两种新型白细胞介素-2的热稳定优越性

研制成两种新型白细胞介素-2(新型Il,-2),其一为125Ser-IL-2,另一为125Ala—Ⅱ2(即原型IL-2中125位cys分别被Ser或Ala取代)。两种新型IL-2均已被高度纯化,并已完成了中试,获准临床应用。发现新型IL-2的热稳定优越性。在65℃加热,新型IL-2的稳定性高于原型,失活比原型慢,被保留的活性也较原型多。在0．1％SDS中能使失活的IL-2逐渐恢复一定的活性,也是新型IL-2恢复活性高。同时,比较了其它条件下这三种重组rIL-2的稳定性及SDS对其复性的影响,发现三者之间差异很大。上述结果均证明：125A1a—IL-2的热稳定性最好,125sER-IL-2次之,原型较新型差。     

改组猪IL-2和重组IL-6C基因增强猪口蹄疫疫苗的免疫应答

以离子交联法制备壳聚糖纳米颗粒,包裹重组改组的猪IL-2基因表达质粒(VRIL2S)、重组IL-6和CpG(VPIL6C)质粒(CNP-VRIL2S-VPIL6C-CNP), 按0.5 mg/头肌肉注射壳聚糖包装质粒接种21日龄健康三元杂交猪,同时肌肉注射免疫灭活口蹄疫疫苗;在免疫后7、14、28、42和56 d,采血检测实验猪的免疫球蛋白、特异抗体和免疫细胞的动态变化.结果发现:接种后56 d,改组猪IL-2和重组IL-6C质粒接种猪血液中的特异性抗口蹄疫抗体、IgG、IgA和IgM含量均较对照空白疫苗免疫猪显著升高(P<0.05),其IL-2、IL-6水平和淋巴细胞、单核细胞的数量也相应较灭活疫苗对照组明显增加(P<0.05).这些证明猪IL-2和IL-6基因与CpG有良好的免疫协同增强效应,能有效地增强疫苗的特异体液和细胞免疫应答反应,可作为安全高效的新型免疫基因分子佐剂,促进猪对口蹄疫疫苗的免疫防御抗病力,抵御口蹄疫的感染.     

不同麻醉方法对胃肠道肿瘤手术病人细胞免疫功能的影响

目的:探讨不同麻醉方法对胃肠道肿瘤患者围术期外周血T细胞亚群以及白细胞介素-2(IL-2)的影响.方法:选择胃肠道肿瘤手术患者40例,随机分为两组.采用单纯全麻者为对照组,采用全麻复合硬膜外麻醉者为治疗组.分别于麻醉前、麻醉后不同时间点抽取静脉血,流式细胞术测定CD4+T及CD8+T细胞亚群数量,ELISA法测定血清IL-2的浓度.结果:麻醉后两组患者的CD4+T细胞、CD4+/CD8+比值和血清IL-2浓度均有所下降,与麻醉前比较差异有统计学意义(P＜0.05),治疗组患者的CD4+T细胞及IL-2下降程度不如对照组患者明显,且恢复较快,两组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论:胃肠道肿瘤患者在麻醉手术后其细胞免疫功能受到不同程度的抑制,但复合麻醉较单纯全麻的免疫抑制效应低且恢复较快.     

甲_2巨球蛋白的丙烯酰胺梯度SDS凝胶板电泳分析

甲_2巨球蛋白(简称α_2M)是一种分子量为725000的大分子糖蛋白。天然有活性的和失活的α_2M经SDS热引导和巯基乙醇还原分解的亚基分子量有明显差别。不同来源的α_2M亚基分子量也略有差异。本实验用3-25％丙烯酰胺梯度SDS凝胶板电泳来鉴定纯化的猪α_2M、大鼠α_2M和人α_2M制剂。结果指出猪α_2M和人α_2M均有185000、125000和62000三条亚带,代表有活性的天然α_2M,大鼠α_2M电泳图谱指出,130000分子量亚带代表天然α_2M,29000和90000分子量二带为失活部分。人α_2m制剂图谱表明除了混有两种球蛋白外,只有一条62000分子量亚带代表少量有活性的α_2M。     

