用酚-氯仿直接从克隆中提取质粒DNA

目的:对用酚-氯仿直接从克隆中提取质粒DNA的方法进行了研究。方法:采用不同次数的酚-氯仿抽提,在不同RNaseA作用温度及作用时间下提取了三种质粒。结果:用酚-氯仿抽提2次,RNase A45℃作用8min,质粒纯度(OD260/OD280)为1.85左右、产量大于0.8μg/克隆。结论:本法不但快速,且所提质粒均能满足后续实验如酶切鉴定、测序等方面的需要。对于大批量重组克隆的筛选尤为适合。     

一种从重组质粒快速提纯DNA插入片段的方法

本文介绍一种从重组质粒中快速提纯ＤＮＡ插入片段的方法。质粒ＤＮＡ的制备简单、快速、分离的质粒ＤＮＡ可用于限制性酶切和转化大肠杆菌等。从琼脂糖凝胶中提纯ＤＮＡ插入片段的方法操作简单,回收效率高,提纯的ＤＮＡ片段可用于连接和制备杂交探针等。     

快速小量提取质粒DNA的两种方法

碱裂解法是进行分子克隆实验中质粒DNA制备最为常用的方法。在实际实验操作过程中,对该实验方法进行了改进,改进的碱裂解法解除了所提质粒DNA中RNA污染及RNase的可能影响,快速提取法使阳性克隆的筛选更加迅速,快捷。两种方法的改进使实验更加高效、简单、实用。     

直接用酚和氯仿快速提取质粒

质粒的提取是分子克隆技术中最关键的步骤之一,在对大量样品的抽提和筛选时工作量很大。提取质粒的方法很多,有碱裂解法、煮沸法等「１」,所用试剂较多,耗时较长,这些方法均要用酚和氯仿抽提以去除菌体蛋白,以免影响酶切分析。Ｂｉｊｉ,Ｔ,Ｋｕｒｉｅｎ等（１９９４）提出用乙醇溶菌法快速提取质粒,作者试验多次结果均不理想,经过改进直接用酚和氯仿溶解菌体来快速提取持粒,得到了满意的结果。用该法提取质粒ＤＮＡ,产量     

一种提取质粒DNA的改良方法

本文详细介绍了一种改良碱裂解法提取质粒ＤＮＡ的方法,该法采用ＮＨ４Ａｃ代替苯酚和氯份的抽提过程,得率高,质量好,完全达到了分子生物学常规实验的要求,如酶切、连接、转化大肠杆菌、ＰＣＲ等,甚至用于序列测定和植物遗传转化,该法重复性好,操作简单、实用．     

质粒DNA的酚-氯仿一步抽提法

本文介绍了一种极快速提取质粒DNA的方法。该法是对Serghini等发表的方法的改进,全过程只需用酚-氯仿混合液抽提一次,用时少,操作简便,适用于大规模筛选重组克隆子,也可直接用作转化、酶切及DNA序列测定。     

7种方法提取质粒DNA用于序列分析的比较

对取自同一摇瓶内的菌体,采用7种不同提取质粒的方法分离DNA,将分离的DNA做电泳观察、紫外吸收及序列分析,结果表明CTAB法具有快速、方便、可行的特点。     

快速提取肠道微生物基因组DNA的方法

目的:肠道微生物的研究日益成为热点,如何获取高质量、较完整的肠道菌群基因组DNA是肠道微生物研究中的关键。本文通过对酚/氯仿法提取总DNA过程进行考察和优化,建立一种简便酚/氯仿抽提法。方法:考察和优化酚/氯仿法提取总DNA的过程,并根据DNA产量、纯度以及ERIC-PCR及16S rNDA-RFLP所反映的微生物群落结构特性的指标,并与QIAamp?DNA Stool Mini Kit提取的进行比较,评价了所建立的快速提取方法。结果:用简便酚/氯仿法得到基本完整的基因组DNA,ERIC-PCR和16S rDNA-RFLP结果与QIAamp?DNA Stool Mini Kit法基本相同。结论:该方法快速并成本低,适合肠道微生物研究中总DNA提取,尤其适合处理大批量的样品。     

通用载体质粒融合系统——一种快速的DNA重组技术

本文介绍了近年来兴起的一种快速的DNA重组方法－－通用载体质粒融合系统UPS,概述了其作用原理和特点以及在实际中的应用情况。     

一种从鱼类肌肉组织中提取基因组DNA的简易方法

以泰山螭霖鱼、黄河鲤鱼、东平湖鲫鱼为材料,采用改进的酚-氯仿抽提法和蛋白酶K消化法提取基因组DNA,并对其进行紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、微卫星PCR扩增等方法的鉴定。结果表明,本方法提取的鱼类基因组DNA浓度为0．9-3．25μg／μL,D260nm/D280nm值为1．79-1．87,电泳条带整齐明亮,适合微卫星PCR扩增。因此,本方法能够从鱼类肌肉组织中获得较为纯净的基因组DNA,适于进一步的分子生物学研究之用。     

