2007-2008陕西部分零售畜禽肉沙门氏菌血清型和基因型

【目的】研究359株在2007-2008年分离于陕西部分地区零售畜禽肉中沙门氏菌的血清型和基因型,为确保食品安全提供依据。【方法】使用WHO指定的泰国SA公司的沙门氏菌诊断血清,采用玻片凝集法测定沙门氏菌的血清型。使用美国疾病预防控制中心推荐的脉冲场凝胶电泳方法确定沙门氏菌的DNA酶切图谱,BioNumerics软件分析电泳结果,确定沙门氏菌的基因型。【结果】359株沙门氏菌共检出24个血清型,以肠炎沙门氏菌(Salmonella Enteritidis)、鼠伤寒沙门氏菌(S.Typhimurium)、舒卜拉沙门氏菌(S.Shubra)、印第安纳沙门氏菌(S.Indiana)和德尔卑沙门氏菌(S.Derby)等为主,不常见血清型有圣保罗沙门氏菌(Salmonella Saintpaul)、里地乌沙门氏菌(S.Rideau)、田纳西沙门氏菌(S.Tennessee)、汤卜逊沙门氏菌(S.Thompson)、加里玛沙门氏菌(S.Galiema)、卡罗尔沙门氏菌(S.Kallo)、沙门氏菌Ⅲa(S.Ⅲa)、罗森沙门氏菌(S.Rissen)和布兰卡斯特沙门氏菌(S.Brancaster)等。鸡肉中最常见血清型为肠炎沙门氏菌,猪肉和羊肉中以德尔卑沙门氏菌检出率最高,而牛肉中以里地乌沙门氏菌为主。359株沙门氏菌使用XbaⅠ酶切分型后,按照88%的基因同源性,可分为7个大簇。同一血清型的沙门氏菌分型后基本位于同一大簇之中,虽然部分沙门氏菌的血清型不同,但分型后仍表现出较高的基因同源性和相似的基因型。【结论】陕西零售肉沙门氏菌的血清型和基因型表现为多样性的特征。     

华南四省食品中空肠弯曲菌分离株的毒力相关基因分析和ERIC-PCR分型

【目的】了解空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)在华南四省食品中的污染状况及其遗传多样性,为食源性病原菌的风险监测和控制提供基础数据。【方法】采用传统国标和MPN组合的方法对华南四省市售生鲜禽畜肉及其制品、生食蔬菜、熟食、水产品、速冻食品、奶制品、食用菌7大类食品进行C.jejuni污染调查,对分离到的C.jejuni菌株进行12种毒力相关基因检测分析和ERIC-PCR分型。【结果】2011-2012年共检测样品558份,检出阳性样品14份,检出率2.51%,其中肉与肉制品的检出率达13.2%,污染量达8.77 MPN/g,获得C.jejuni14株。毒力相关基因分析显示9种毒力相关基因的携带率超过50%,而pldA和wlaN的携带率均为14.3%,virB11的携带率为0。ERIC-PCR分析结果显示15株C.jejuni可分为3簇共10种基因型,其中簇A中有4株的指纹图谱基本相同。【结论】华南四省中的生鲜禽肉类样品,存在不同程度的空肠弯曲菌污染,尤其是福州的鸭肉样品,其MPN值大于110 MPN/g,应加强生禽肉类的食品安全防控。     

我国部分地区即食食品和蔬菜中金黄色葡萄球菌污染分布及耐药和基因分型情况

【目的】系统调查了我国15个代表性城市在即食食品(卤肉、烤肉、凉拌菜和巴氏奶)和蔬菜样品中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的污染分布情况,并对分离株进行耐药性分析及多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)研究,为食源性金黄色葡萄球菌的风险识别和分子溯源提供基础数据。【方法】依据GB 4789.10-2010对540份即食食品和蔬菜样品进行定性和最大可能数(Most probable number,MPN)分析;采用K-B纸片扩散法检测金黄色葡萄球菌分离株的耐药特征并通过PCR检测mecA基因;应用MLST方法确证金黄色葡萄球菌的主要ST型。【结果】结果发现9.3%(50/540)的样品中检出金黄色葡萄球菌,其中卤肉污染率最高,为16.3%(30/184),其次为烤肉(9.2%,6/65),蔬菜(6/150,4.0%)污染率最低。定量分析发现62.0%的阳性样品污染水平处于0.3–1.0 MPN/g,其中3份阳性样品污染水平≥110 MPN/g。对50株分离株进行24种抗生素耐药性检测,发现82.0%的分离株对氨苄西林和青霉素耐药,64.0%的分离株为多重耐药株。对mecA阳性分离株进行SCCmec分型,发现均为SCCmecⅣa。所有分离株进行MLST分型,共检出14种型别,其中ST3595和ST3847为新ST型。【结论】普遍的多重耐药性表明我国食源性金黄色葡萄球菌的耐药状况已较为严重,对消费者的安全健康存在潜在威胁。ST型与耐药存在一定的关联性,这为进一步了解该菌在我国食品中的流行趋势和风险评估提供了科学的数据支撑。     

德尔卑沙门氏菌分子等温活菌检测体系的建立

【背景】德尔卑沙门氏菌(Salmonella enterica subsp.enterica Derby)是危害人类生命安全的主要致病性血清型。【目的】建立一种准确、快速检测德尔卑沙门氏菌的方法。【方法】通过建立叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)-重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)的方法准确有效地检测样品中的活德尔卑沙门氏菌。【结果】使用基因RU61＿00441作为检测靶点,设计引物SD1正确地鉴定了所有被测菌株。实验结果表明,PMA处理能有效区分活细胞和死细胞。基因组DNA检测限为761.2 fg/μL,活菌检测限为45 CFU/m L。此方法检测德尔卑沙门氏菌的血清型不受自然背景(猪肉、鸡肉和牛肉)菌群基因组DNA的影响。此外,该方法还可以检测出动物性食品中富集6 h后浓度低至3.9 CFU/m L的德尔卑沙门氏菌。【结论】这种PMA-RPA检测方法耗时短并具有更好的灵敏度和特异性,能为沙门氏菌的检测提供更有效的指导。     