五味子煎剂对2 型糖尿病患者血清IL-2 及IL-6 水平的影响

目的：探讨五味子煎剂对2 型糖尿病患者的临床疗效及血清IL-2、IL-6 水平的影响。方法：选取我科门诊及住院的2 型糖尿 病病患者88 例,随机分为两组,其中对照组44 例,予盐酸二甲双胍胶囊常规治疗,1 个月为一个疗程,治疗三个疗程;实验组44 例,在常规治疗的基础上加用五味子15 g,日一剂水煎服,1 个月为一个疗程,治疗三个疗程。治疗结束后,对比临床疗效及治疗前 后患者IL-2、IL-6 水平、糖化血红蛋白（HbA1c）及血脂（TC、TG及LDL）。结果：治疗后两组患者IL-2 明显升高,IL-6 水平明显降 低,差异具有统计学意义（P＜0.05）,且实验组IL-2、IL-6 水平较对照组明显好转,差异有统计学意义（P＜ 0.05）;治疗后两组患者 HbA1c 均有所降低,且实验组HbA1c 较对照组明显下降,差异有统计学意义（P＜ 0.05）;治疗后两组患者血脂均有所改善,且实验 组血脂较对照组明显好转,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：中药五味子能明显提高T2DM 患者血清IL-2 水平、降低IL-6 水 平,降低患者糖化血红蛋白及血脂水平,提高2 型糖尿病临床疗效,对临床具有指导意义。     

白细胞介素-2对离体大鼠心脏的作用及其机理

本实验研究免疫调节因子IL-2对心脏的生物学作用及其机制.实验结果显示,hrIL-2增加离体心脏的室性早搏个数,增加心率,影响左室发展压、左室舒张末压和冠脉流量;热失活的hrIL-2对心脏无作用;Ryanodine预处理不改变hrIL-2的致心律失常作用和增加心率的作用,但取消了hrIL-2增加左室发展压、左室舒张末压和冠脉流量的作用;Nifedipine和低钙均取消了hrIL-2的致心律失常作用,部分取消了hrIL-2增加心率、左室发展压、左室舒张末压和冠脉流量的作用.结果提示,IL-2可导致离体心脏心律失常和正性变时变力作用,其心脏作用与其正常的空间结构有关,作用机制涉及跨膜内流钙和胞浆内钙.     

可溶性噻唑盐WST-8用于重组人白细胞介素-2的生物学活性测定

运用新型测定活细胞个数的化学物质,建立一种快速测定重组人白细胞介素-2生物学活性的方法。活细胞代谢过程中,胞内的可溶性噻唑盐W ST-8在电子载体1-M ethoxy PMS存在时被还原成可溶性甲臢染料,甲臢染料可在A45Onm处产生吸收值,根据其吸收值的大小间接检测活细胞个数从而测定待检测样品中IL-2的浓度水平。相关性实验结果证明,在细胞浓度1250~160000个/孔范围内,CTLL-2活细胞个数与A45O值之间呈线性相关;用此种新方法检测的白细胞介素-2(IL-2)生物学活性结果与MTT法及XTT法结果基本一致,相关系数分别为r=0.9602和r=0.9511。因此,W ST-8法适用于悬浮依赖型细胞CTLL-2为基础的IL-2生物学活性检测,且具有经济、实用、简便、易行的特点,有较好的实际应用价值。     

