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相似文献
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1.
目的研究细胞凋亡及凋亡相关蛋白P53和Bcl-2在非小细胞肺癌组织中的表达水平,及其对预后的影响。方法应用DNA缺口末端标记技术和免疫组化方法检测111例肺癌患者组织中细胞凋亡、突变型P53和Bcl-2蛋白表达水平。结果111例肺癌中,细胞凋亡高表达53例(47.7%),突变型P53蛋白阳性45例(40.5%),Bcl-2蛋白阳性59例(53.2%)。COX模型多因素分析显示,淋巴结的转移和Bcl-2蛋白的阳性表达是本组肺癌患者的预后不良因素(P<0.05)。结论凋亡及凋亡相关蛋白P53和Bcl-2影响肺癌患者的生物学行为及预后。  相似文献   

2.
目的:探讨免疫组化检测在乳腺癌患者诊治中的价值。方法:随机选取2011年1月-2013年1月的68例经过空心穿刺活捡并病理确诊的乳腺癌患者为研究对象,均采用免疫组化检测ER、PR、P53、Bcl-2,全部采用CEF化疗方案治疗3个月后手术治疗,再运用免疫组化SP法检测化疗前后乳腺癌组织中以上指标的阳性表达率情况。结果:ER、PR化疗前后比较无统计学意义(P〉0.05);而P53、Bcl-2比较有明显的差异性(P〈0.05);ER、PR的阴性和阳性和疗效情况无明显差异性,而P53、Bcl-2的阴性和阳性表达和化疗的效果有明显的差异性,P〈0.05,具有统计学意义。结论:免疫组化检测中ER、PR对乳腺癌化疗前后无明显差异性,而化疗可通过抑制P53的表达来抑制乳腺癌增值并通过升高Bcl-2表达来调整肿瘤细胞分化。  相似文献   

3.
目的研究凋亡相关蛋白Bcl-2、P53和多药耐药相关蛋白Pgp、MRP在结肠癌中的表达,探讨之间的相关性及病理意义。方法用免疫组织化学SP法检测43例结肠癌和16例正常结肠中的Bcl-2、P53、Pgp和MRP的表达。结果Bcl-2、P53、Pgp和MRP在结肠癌组织中的阳性表达率分别为79%、74%、91%和77%,明显高于在正常结肠组织中的表达(P〈0.05)。Bcl-2的表达与结肠癌的分化程度密切相关(P〈0.01),Pgp的表达与结肠癌的淋巴结转移和临床分期密切相关(P〈0.05),MRP的表达则与结肠癌的分化程度、淋巴结转移、临床分期均密切相关(P〈0.05)。结肠癌组织中Bcl—2与P53、Pgp、MRP的表达之间呈显著的正相关(r=0.324,P〈0.05;r=0.330,P〈0.05;r=0.508,P〈0.01)。结论结肠癌中存在Bcl-2、P53、Pgp和MRP蛋白表达的显著上调,提示结肠癌组织可存在多种多药耐药发生机制。Pgp和MRP的阳性表达与临床病理特征密切相关,可将二者阳性表达率的上调作为结肠癌预后不良的指针。结肠癌组织中Bcl—2表达与种多药耐药相关因子P53、Pgp、MRP密切相关,提示结肠癌的发生与笺药耐药相关因子之间可能存在一定内在的联系,而Bcl-2在结肠癌多药耐药发生过程中发挥极其重要的作用。  相似文献   

4.
Survivin、CyclinD1在大肠癌中的表达及其临床意义   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的观察Survivin和CyclinD1在大肠癌组织中的表达与临床病理指标及预后的关系。方法应用免疫组织化学(S-P)法,检测44例大肠癌组织、30例癌旁组织、10例正常黏膜组织中Survivin、CyclinD1的表达情况。结果大肠癌组织中Survivin、CyclinD1的表达明显高于癌旁组织的表达,差异具有显著性(P<0.05),正常黏膜组织无Survivin、CyclinD1表达;Survivin表达与性别、年龄、肿瘤组织类型及组织分级、大体类型差异均无显著性(P>0.05),而与淋巴结转移、Dukes分期显著相关(P<0.05),CyclinD1表达与大肠癌各临床病理指标差异均无显著性(P>0.05);Survivin阳性生存率显著低于Survivin阴性患者,CyclinD1阳性生存率显著低于CyclinD1阴性患者(P<0.05);Survivin、CyclinD1在大肠癌中表达正相关(P<0.05)。结论Survivin表达与淋巴结转移、Dukes分期密切相关,提示预后不良,可作为大肠癌侵袭性和预后评估的生物学指标;CyclinD1表达提示预后不良,是判断预后的指标之一;Survivin、CyclinD1在大肠癌的发生过程中既有独立的功能,又有协同作用。  相似文献   