Extrachromosomal DNA in Bacillus thuringiensis var. kurstaki, var. finitimus, var. sotto, and in Bacillus popilliae

Four entomopathogenic bacteria contained extrachromosomal deoxyribonucleic acid (DNA) molecules of various sizes. Bacillus thuringiensis var. kurstaki contained twelve elements banding on agarose gels that ranged from 0.74 to > 50 × 10⁶ daltons, three of which were giant extrachromosomal DNA elements. B. thuringiensis var. sotto contained one giant extrachromosomal DNA element with a molecular size of about 23.5 × 10⁶ daltons and two lesser elements of 0.80 and 0.62 × 10⁶ daltons. B. thuringiensis var. finitimus harbored two giant DNA elements corresponding to >50 × 10⁶ daltons and two lesser bands with relative small size (0.98 and 0.97 × 10⁶ daltons). B. popilliae contained no giant extrachromosomal DNA elements but did contain two smaller elements corresponding to 4.45 and 0.58 × 10⁶ daltons. The possible use of extrachromosomal DNA elements that prove to be autonomous replicons for recombinant DNA studies is discussed.     

Purification of oligo dG-tailed Okayama-Berg linker DNA fragments by oligo dC-cellulose chromatography

A simple procedure for preparation of oligo dG-tailed DNA fragments is presented. The fragments are first purified by ultracentrifugation through sucrose gradients at low salt concentration. Appropriate gradient fractions are then adjusted to 1 M NaCl and immediately applied to a column of oligo dC-cellulose equilibrated in buffered 1 M NaCl at 4 degrees C. Fragments are eluted with water at room temperature. Passage through the column achieves, in one step, the concentration and purification of oligo dG-tailed DNA fragments free from sucrose.     

人Nephrin—GFP融合蛋白真核表达载体的构建和鉴定

目的构建人19号染色体长臂Nephrin基因和绿色荧光蛋白（green fluorescence protein,GFP）真核表达质粒,为进一步研究肾小球裂隙隔膜分子复合物构成与功能提供基础。方法设计引物,扩增真核表达质粒pEGFPN3中的GFP基因片段,将其插入nephrin原核表达载体pcDNA3．1 nephrin V5-His,重组质粒经酶切鉴定后测序,并转染至COS-7细胞观察表达情况及生物学特性。结果成功构建pcDNA3．Inephrin—GFP重组质粒,并将Nephtin—GFP融合蛋白成功表达于COS-7细胞,进一步经交联实验证明Nephtin—GFP融合蛋白具有正确的细胞膜表达。结论利用pEGFPN3和pcDNA3．1nephtinV5-His可成功重组Nephrin—GFP表达质粒,为进一步研究肾小球裂隙隔膜分子复合物构成及其功能提供有利工具。     

Introduction of Human Recombinant Angiogenin at the Early Stages of Postnatal Development Inhibits the Growth of Mice

We studied the influence of recombinant DNA containing the cloned angiogenin gene, plasmid DNA without angiogenin gene, and purified recombinant angiogenin injected to Tg8 mice at the age of two days on the body mass of 28- and 40-day old mice. The body mass of mice that were injected with the cloned angiogenin gene or purified angiogenin was less than in the control mice. The body mice of Tg8 mice injected with recombinant DNA containing the cloned angiogenin gene did not increase from day 28 to day 40, while in the mice with purified recombinant angiogenin and control mice it increased by 24 and 57%, respectively. These data suggest that the elevated level of angiogenin at the early developmental stages inhibits the increase of body mass. The effect we described is related, in al likelihood, to the known inhibitory effect of angiogenin on protein synthesis.     

用PCR法直接快速筛查重组阳性克隆

应用ＰＣＲ法快速筛查插入有苯丙氨酸脱氨酶ｃＤＮＡ重组阳性克隆。方法：用于ＰＣＲ扩增的引物是位于载体ｐＥＴ２３ｂ启动子处的Ｔ７启动子引物和位于目的基因ＰＡＬｃＤＮＡ３’端终止密码ＴＡＡ处的引物。以灭菌吸头挑一单菌落加入ＰＣＲ体系扩增。结果：在筛查的３个克隆中,有２个阳性克降,并且插入方向正确,经ＤＮＡ序列测定得到进一步证实。结论：以ＰＣＲ方法筛查重组阳性克隆,可以简便快速鉴定插入片段的大小和方面,不