一种几丁质裂解性多糖单加氧酶的活性评价及稳定性研究

【目的】裂解性多糖单加氧酶(LPMO)是一类铜离子依赖型的单加氧酶,能够通过氧化的方式断裂糖苷键,进而显著提高多糖的降解效率,受到广泛的关注。但是LPMO单加氧酶的性质使其容易被自身氧化而失活,且底物的聚合性质和释放产物的多样性使得对LPMO催化过程活性的评估变得十分困难。【方法】本研究以2,6-二甲氧基苯酚(2,6-DMP)和H2O2为底物,建立了测定几丁质裂解性多糖单加氧酶(BtLPMO10A)活性的评价体系,并研究该酶在降解几丁质底物过程中的稳定性。【结果】研究发现,在测定BtLPMO10A活性的过程中,较高的酶浓度,过氧化氢浓度和2,6-DMP浓度均使得反应过程脱离了线性范围,而抗坏血酸的加入能够提高灵敏度,但是对活性测定过程有较大影响。BtLPMO10A对2,6-DMP和H2O2的Km分别为0.53mmol/L和5.31 mmol/L,亲和性高于纤维素裂解活性的NcLPMO9C。BtLPMO10A在还原剂抗坏血酸存在的条件下容易失活,但底物几丁质的加入能够一定程度上稳定LPMO的活性,但是其在降解几丁质过程中活性依然会下降。【结论】本研究以2,6-二甲氧基苯酚为底物检测BtL...     

光合细菌Rhodopseudomonas capsulata固氮活性的调节

光合细菌Rhodopseudomonas capsulata的光促固氮活性被外加少量氨迅速失活,随着菌体细胞吸取氨,周围环境中氨量下降,光合固氮活性恢复。固氮活性失活的持续时间取决于最初外加的氨量。弱光下氨对固氮活性的失活效果更为显著。谷氨酸胺和天门冬酰胺对光合固氮活性的失活和恢复与氨的作用方式具同一动力学类型。细菌光合非循环电子流抑制剂苯醋酸汞和磷酸化解联剂五氯苯酚均抑制光合固氮活性,并且与氨产生协同的抑制效果。光合细菌固氮活性被氨短时间的调节机制进行了讨论。     

枯草杆菌肠球菌二联活菌胶囊对失代偿期肝硬化患者的保护作用

目的探讨枯草杆菌肠球菌二联活菌胶囊对失代偿期肝硬化患者的保护作用。方法 125例失代偿期肝硬化患者被随机分为观察组(63例)和对照组(62例)。对照组接受肝硬化常规治疗,观察组在对照组基础上加用枯草杆菌肠球菌二联活菌胶囊500mg/次,3次/d,口服。2组疗程均为2个月。观察两组患者治疗前后肝功能(ALT、TBil、PA)、血氨、血清内毒素、炎症反应因子(IL-6、TNF-α、CRP)、Child-Pugh分级变化及并发症发生情况。结果治疗后观察组ALT、TBil、血氨、血清内毒素、IL-6、TNF-α及CRP明显降低,PA明显升高(P0.01),对照组ALT、TBil、血氨、IL-6、TNF-α及CRP也明显降低(P0.05或P0.01);两组治疗后比较,观察组上述指标的改善情况优于对照组(P0.01);观察组Child-Pugh分级有明显改善(P0.01),但对照组治疗前后及两组治疗后ChildPugh分级差异无统计学意义(P0.05);观察组并发症SBP、HE、HRS的发生率明显低于对照组(P0.05)。治疗过程中未发现明显不良反应。结论枯草杆菌肠球菌二联活菌胶囊能降低失代偿期肝硬化患者的血氨、血清内毒素及炎症因子IL-6、TNF-α、CRP水平,改善肝功能,减少并发症的发生。     

The IL-2A receptor pathway and its role in lymphocyte differentiation and function