5.
目的:探讨胃癌组织中P16,nm23-h1和P53表达情况及其与患者预后的关系。方法:应用免疫组化SABC法检测91例手术切除胃癌组织中P16,nm 23-h1和P53表达。结果:胃癌中P16,nm23-h1和P53表达阳性率分别33.0%(30/91),38.5%(35/91), 53.8%(49/91)。p16,nm23-h 1和P53在胃癌中表达与淋巴结有无转移,不同的浸润深度,TNM分期,不同组织学类型均有显著差异(P<0.05)。而它们与肿瘤患者年龄,性别差异无统计学意义(P>0.05)。等级相关分析结果显示P16与P53表达呈负相关(P<0.05),P16与nm23-h1表达呈正相关(P<0.05),P53与nm23-h1表达呈负相关(P<0.05)。生存曲线研究结果显示P16,nm23-h1和P53表达与患者术后生存时间显著相关(P<0.05)。结论:P16和nm23-h1在胃癌组织中低表达及P53高表达能客观反映胃癌组织分化程度,侵袭转移能力,且其与患者预后密切相关。故检测三种指标可作为正确判断胃癌患者预后,在指导临床治疗方面有一定价值。  相似文献   

6.
目的研究Cox-2蛋白和凋亡相关蛋白突变型p53在肺癌组织中对凋亡的抑制作用,及其对预后的影响。方法应用DNA缺口末端标记技术和免疫组化方法检测116例肺癌患者组织中细胞凋亡、突变型p53和cox-2蛋白表达水平;并用cd34标记血管来计数肿瘤组织的微血管密度。结果116例肺癌中,细胞凋亡高表达56例(48.28%),突变型p53蛋白阳性47例(40.52%),cox-2蛋白阳性78例(67.24%)。Cox-2蛋白的表达与肿瘤TNM分期(P=0.014)及其中的淋巴结转移情况(P=0.009)密切相关,且阳性表达的肺癌组织中微血管密度明显高于阴性表达者(P=0.000),有统计学意义。COX模型多因素分析显示,淋巴结的转移(P=0.004)和cox-2蛋白的阳性表达(P=0.000)是本组肺癌患者的预后不良因素。结论Cox-2能增加突变型p53蛋白的表达,抑制凋亡,可作为判断肺癌患者预后不良的潜在指标。  相似文献   

7.
目的探讨si RNA沉默Survivin基因后对人大肠癌细胞系HCT116的Survivin蛋白表达、细胞增殖及凋亡的影响。方法以脂质体lip-2000为载体,用针对Survivin特异靶点的si RNA转染人大肠癌细胞系HCT116后,应用免疫细胞化学S-P法、Western Blot检测Survivin蛋白表达变化;MTT法检测细胞增殖;流式细胞技术检测细胞凋亡。结果免疫细胞化学结果显示:HCT116的正常对照组、脂质体对照组及阴性错配对照组细胞浆均呈强阳性表达,Survivin-si R-NA组细胞浆Survivin呈弱阳性表达;Western blot结果显示:HCT116细胞系Survivin-si RNA组细胞的蛋白条带亮度均明显低于正常对照组、脂质体对照组和阴性错配对照组;MTT检测结果:与阴性错配对照组相比,Survivin-si RNA组细胞生长出现明显的抑制(P0.05),不同时段(24h、48h、72h)肿瘤细胞增殖抑制率之间有显著差异(P0.05)。流式细胞术检测Survivin-si RNA组细胞凋亡比例为9.72%,明显高于空白对照组及阴性错配对照组(P0.01)。结论si RNA抑制Survivin基因可以抑制大肠癌细胞增殖,促进凋亡;Survivin有望成为大肠癌基因治疗的新靶点。  相似文献   

