段都是已知序列,因而精确度很高,同时为     

微卫星DNA和AFLP标记在水稻分子标记连锁图上的分布

以一个栽培稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．ｓｐ．ｉｎｄｉｃａ）和野生稻（Ｏ．ｒｕｆｉｐｏｇｏｎＧｒｉｆ）杂交的Ｆ２作图群体以及由该群体构建的ＲＦＬＰ标记连锁图,分析了微卫星ＤＮＡ和ＡＦＬＰ标记的多态性、遗传行为及其在染色体上的分布。共定位了２８个微卫星ＤＮＡ标记和１７２个ＡＦＬＰ标记。２８个微卫星ＤＮＡ标记中有６个为华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室根据数据库中序列而设计,其余２２个来自美国Ｃｏｒｎｅｌ大学已发表的结果。１７２个ＡＦＬＰ标记出自２５对引物扩增得到的２２８个多态性带的片段。这些标记分布于水稻的１２条染色体。将此２００个ＰＣＲ标记与华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室构建的ＲＦＬＰ连锁图整合,得到一张含６１２个分子标记位点的遗传连锁图。     

水稻的AFLP研究初报——反应条件的优化及对温敏核不育等位突变系的分析

通过对５４６０Ｓ和５４６０Ｆ这一对水稻等位突变系的ＡＦＬＰ分析,比较了ＡＦＬＰ与ＲＡＰＤ及ＲＦＬＰ检测ＤＮＡ多态性的相对效率。结果表明,这３种分子标记的ＤＮＡ多态性检出效率依次为ＡＦＬＰ＞ＲＡＰＤ＞ＲＦＬＰ;找出了水稻ＡＦＬＰ分析的最适反应条件;在这对等位突变系之间找到了一些多态性ＡＦＬＰ产物,已完成了对４个多态性ＡＦＬＰ产物的克隆,其中３个为单拷贝顺序;用这３个单拷贝克隆的混合物为探针,对作者自己构建的５４６０Ｓ水稻的ＢＡＣ库进行了筛选,获得了１２个阳性克隆,为今后ＢＡＣ库的筛选打下了基础。此外,对上述３种分子标记各自的优缺点及它们在ＤＮＡ多态性检测中的适用之处进行了分析探讨。     

AFLP标记及在植物中的应用

ＡＦＬＰ是 1 992年由荷兰Ｋｅｙｇｅｎｅ公司Ｚａｂｅａｕ、Ｖｏｓ在ＰＣＲ和ＲＦＬＰ的基础上发展起来的一种检测ＤＮＡ多态性的新方法[1] ,并于1 993年获得欧洲专利局专利。与ＲＦＬＰ类似 ,ＡＦＬＰ也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测ＤＮＡ多态性的一种ＤＮＡ分子标记技术。由于ＲＦＬＰ是以传统的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交为基础的 ,操作繁琐 ,对ＤＮＡ多态性的检出的灵敏度不高 ,在连锁图上有很多大的空间区。随着ＰＣＲ技术广泛应用 ,对分子标记技术的发展产生了巨大的推动作用。除了ＲＦＬＰ(限制性内切酶酶切片段长度多态性标记 …     

玉米CMS材料线粒体DNA遗传多型性的研究

选用１１×４＝４４个探针／酶组合,５０个（１０ｍｅｒ）随机序列引物对２５种不同胞质来源的ＣＭＳ玉米,５种正常胞质玉米线粒体ＤＮＡ进行ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ研究。研究结果表明：（１）４５％的探针／酶组合可检测到玉米线粒体ＤＮＡ的多型性,共表现１５种ＲＦＬＰ类型,其中Ｓ组ＣＭＳ材料内有７种,正常胞质材料内有２种;８０％的随机引物可检测到ＲＡＰＤ。（２）基于ＲＦＬＰ资料的聚类分析结果,可将３０种胞质明确地划分为Ｔ、Ｃ、Ｓ、Ｎ４组,其结果与恢复专效性测定结果一致。其中ｐＨＪ２－７－１／ＢａｍＨＩ的ＲＦＬＰ类型可成为利用ＲＦＬＰ技术进行胞质分组的鉴定体系。（３）“双”型胞质线粒体ＤＮＡ常表现Ｓ＋Ｃ胞质的ＲＦＬＰ图谱。     

