一种提取荔枝胚中总RNA的方法

用改良的Tris-硼酸法和3S柱式细胞及组织总RNA抽提试剂盒V2.0提取3个荔枝品种胚中的总RNA,经纯度和甲醛变性胶分析,其A260/A280值在1.91～2.02之间,基本完整,未检出明显降解.     

一种适用于RT-PCR的石榴籽粒总RNA提取方法

为从石榴籽粒中提取高质量的RNA,以便进行后续分子生物学研究,针对石榴籽粒富含次生代谢物的特点,采用CTAB法并进行了改良,利用氯仿/异戊醇替代其他方法中的"异硫氰酸胍"和"Trizol试剂"进行反复抽提去除蛋白,无水乙醇去除多糖,LiCl消化DNA。结果显示:改良CTAB法提取的石榴籽粒总RNA的28S rRNA、18SrRNA条带清晰,完整性较好;OD260 nm/OD280 nm比值为1.9960,纯度较高。在此基础上通过反转录、PCR扩增出符合预期大小的Actin基因片段,表明该方法提取的RNA可满足后续RT-PCR等分子生物学试验研究。     

萝卜总RNA提取与mRNA差异显示技术

以萝卜幼小花药与叶片为材料,初步建立了mRNA差异显示技术体系.4种提取总RNA方法中,改进的SDS/酸酚法比CTAB/酸酚法和SDS/碱酚法更合适;改进的热硼酸法(HB)提取的RNA质量也较高,但所需时间较长,成本较高.以改进的SDS/酸酚法获得的RNA进行纯化后,其OD260/OD280在2.0～2.2之间,表明RNA样品杂质较少;总RNA进行反转录与差异显示分析表明,高分辨力的cDNA片段在100～380 bp之间.     

大青杨叶片总RNA的快速提取方法

目的:寻求快速提取大青杨叶片总RNA的方法。方法:分别用改良CTAB法、改良SDS法、改良TRIzol法及某公司总RNA提取试剂盒提取大青杨叶片总RNA,并用紫外光谱分析、凝胶电泳方法对提取的总RNA进行鉴定。结果:用改良CTAB法和改良TRIzol法能有效地去除蛋白及多糖,提取到的总RNA纯度高,D260nm/D280nm分别为2.05和1.78,RNA的完整程度优于试剂盒法。结论:改良CTAB法为大青杨叶片总RNA的最佳提取方法。     

五种不同组织结构特点昆虫的总RNA提取效率比较

【目的】比较RNAeasy抽提试剂盒法和Trizol提取法对不同种昆虫总RNA提取的效率,为不同种昆虫总RNA提取方法选择提供参考。【方法】采用RNAeasy抽提试剂盒法和Trizol提取法分别对九香虫Aspongopus chinensis Dallas、白背飞虱Sogatella furcifera Horváth、中华蜜蜂Apis cerana cerana、黄蜻Pantala flavescens和蒿金叶甲Chrysolina aurichalcea进行总RNA提取,通过紫外分光光度计测定总RNA吸光度(OD)值,利用琼脂糖凝胶电泳检测等方式对RNA质量进行评估。【结果】2种提取方法提取不同昆虫总RNA中,Trizol法提取白背飞虱(同翅目)、蒿金叶甲(鞘翅目)和九香虫(半翅目)的总RNA浓度较高,但纯度较低。电泳结果显示总RNA有降解,完整性较差,RNAeasy抽提试剂盒法提取黄蜻(蜻蜓目)和中华蜜蜂(膜翅目)的浓度较低,纯度较高,电泳结果显示完整性较好。【结论】Trizol法更适合提取小型或几丁质含量高的昆虫,RNA抽提试剂盒法更适合几丁质含量较少、腹软且有大量体液的昆虫总RNA提取。     

