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《生物技术通报》2001,(2)
010 0 2 4基因组研究中全长cDNA克隆的策略 [中 ]/张庆华… //生物工程进展 .- 2 0 0 0 ,2 0 (4) .- 3~ 5全长cDNA的克隆是目前人类基因组研究中的一个重要方面 ,与大规模基因组测序相比较 ,cDNA测序克隆用相对较少费用获得更多的功能基因信息 ,故也是符合我国国情的基因组研究的主要方向。如何更加高效地获得新的全长cDNA ,本文结合作者自己工作中的经验 ,对从全长文库的建立到全长cDNA的测序及克隆方法作了较为详细的介绍。(杨淑培 )0 10 0 2 5细胞培养中的程序性细胞死亡 [中 ]/高红亮… //生物工程进展 .- 2 0 0 0… 相似文献
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基因组研究中全长cDNA克隆的策略 总被引:2,自引:0,他引:2
全长cDNA的克隆是目前人类基因组研究中的一个重要方面,与大规模基因组测序相比较,cDNA测序克隆用相对较少费用获得更多的功能基因信息,故也是符合我国国情的基因组研究的主要方向。如何更加高效地获得新的全长cDNA,本文结合作者自己工作中的经验,对从全长文库的建立到全长cDNA的测序及克隆方法作了较为详细的介绍。 相似文献
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以人成骨肉瘤细胞株HOS-8603为热休克模型,在利用DDmRNA方法筛选和克隆了一个热休克后表达受抑基因的cDNA片段的基础上,以该片段为探针,筛选HOS-8603细胞的cDNA文库,获得该基因的全长cDNA克隆(HSSG-1);DNA序列测定表明该cDNA全长1456bp,编码276个氨基酸,经计算机辅助分析,该cDNA序列尚未被报道。经RNA斑点杂交证实,该基因的表达于多种组织细胞之中,并且 相似文献
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岸蟹(Carcinus maenas)金属硫蛋白cDNA及其基因的克隆 总被引:3,自引:0,他引:3
利用已知的C.maenas金属硫蛋白氨基酸序列资料,用全简并的PCR引物,从鳃组织总RNA中扩增出两种金属硫蛋白cDNA片断,并将其克隆到pGEM-T载体中,序列测定表明,其中一种cDNA片断核苷酸序列和推知的C.maenas金属硫蛋白核苷酸序列完全吻合;另一种cDNA片断则在3’端有较大变异。根据前者cDNA片段序列设计特异性引物,扩增并克隆了其编码区全长cDNA和其编码基因,测序结果表明,岸蟹 相似文献
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PCR法在未知cDNA克隆与序列测定中的应用研究邢桂春,贺福初,杨晓明,吴祖泽(北京军事医学科学院放射医学研究所,北京100850)目前,新型蛋白质克隆的最有效途径乃先构建cDNA文库,然后筛选、分离其cDNA再行亚克隆、测序。为克隆人新型肝细胞生长... 相似文献
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人基因组表达图谱分析和疾病相关基因搜寻──现状与展望(续前)康毅滨,柴建华(复旦大学遗传学研究所上海200433)二、cDNA随机部分f三、测序及EST的建立以上所讨论的方法均是从基因组DNA出发寻找表达序列,与之恰好相反的另一种构建表达图的思路是随机挑选cDNA文库中的克隆进行测序并在染色体上定位,即cDNA策略。人类基因组计划的一个重要目标是获得人基因组30亿个碱基对的顺序,而以目前的测序技术要在近期内完成这一目标还略显力不从心。 相似文献
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应用大规模测序技术和生物信息学研究造血干/祖细胞的基因表达及新基因的识别和克隆 总被引:2,自引:0,他引:2
从新生儿脐血和成人骨髓中分选出造血干/祖细胞(HSC/HPC),构建成cDNA文库,对其进行大规模表达序列标签(EST)测序,通过生物信息学等手段分析基因表达谱,并进行新基因的全长cDNA克隆。在所测的10512条可分析EST序列中,有9866条来自脐血CD34+细胞,其中4697条(476%)为已知基因,2603条(264%)为已知EST,1415条(143%)代表未知EST。在已知基因中,82%基因与造血相关,227%涉及细胞代谢、结构和迁移,130%与细胞分裂和防御相关,262%与RNA、蛋白质的合成相关,106%和细胞信号传递有关。对一些已知和未知的EST,综合测序、生物信息学等方法,进行全长克隆,已获得23个新基因的全长cDNA。 相似文献
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应用cDNA文库快速构建法克隆高粱肌动蛋白基因 总被引:3,自引:0,他引:3
取生长一周的高粱嫩叶为材料,按照cDNA库快速构建法,用λgt10为载体成功地获得了含有2×10^06人重组噬菌体的cDNA库。以水稻RAcl cDNA为探针,经噬菌体原位杂交筛选出两个阳性克隆片段,并对其中一个进行了Southern杂交鉴定。然后将重组体中含有的cDNA片段亚克隆至pBluescript SK-载体上测序。 相似文献
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通过重叠片段的RT-PCR方法,从人胎盘组织克隆了人全长肝细胞生长因子cDNA片段(约2200bp),经酶切证实和测序分析都表明该片段确为人HGFcDNA。本文所用方法解决了扩增较长目的基因片段时,由于RNA酶及反转录酶的RNA酶H活性和mRNA二级结构等多种因素的影响,使获取长片段cDNA难以成功的难点 相似文献