用RT—PCR和RFLP对禽传染性支气管炎病毒中国分离株的分型

用ＲＴ－ＰＣＲ方法获取了禽传染性支气管病毒标准毒株Ｍ４１,Ｈ５２,Ａ５９６８和国内分离株Ｄ４１,Ｆ,Ｇ的Ｓ１基因,对它们做ＲＦＬＦ分析,发现Ｄ４１,Ｆ株属于马萨诸塞血清型,Ｇ株为变异株。对用ＲＴ－ＰＣＲ和ＲＦＬＰ来区分ＩＢＶ的分型方法的应用理论和前景进行了论述。     

昆虫核酸分子系统学研究进展

本文从研究对象、方法、类群、内容等方面综述了近十年来昆虫核酸分子系统学研究进展概况。文中首先介绍了ＲＦＬＰＡ、探针杂交及ＤＮＡ指纹、ＰＣＲ与ＲＡＰＤ－ＰＣＲ、顺序分析方法及应用情况,列举了在双翅目、膜翅目、同翅目、直翅目等目昆虫中的研究进展,并从居群遗传结构、分类学研究、系统发育和分子进化４个方面总结了昆虫核酸分子系统学的研究内容和主要成果,最后指出ＲＡＰＤ－ＰＣＲ与ＲＦＬＰ联合用于测序是近期昆虫分子系统学上最有应用价值的方法。     

AFLP标记在果树遗传育种研究中的应用

1993年 ,Ｚａｂｅａｕ等发明了一项专利技术 ,扩增片段长度多态性 (ａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ,ＡＦＬＰ) ,该技术结合了ＲＦＬＰ技术和ＰＣＲ技术的优点 ,以其高效性和高重复性等特点 ,被广泛应用于多种植物的遗传育种研究。1 .ＡＦＬＰ技术的原理和特点ＡＦＬＰ技术是基于对限制性片段的选择性扩增 ,基因组ＤＮＡ被限制性内切酶切割后 ,将限制性片段末端连上双链接头 ,根据接头序列和相邻的限制性位点序列设计引物对限制性片段进行扩增。扩增产物经电泳检测后再比较其谱带的差异。ＡＦＬＰ…     

一个新的水稻迟熟性基因的遗传分析和分子标记定位

中籼迟熟水稻品系８９８７含未知的长生育期基因,在杂交水稻育种中有重要的利用价值,应用该品系与４个不同生态类型的水稻品种杂交,对其Ｆ１和Ｆ２群体进行生育期调查和遗传分析,确认８９８７的长生育期受１对隐性主效基因控制。以（８９８７Ｘ地谷）Ｆ２群体为基础,应用ＲＦＬＰ和微卫星标记结合群分法,发现第７染色体的ＲＦＬＰ标记Ｃ２１３与该基因连锁;进一步应用Ｆ２分离群体将该基因定位于第７染色体上,暂定名为ｌｆ－３。此基因的发现和定位将有助于分子标记辅助选择和杂交水稻的改良。     

利用RAPD技术进行植物性状标记及辅助选择

近等基因系、混合分离群体法是ＲＡＰＤ 标记的主要策略。目前,ＲＡＰＤ标记广泛用于抗线虫、抗病、雄性不育等辅助选择的研究中,取得了可喜的成绩。由于遗传距离的不同,使ＲＡＰＤ 标记具有基因型的差异。寻找无重组的ＲＡＰＤ 标记或将ＲＡＰＤ标记转化为ＲＦＬＰ标记,可以解决这一问题。随着连锁程度的降低选择效率也随着降低。相斥相的ＲＡＰＤ标注可提高选择效率将ＲＡＰＤ标记转化为ＳＣＡＲｓ、ＡＰＳＰｓ 标记,可以解决ＲＡＰＤ 标记稳定性差的问题。来源于ＲＡＰＤ 标记的ＳＣＡＲｓ 标记将在辅助选择中发挥巨大的作用。