8.
目的:探讨survivin在非小细胞肺癌组织(non small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,及其与bc 1 2、p63蛋白表达的相关性。方法:应用二步法免疫组织化法,检测survivin、bc 1-2、p63蛋白在60例NSCLC组织和20例正常肺组织中的表达。结果:肺癌组织中的survivin蛋白阳性率(56.67%)明显高于正常肺组织15%),有显著性差异;(p<0.05)Ⅲ期surviving蛋白阳性表达率72.73%(16/22)明显高于Ⅰ Ⅱ期survivin47.37%(18/38)。有显著差异;(p<0.05)survivin蛋白表达与患者年龄、病理类型、组织分化程度,淋巴结转移情况无关(P>0.05)NSCLC组织bc 1-2蛋白表达阳性、阴性组中,survivin蛋白阳性表达率分别为66.67% (18/27)和48.48%(16/33),两者比较,差异有显著性(P<0.05);p63蛋白表达阳性、阴性组中,survivin蛋白阳性表达率分别为53.33%(16/30)和60%(18/30),两者比较,差异有显著性(P<0.05)survivin,蛋白与bc 1-2蛋白的表达呈正相关。survivin蛋白与p63蛋白的表达呈正相关。结论:survivin在NSCLC组织中表达上调,通过抑制细胞凋亡,在NSCLC的发生和发展中起到重要作用。survivin,bc 1-2与p63它们分别在肺癌发生发展过程中不同途径上抑制肺癌细胞的凋亡,对肺癌早期诊断有一定的意义。对3种蛋白进行联合检测,更有利于肺癌的早期诊断和判断肺癌的分化程度、临床分期、淋巴结是否转移及病人的预后。survivin与bc1-2及survivin与p63可能起协同作用,并可能会成为NSCLC基因治疗的新靶点。  相似文献   

9.
surv iv in 及B c l-2 基因在非小细胞 肺癌中的表达和相关性   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:探讨Survivin基因的表达在肺癌发生、发展中的作用及其Bcl-2蛋白表达的相互关系。方法:应用PT-PCR检测Sur-vivin mRNA的表达。结果:表达阴性的肺癌病人总生存率明显高于阳性表达的病人,并且其表达与患者年龄、性别、吸烟史、组织类型、肿瘤分化、大小及纵隔淋巴结转移无显著相关。免疫组化显示,肿瘤细胞胞浆和胞核中Survivin阳性表达分别为70%和80%,胞浆和胞核同时阳性为54%,Survivin在胞浆中的免疫活性与肿瘤分期有关(P=0.019),与患者生存期无关。在所有类型的肺癌中,鳞状细胞癌中的Survivin明显增高。用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶法(SP法)检测Bcl-2蛋白的表达。Bcl-2在鳞癌中的阳性表达率为最高。结论:Survivin基因在非小细胞肺癌中表达上调,提示其通过抑制细胞凋亡,在肺癌癌变发生、发展中起重要作用,可能成为肺癌基因治疗的新靶点,其阳性表达亦预示肿瘤有较高的侵袭性和不良预后,Survivin基因与凋亡抑制基因Bc12的共同表达可能在肺癌中起协同作用。  相似文献   

10.
目的:探讨Livin及survivin表达与结肠癌发生、发展、转移及预后的关系。方法:采用免疫组化sP法检测100例结肠癌病人的癌、癌旁组织和正常结肠组织标本中Livin及survivin的表达,分析其与结肠癌发生、发展、转移及预后的关系,并通过随访研究其与5年生存率的关系。结果:Livin和Survivin在结肠癌组织中的阳性表达率均显著高于癌旁组织和正常结肠组织(P〈0.05),在结肠癌组织中的表达与患者年龄、性别、肿瘤的大小和分化程度均不具有相关性(P〉O.05),在有淋巴结及远处转移患者中高表达,与无转移者差异显著(P〈0.05);Livin和Survivin表达阳性者5年生存率均明显低于表达阴性者(P〈0.05);Livin和Survivin的表达无相关性。结论:Livin和Survivin在结肠癌的发生、发展和转移中起重要作用,对预后的判断具有一定的参考意义。  相似文献   

