提高RAPD稳定性的几点经验与探讨

随机扩增多态ＤＮＡ(ＲＡＰＤ)技术自 1990年由Ｗｉｌｌｉａｍｓ和Ｗｅｌｓｈ建立以来 ,因其特异、快速、操作简便、敏感的优点 ,在微生物分型和检测[1 ,2 ] 、生物亲缘关系的鉴定[3] 以及遗传育种[4 ] 中已得到广泛应用 ,其原理与常规ＰＣＲ基本相同 ,但ＲＡＰＤ采取的引物多为一条随机的十聚寡核苷酸序列 ,这种引物不属于已知遗传位点 ,它能通过ＰＣＲ介导所有与其互补的基因区段进行扩增 ,产生一系列大小不同的片段 ,并通过琼脂糖凝胶电泳而呈现不同的ＤＮＡ指纹图。由于ＲＡＰＤ不需要知道模板的序列 ,且引物序列无种属特异性 ,在对遗传…     

RAPD在植物育种上的应用及其技术校正

ＲＡＰＤ(ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ) ,是在ＰＣＲ的基础上发展起来的一种ＤＮＡ多态性检测技术 ,由Ｗｉｌｌａｍｓ[1] 和Ｗｅｌｓｈ[2 ] 于 1990年建立 ,原理是以一系列不同的 ,少数碱基组成的随机核甘酸序列为引物 ,对样本基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增 ,每个ＲＡＰＤ片段的产生要求在可增范围内存在与引物匹配的反向互补序列。引物结合位点ＤＮＡ序列的改变以及两扩增位点之间碱基的缺失插入或转换都能导致扩增片段的数目和长度的差异 ,经ＰＡＧＥ或琼脂糖凝胶电泳分离和ＥＢ染色来检测ＤＮＡ片段的多态…     

烟草黑胫病菌株亲缘关系的RAPD分析

从２２０个ＲＡＰＤ（Ｒａｎｄｏｍ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡｓ）随机引物中所选出的多态扩增性强的２１个引物对来源不同的３３个烟草黑胫病菌株进行全基因组ＤＮＡ遗传多样性分析和指纹构建。选用引物对受试菌株进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增,共产生２４３条ＤＮＡ标记图带,其中１９１条为多态性图带,多态检测率为７８．６％。利用ＵＰＧＭＡ（Ｕｎｗｅｉｇｔｈｔｅｄ Ｐａｉｒ－ｇｒｏｕｐ Ｍｅｔｈ     

RAPD技术及其在微生物学方面的应用

198 0年 ,Ｂｏｔｓｅｉｎ提出ＤＮＡ限制性片段长度多态性 (ＲＦＬＰ)可以作为遗传标记 ,从此开创了直接应用ＤＮＡ多态的新阶段。 80年代后 ,ＤＮＡ多聚酶链式反应 (ＰＣＲ)的发展 ,使直接扩增ＤＮＡ的多态性成为可能 ,并在此基础上产生了许多种新型分子标记 ,诸如扩增片段多态性 (ＡＬＦＲ)、串联重复序列(ＶＮＴＲ)、单链构型多态性 (ＰＣＲ ＳＳＣＰ)、序列特异扩增区域 (ＳＣＡＲ)、随机扩增多态性ＤＮＡ(ＲＡＰＤ)等。而ＲＡＰＤ是较为突出的一种。ＲＡＰＤ是由Ｗｉｌｌｉａｍｓ和Ｗｅｌｓｈ在 1 990年各自独立发现的一种ＤＮＡ多态检…     

快速克隆RAPD片段方法的研究

ＲＡＰＤ (ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍＤＮＡ ,ＲＡＰＤ)标记是由Ｗｉｌｌｉａｍｓ等于 1 990年提出的 ,一种检测ＤＮＡ多态性的方法 ,由于该方法中所选用引物的碱基是随机的 ,所用引物可达成百上千 ,所检测到的是生物体的整个基因组 ,既能检测有功能的基因编码区 ,又能检测到重复序列区 ,用同一套引物可对多个群体或物种进行分析 ,其所用引物的随机性和其所检测的结果具有更为可靠的统计性和更好的代表性 ,使ＲＡＰＤ标记在重要基因的标记、定位、系统进化、群体多样性和遗传演化等方面得到了广泛的应用。但…     