多花蔷薇总RNA提取方法

根据总RNA完整性、纯度和得率筛选出适合多花蔷薇幼嫩根、叶总RNA的提取方法。结果表明,以CTAB/酸酚法提取的扦插苗根系总RNA、以LiCl-尿素法提取的扦插苗根、叶总RNA以及采用RNeasyPlantMiniKit试剂盒的改进方法提取的组培苗嫩叶总RNA电泳有清晰明亮的28S、18S条带,无降解;其A260/A280值为1.73~2.04,表明总RNA质量好。RT-PCR结果进一步证实所提取的总RNA能够用于分子生物学的各种下游实验。RNA得率分别为:根系和组培苗嫩叶120-140μg/g(fw),扦插苗嫩叶190-230μg/g(fw)。CTAB/酸酚法提取的嫩叶总RNA、SDS/酸酚法提取的根、叶总RNA有多糖污染,且有明显降解。TotalRNAisolationsystem(Z5111,Promega)试剂盒不适合提取多花蔷薇各组织总RNA。     

三七总RNA提取方法的对比研究

比较利用改进的异硫氰酸胍一步法、异硫氰酸胍高盐法、CTAB法和Thomas’RNA提取法等4种方法提取三七根茎2个部位总RNA的可行性。结果表明,改进的异硫氰酸胍一步法和异硫氰酸胍高盐法能有效地抑制酚类物质、多糖及皂苷等次级代谢产物对总RNA的影响,可从三七根茎中获得质量高、完整性好的总RNA。RT—PCR分析显示提取的总RNA具有反转录活性。这2种方法具有快速、简单、有效的特点。     

枣不同器官和组织RNA提取方法的研究

以田间幼嫩叶片为试材,建立枣RNA改良CTAB提取法,改良之处包括利用巯基乙醇和PVP联合去除多酚、CTAB与异硫酸氰胍联合促进RNA释放及加入糖原提高产率等.改良CTAB法提取液组成:2% CTAB,4mol/L异硫酸氰胍,100mmol/L Tris-HCl(pH8.0),20mmol/L EDTA(pH8.0),2% PVP,4% β-巯基乙醇,250μg/ml糖原.进而采用Trizol试剂法、改良CTAB法、改进SDS-酚法、热硼酸法和异硫氰酸胍法5种方法分别对枣组培苗、幼叶、幼嫩枝皮、根皮和枣果5种器官和组织进行了总RNA提取.结果表明,组培苗RNA提取以Trizol试剂法为最佳,田间幼叶和成熟果实宜采用改良CTAB法,幼嫩枝皮和根皮宜采用改良CTAB法或改进SDS-酚法;本研究建立的改良CTAB法可作为枣不同器官和组织RNA提取的通用方法;根据季节可从不同器官和组织中获得高质量RNA;枣组织RNA含量相差较大,以幼嫩叶片含量最高,其次为组培苗、枝皮、枣果和根皮.     

荒漠甲虫总RNA提取方法的比较与分析

目的:昆虫总RNA由于其自身结构特点,存在与动物植物完全不同的电泳条带,本文通过对比探索光滑鳖甲总RNA提取的最优方案。方法:实验采用5龄光滑鳖甲幼虫,利用TRIzol、CTAB、热酚法、及BioTeKe Kit、TianGen Kit试剂盒提取方法提取光滑鳖甲总RNA。结果:(1)所采用的实验方法提取的光滑鳖甲总RNA均呈现出与植物、哺乳动物血细胞、哺乳动物组织样总RNA不同的条带,28S弱于18S条带亮度;(2)TRIzol法、CTAB法、改进热酚法所得光滑鳖甲总RNA条带清晰、完整,D260/D280值为1.89～1.98,D260/D230值为1.94～2.09,纯度较好;(3)TRIzol法RNA提取得率为304.3～365.4μg/g,BioTeKe Kit RNA提取得率为73.38～128.22μg/g。结论:综合所有参数,所选取的方法中,TRIzol法可获得高质量、高产量的光滑鳖甲总RNA,可用于RT-PCR、文库构建等高要求RNA的提取。