11.
金元昌 《生物技术通报》2008,(1):122-123,155
目的 构建GnRH/TRS与绿色荧光蛋白(GFP)的融合基因并表达.方法 利用DNA重组技术,将GnRH/TRS片段克隆至真核表达载体pEGFP-C1转化DH5 α,重组体质粒pEGFP-C1-GnRH/TRS用LipoGen脂质体进行转染至Hela细胞,核酸序列测定和Western印迹分析基因表达,激光共聚焦荧光显微镜观察活细胞内荧光布局.结果 重组子pEGFP-C1-GnRH/TR成功构建.激光共聚焦荧光显微镜观察结果表明,GnRH/TKS-GFP融合基因的瞬间和稳定表达均获得了相同结果.结论 GnRH/TRS-GFP融合蛋白具有GFP的自发荧光特性,且不影响GnRH/TRS分子在细胞内的正确表达.  相似文献   

12.
张颖  白雪帆等 《Virologica Sinica》2003,18(1):23-26,T001
应用PCR扩增RANTES-KDEL基因,鉴定后与真核表达载体pCMV-S/K连接,构建成HIV-1辅受体的配体,趋化因子RANTES和SDF-1的融合表达载体pCMV-R-K-S-K,酶切鉴定和测序证明成功构建了pCMV-R-K-S-K融合表达载体。脂质体介导pCMV-R-K-S-K转染HeLa细胞,间接免疫荧光证实了RANTES和SDF-1可高效表达于HeLa细胞。细胞表明构建的pCMV-R-K-S-K融合表达载体能在HeLa细胞中高效表达,可用于下一步的HIV-1感染实验。  相似文献   

13.
应用PCR扩增RANTES-KDEL基因,鉴定后与真核表达载体pCMV-S/K连接,构建成HIV-1辅受体的配体、趋化因子RANTES和SDF-1的融合表达载体pCMV-R-K-S-K,酶切鉴定和测序证明成功构建了pCMV-R-K-S-K融合表达载体.脂质体介导pCMV-R-K-S-K转染HeLa细胞,间接免疫荧光证实RANTES和SDF-1可高效表达于HeLa细胞.结果表明构建的pCMV-R-K-S-K融合表达载体能在HeLa细胞中高效表达,可用于下一步的HIV-1感染实验.  相似文献   

14.
To construct the eukaryotic expression vector of HIV-1 gp120 gene and observe its expression in vitro, the recombinant expression vector pVAX1GP120 was constructed by inserting the gp120 gene into the eukaryotic expression vector pVAX1. The pVAX1GP120 was transfected into Vero cells by lipofectamine and the expressed product was detected by indirect immunofluore- scence.Restriction enzymes digestion analysis and sequencing results revealed that the recombinant expression vector pVAX1GP120 has been constructed successfully. The indirect immunofluorescence result showed green fluorescence on the membrane of transfected cells. The constructed eukaryotic expression vector of HIV-1 gp120 can be expressed in vitro, which lay the foundation for the further study of HIV-1 DNA vaccine.  相似文献   

15.
目的:构建人IL-3基因原核表达载体pET32a-IL-3,并在大肠杆菌中诱导表达。方法:通过佛波酯(TPA)和植物球血凝素(PHA)刺激人T淋巴细胞系Jurkat细胞,增加IL-3mRNA表达水平,提取mRNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得cDNA,以Jurkat细胞cDNA为模板,通过PCR方法扩增得到人IL-3基因,将其克隆入原核表达载体pET32a(+)中,将重组质粒转化入大肠杆菌宿主菌株BL21中,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,并通过改变IPTG浓度,诱导时间,诱导温度等条件最终实现蛋白的可溶性表达。表达产物用SDS-PAGE检测表达情况。结果:酶切鉴定和测序结果证明成功构建了原核表达载体pET32a-IL-3。SDS-PAGE检测结果证明实现了人IL-3基因在大肠杆菌中的可溶性表达。结论:成功构建了人IL-3基因的原核表达载体并在大肠杆菌中获得了良好的表达。  相似文献   