烟草黑胫病菌株亲缘关系的RAPD分析

从２２０个ＲＡＰＤ（ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ＤＮＡｓ）随机引物中所选出的多态扩增性强的２１个引物对来源不同的刀个烟草黑胫病菌株进行全基因组ＤＮＡ遗传多样性分析和指纹构建。选用引物对受试菌株进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增,共产生２４３条ＤＮＡ标记图带,其中１９１条为多态性图带,多态检测率为７８．６％。利用ＵＰＧＭＡ（ＵｎｗｅｉｇｔｈｔｅＰａｉｒ－ｇｒｏｕｐ　ＭｅｔｈｏｄＷｉｔｈＡｒｉｔｈｍｅｔｉｃ　Ａｖｅｒａｇｅ）软件对受试菌株间的遗传距离进行聚类分析构建系统树状图,受试对个菌株被划分为５个遗传聚类组即（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ）。结果证明供试菌株具有丰富的遗传多样性,虽各自的遗传背景差异显著,但其亲缘关系相近,遗传聚类组的划分与菌株的地理来源未有明显的相关性。     

菊花起源的RAPD分析

利用ＲＡＰＤ分析技术,选取２２个２０个碱基长度的随机引物,对７种野生菊花、１４种栽培菊花和５个种间杂种进行了随机扩增。通过实验建立了ＰＣＲ随机扩增实验体系。在观察到的２２４个扩增条带中,３４条（１５％）表现多态性。利用ＵＰＧＭＡ法对扩增数据进行分析,结果表明：在７种野生种中,Ｄｅｎｄｒａｎｔｈｅｍａｉｎｄｉｃｕｍ、Ｄ．ｖｅｓｔｉｔｕｍ和Ｄ．ｎａｎｋｉｎｇｅｎｓｅ与栽培菊花亲缘关系最近,而Ｄ．ｚａｗａｄｓｋｉ与栽培菊花亲缘关系最远。前３种野菊与栽培菊花间的遗传距离小于０．４０,而Ｄ．ｚａｗａｄｓｋｉ与栽培菊花间的遗传距离大于０．５０。根据上述数据及以往研究结果,使用ＲＡＰＤ数据对菊花起源问题进行了探讨,提出栽培菊花主要起源于Ｄ．ｉｎｄｉｃｕｍ、Ｄ．ｖｅｓｔｉｔｕｍ和Ｄ．ｎａｎｋｉｎｇｅｎｓｅ．     

利用PCR方法鉴定甲醇酵母转化子的表型

本文以含外源基因的甲醇酵母表达载体ｐＰＩＣ９／Ｅ２Ｆ－１－ＤＢ质粒ＤＮＡ电转化甲醇酵母ＧＳ１１５,小规模抽提所得转化子的总ＤＮＡ,并以其为模板,以乙醇氧化酶（ＡＯＸ１）５’端序列和３’端的ＴＴ序列为引物,进行ＰＣＲ反应。ＰＣＲ产物走０．８％Ａｇａｒｏｓｅ电泳,通过对ＰＣＲ产物的电泳带型分析,鉴定出甲醇酵母转化子的表型,即Ｍｕｔ＾＋或Ｍｕｔ＾ｓ。这一鉴定结果为转化子的诱导表达产物的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图     

冬虫夏草的随机扩增多态DNA及其遗传分化

本文对来自青藏高原３个区域５个具有代表性地方的１３个冬虫夏草样本进行随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析。１９个随机引物获得的ＲＡＰＤ谱带清晰并呈现多态,单个引物获得的ＲＡＰＤ片段数在３￣１０个之间。该１９个引物在每个样本中扩增的ＲＡＰＤ片段总数平均约为６５个。基于遗传距离分析,受试的１３个冬虫夏草样本中,来自同一地方的样本间遗传差异甚微,同一区域不同地方的样本间遗传差异较大,不同区域的样本间遗传差     

RAPD标记在紫菜遗传多样性检测和种质鉴定中的应用

用ＲＡＰＤ技术对４类紫菜（Ｐｏｒｐｈｙｒａ ｙｅｚｏｅｎｓｉｓ,Ｐ．ｈａｉｔａｎｅｎｓｉｓ,Ｐ．ｋａｔａｄｎｉ ｖａｒ．ｈｅｍｉｐｈｙｌｌａ和Ｐ．ｏｌｉｇｏｓｐｅｒｍａｔａｎｇｉａ）的１５个无性系丝状体进行了遗传多样履分析,从５０个ＯＰＥＲＯＮ引物中经过初筛,其中６个引物可以扩增出稳定的可重复的图谱。这６个引物共扩增出了６０条带,多态性比例达９７．１％。根据ＲＡＰＤ结果将这１５个无性了紫菜的ＤＮＡ