Murine myeloid cells are developed from hemopoietic stem/progenitor cells. Different types of progenitor cells have variable differentiation potentials. Among the ten main types of cells differentiated from lymphoid progenitor cells, regulatory T cells (Tregs), an important cell subpopulation regulating immune and inflammatory responses, arise from the hematopoietic stem cells in the bone marrow. Tregs then differentiate into T lymphocytes and migrate to the thymus and finally generate Treg subsets, which are subsequently activated and regulated by inflammatory cytokines in the peripheral blood. Tregs also have different phenotypes and immunomodulatory functions. The cytokine interleukin-2/interleukin-2 receptor (IL-2/IL-2R) pathway is an important regulatory signaling pathway of Tregs. Besides, different types of CD4⁺ and CD8⁺ cells have different immune effects in the absence of IL-2. IL-2R consists of three subunits, α chain (CD25), β chain (CD122), and γ chain (CD132). Different subunit combinations have different effects on the activation of immune cells. Multiple studies have shown that IL2RA deficiency has various effects on the immune function in mice. This article reviews the subunit composition and signaling pathway of IL-2R, the classification of Tregs in a murine myeloid cell line and the regulatory effect of IL-2/IL-2R on them, the regulatory impact and signaling mechanism of IL-2/IL-2R on CD4⁺/CD8⁺ lymphocyte differentiation, the primary manifestations and molecular mechanism of immune dysfunction in IL-2- and IL-2R-deficient mice, soluble IL-2Rα as a biomarker for diagnosis, prognosis and therapeutic efficacy of treatment in immune system disorders, and the development and clinical application of IL-2 mutants.     

双歧异黄酮奶粉对H22荷瘤小鼠化疗后的增效减毒作用研究

目的研究双歧异黄酮奶粉对环磷酰胺化疗后H22荷瘤小鼠抗肿瘤的增效减毒作用及其机制。方法构建H22荷瘤C57BL／6小鼠模型,研究双歧异黄酮奶粉对环磷酰胺化疗后的抑瘤率,取脾和胸腺计算脏器指数,双抗夹心ELISA法测定抑癌基因P27的表达及IL-2的水平以探索增效减毒机制。结果双歧异黄酮奶粉与环磷酰胺联合抗肿瘤具有增效减毒作用。可诱导抑癌基因P27的表达,增加IL-2的水平。结论双歧异黄酮奶粉与环磷酰胺联合抗肿瘤具有增效减毒作用。     

蜜环菌多糖对小鼠血清IL-2和TGF-β1水平的影响

目的:观察蜜环茵多糖对小鼠血清中IL-2和TGF-β1水平的干预作用。方法:实验组小鼠腹腔注射(i.p)不同浓度的蛮环菌多糖,阴性对照组给予生理盐水,阳性对照组给予香菇多糖,连续给药14天。给药结束后,用形态学方法测定各组小鼠在植物血凝素(PHA)诱导下淋巴细胞转化率,用ELISA法测定各组小鼠血清中白介素2(IL-2)、转化生长因子β1(TGF-β1)水平。结果:蜜环菌多糖具有提高小鼠淋巴细胞转化率,增加血清中IL-2水平,并同时下调血清中TGF-β1水平的作用。结论:蜜环菌多糖可通过调节小鼠免疫细胞及免疫分子的作用,增强小鼠的免疫功能。     

旋毛虫在小鼠体内发育及T淋巴细胞亚群变化的动态观察

目的观察IL-2对感染旋毛虫小鼠免疫功能的影响及旋毛虫在小鼠体内的发育。方法小鼠感染旋毛虫后,分别采用ELISA和流式细胞仪检测小鼠不同时期外周血中IL-2含量、CD4^＋及CD8^＋T淋巴细胞的百分率。取小鼠不同部位肌肉观察旋毛虫的发育和分布。结果小鼠感染旋毛虫后1～5周IL-2的含量较正常组明显增加。小鼠感染旋毛虫后1～6周,CD4^＋T细胞较正常组明显减少,CD8^＋T淋巴细胞明显增多,CD4^＋／CD8^＋比值明显下降。旋毛虫幼虫主要分布在小鼠的膈肌,其次为咬肌,舌肌最少。结论IL-2对感染旋毛虫小鼠早期具有一定的免疫抑制作用,小鼠感染旋毛虫后21d即可检出旋毛虫,35～42d密度达最高。     