16.
以质粒PEGFP-N3中增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)基因片段为模板,利用PCR技术扩增得到EGFP基因片段,并设计引物在其2端引入酶切位点EcoRⅠ和HindⅢ,对引入酶切位点的EGFP片段和pET28a质粒进行双酶切处理后,利用T4连接酶连接得到了重组质粒pET28a-EGFP。利用热击法把得到的重组质粒pET28a-EGFP转化至E.coliBL21(Escherichia coliBL21)感受态细胞中,当大肠埃希菌LB(Luria-Bertani)培养液在600 nm下的光密度值OD600=0.4时,通过添加异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)作为诱导剂诱导EGFP表达。结果表明:重组质粒酶切鉴定及测序结果正确。在自然光下,转化子在LB固体培养基(含1 mmol/L的IPTG和50μg/mL的卡那霉素(Kan))中菌落呈绿色。在荧光显微镜下受蓝光激发,可以清楚观察到发绿色荧光的转化子。成功构建的原核表达载体pET28a-EGFP在E.coliBL21中得到了高效表达,为以后作为荧光标记物标记食源性病原菌提供了一定的理论和技术支持。  相似文献   

17.
目的:构建真核表达质粒p EGFP-N1-HGF并观察干细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)在人皮肤成纤维中的表达。方法:从扩增人的间充质干细胞中提取全长RNA为模板,设计合成引物,用RT-PCR法扩增出HGF基因片段,然后将HGF基因片段连接于真核表达质粒p EGFP-N1中。双酶切鉴定及测序分析后,用脂质体包裹转染体外培养的人的皮肤成纤维细胞,通过荧光显微镜观察其转染效果,酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测HGF蛋白的表达。结果:经酶切鉴定及测序验证p EGFP-N1-HGF构建正确,经转染的人皮肤纤维细胞中观察到较强的绿色荧光并且可以表达一定量的HGF。结论:成功构建了真核表达质粒p EGFP-N1-HGF,为基因治疗脱发疾病提供实验基础。  相似文献   

18.
严学倩  尹郸丹  付伟  韩骅  梁英民 《生物磁学》2011,(15):2832-2835
目的:构建人IL-3基因原核表达载体pET32a-IL-3,并在大肠杆菌中诱导表达。方法:通过佛波酯(TPA)和植物球血凝素(PHA)刺激人T淋巴细胞系Jurkat细胞,增加IL-3mRNA表达水平,提取mRNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得cDNA,以Jurkat细胞cDNA为模板,通过PCR方法扩增得到人IL-3基因,将其克隆入原核表达载体pET32a(+)中,将重组质粒转化入大肠杆菌宿主菌株BL21中,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,并通过改变IPTG浓度,诱导时间,诱导温度等条件最终实现蛋白的可溶性表达。表达产物用SDS-PAGE检测表达情况。结果:酶切鉴定和测序结果证明成功构建了原核表达载体pET32a.IL-3。SDS-PAGE检测结果证明实现了人IL-3基因在大肠杆菌中的可溶性表达。结论:成功构建了人IL-3基因的原核表达载体并在大肠杆菌中获得了良好的表达。  相似文献   

19.
鸡输卵管特异表达载体的构建及其体内表达   总被引:12,自引:0,他引:12       下载免费PDF全文
用高保真PCR法分别从中国狼山鸡基因组DNA中扩增出卵清蛋白基因(ov)的5′和3′调控区,将其克隆入pGEMT载体,经序列测定证明与已发表的ov基因相应区域无差异。将上述调控序列插入黏粒载体,构建成鸡输卵管特异表达载体pOV。再将lacZ报告基因克隆在上述载体5′调控区的下游,获得的重组载体命名为pOVlacZ。用脂质体包裹的pOVlacZ注射产蛋鸡,RTPCR检测结果表明lacZ基因仅在注射鸡输卵管的膨大部表达,不能在肝、脾、肾、心等组织表达。在上述组织中,仅输卵管膨大部能检测出β半乳糖苷酶活性(1167mUml),注射雌激素对报告基因的表达具有促进作用(1533mUml),重组酶能被分泌到鸡蛋的蛋清中(1733mUml)。结果表明,克隆的鸡ov基因调控区能有效驱动报告基因在输卵管的特异表达,构建的载体能用于鸡输卵管生物反应器的研制。  相似文献   

20.
中国株HIV-1外膜蛋白真核表达载体的构建与表达   总被引:5,自引:1,他引:4  
获得性免疫缺陷综合征(Acquired immunode- ficiency syndrome,AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)引起的世界广泛流行、严重危害人类健康的疾病.  相似文献   

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