鬼毛针多糖对小鼠细胞免疫功能影响的实验研究

20世纪80年代后多种真菌多糖的抑瘤活性被发现以来,真菌多糖作为一类新型药物引起越来越多的关注,成为一个非常活跃的研究领域。目前已证实多种真菌多糖可以通过激活T淋巴细胞、B淋巴细胞、活化巨噬细胞和NK细胞、激活补体、调节细胞因子分泌等对免疫系统发挥多方面的调节活性[     

白介素-2及干扰素-γ对人成骨细胞增殖的影响

体外培养人骨肉瘸细胞系MG63,MTT方法检测白介素-2（Interleukin-2,IL-2）和干扰素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）对成骨细胞增殖的影响。结果表明,一定浓度（0．1—100U／μL）的IL-2能够促进成骨细胞增殖（P〈0．05）,而IFN-γ对成骨细胞增殖的影响无统计学意义（P〉0．05）,提示IL-2是成骨细胞的一种促分裂原。     

上呼吸道病毒感染患者外周血中白介素-Ⅱ活性的检测

考察了上呼吸道病毒感染患者和正常人外周血白介素 Ⅱ (IL 2 )活性的变化情况。应用噻唑蓝比色法检测外周血IL 2的活性。结果显示 ,实验组 (4 9例 )IL 2的活性为 31.3± 0 .5 4 ,对照组 (4 2例 )的IL 2的活性为 6 4 .4± 0 .16。上呼吸道病毒感染患者外周血中的IL 2与正常人比较活性降低 ,存在显著性差异(P <0 .0 1)。     

CD4+CD25+调节性T细胞、IL-2与免疫耐受

近年来,越来越多的研究表明CD4+CD25+调节性T细胞在免疫耐受的过程中起着非常重要的作用。IL-2作为一种T细胞生长因子调控着调节性T细胞诱导免疫耐受的过程。IL-2维持着中枢及外周的调节性T细胞的活性,但是对胸腺调节性T细胞的发育是非必要的。同时,IL-2信号影响着调节性T细胞的功能并维持着其的竞争适应性。因此,CD4+CD25+调节性T细胞通过与IL-2之间形成的免疫网络调控着免疫耐受的过程,从而影响着机体的免疫平衡。     

IBV S1基因和IL-2基因双顺反子DNA疫苗的免疫原性研究

为了研制更加有效的IBV DNA疫苗,将IBV的S1基因和禽白介素2(IL-2)基因插入双顺反子表达载体pIRES-EGFP/DsRed中,构建能分别或同时表达S1基因和IL-2基因的pIRES-S1、pIRES-IL2、pIRES-S1/IL-2质粒。通过脂质体转染Vero细胞,利用RT-PCR及间接免疫荧光检测表达。将构建的质粒用脂质体包裹后,通过腿部肌肉多点注射免疫7日龄雏鸡,二免后两周用IBV肾型强毒进行攻毒。结果表明,pIRES-S1/IL-2在体外能够诱导Vero细胞表达S1蛋白和IL-2;pIRES-S1/IL-2和pIRES-S1 pIRES-IL2免疫雏鸡后均能促进外周血T淋巴细胞亚群数量和血清中特异性抗体水平的增加,能明显增强IBV DNA疫苗对同型强毒的攻击保护,但pIRES-S1/IL-2免疫组要优于pIRES-S1 pIRES-IL2混合免疫组及其它对照组,差异显著或极显著。以上结果表明禽IL-2能同时加强DNA疫苗的细胞免疫和体液免疫应答;但抗原基因和IL-2共表达DNA疫苗的免疫效果明显要优于混合注射的DNA疫苗。     

肿瘤坏死因子-α和白介素-2对成骨细胞增殖的影响

成骨细胞在骨组织改建中至关重要。本试验体外培养人骨肉瘤细胞系MG63,MTT方法检测白介素-2(Interleukin-2,IL-2)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对成骨细胞增殖的影响。结果表明,当IL-2的浓度大于100U/mL,其能够促进成骨细胞增殖(P0.05),一定浓度(50～1000U/mL)的TNF-α对成骨细胞的增殖也有促进作用。