后疫情时代下市售生鲜猪肉中单增李斯特菌的污染评估

【背景】2019年底新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)疫情的流行给食品安全带来了挑战。【目的】评估后疫情时代市售生鲜猪肉中单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)的污染情况。【方法】选取2020-2021年疫情期间不同地点、不同包装方式、不同季度的生鲜猪肉,分析单增李斯特菌的污染率和污染水平,并对分离菌株的流行病学特征进行分析。【结果】生鲜猪肉中单增李斯特菌的污染率为15.28% (77/504),其中猪肉直营店和农贸市场的污染率高于超市。不同包装方式中,预包装和简易包装的污染率高于散装样品,并且不同季度的污染率存在显著性差异,第三季度污染率最高,为27.78%。定量结果发现,40.26%超过10 MPN/g (MPN：most probable number),其中有3个样品的污染水平超过100 MPN/g。血清型分析结果发现,1/2a-3a (48.05%)和1/2c-3c (44.16%)为主要血清型。耐药性试验结果表明,19.50%的分离株存在多重耐药,有2株(2.60%)对所有抗生素都敏感,68株(88.30%)对苯唑西林耐药,46株(59.70%)对氨苄西林耐药,45株(58.40%)对头孢噻肟耐药。【结论】后疫情时代下不同地点、不同包装方式、不同季度的市售生鲜猪肉中存在不同程度的单增李斯特菌污染,个别产品污染水平较高,血清分布和耐药特征多样,有必要加强食品安全监管,以减少食源性疾病的发生。     

禽源多重耐药金黄色葡萄球菌耐药基因检测及分子分型

【背景】金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性菌,在动物和人身上能引起一系列疾病。【目的】了解安徽省不同地区禽源多重耐药金黄色葡萄球菌耐药性的情况及基因分型特征。【方法】以安徽不同地区的病禽肝脏作为标本,分离鉴定得到103株多重耐药金黄色葡萄球菌,并进行耐药基因型检测和ERIC-PCR分子分型。【结果】耐药菌株从三重到八重耐药均有分布,主要集中在五重(43/103)、四重(21/103)和六重耐药(22/103)。药敏结果显示,β-内酰胺类的耐药率最高(79.6%),氨基糖苷类次之(71.8%)。耐药基因检出率由高到低分别为mec A(92.2%)、aac(6′)/aph(2″)(76.7%)、ermC(37.9%)、ermA(13.6%)和fem A(3.9%)。ERIC-PCR分子分型获得6种不同类群,优势流行菌群为类群Ⅱ(38/103)。【结论】安徽地区金黄色葡萄球菌存在较严重的耐药性,氨基糖苷类、β-内酰胺类和大环内酯类抗生素的耐药基因携带率较高。分型结果表明安徽部分区域耐药金黄色葡萄球菌具有遗传多样性,但耐药谱与ERIC-PCR分子分型无明显关联。     

植物乳杆菌培养上清对不同血清型沙门氏菌的抑制效果及作用机理

【目的】探究植物乳杆菌培养上清(Lactobacillus plantarum culture supernatant,LPC)对3种血清型沙门氏菌猪霍乱(Salmonella cholerae,SC)、肠炎(Salmonella enteritidis,SE)和鸡白痢(Salmonella pullorum, SP)的生长和致病性的抑制作用效果及机理。【方法】将2%LPC与3种沙门氏菌分别共培养后,采用比浊法及牛津杯抑菌圈试验检测沙门氏菌生长情况及LPC中的主要抑菌物质,使用实时荧光定量PCR (quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)探究沙门氏菌致病性相关基因表达水平,最后通过结晶紫染色法检测沙门氏菌的生物被膜。【结果】2%LPC能够显著抑制3种沙门氏菌的生长,其作用效果与庆大霉素(gentamicin, GM)相近且对SE的生长抑制效果优于GM,其主要抑菌物质为有机酸;2%LPC对3株沙门氏菌SPI-1编码的主要毒力基因(InvA、InvF、SopE、SopB、SipB、HilA和SipA)、SPI-2毒...     

苏北地区白羽肉鸡父母代种鸡及其商品鸡中沙门氏菌的分离、鉴定与生物特性

【背景】沙门氏菌是一种重要的人兽共患食源性致病菌,控制沙门氏菌在动物中的感染和在食品生产链中的污染对于畜牧生产、公共卫生和食品安全具有重要意义。【目的】调查苏北地区某白羽肉鸡父母代种鸡及其商品鸡的沙门氏菌感染和流行情况,为其沙门氏菌防治提供参考依据。【方法】于2018?2019年从江苏泰州、宿迁、盐城、徐州、连云港等地区分别采集某白羽肉鸡父母代种鸡场产蛋鸡及其商品鸡场1?2日龄弱雏和10日龄雏鸡的泄殖腔拭子样品共360份,进行沙门氏菌的分离与鉴定,用纸片法和PCR方法对菌株耐药表型及相关耐药基因进行检测,通过多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术对分离菌株的亲缘关系进行研究。【结果】从120份父母代产蛋鸡分离到3株沙门氏菌,从120份商品代1?2日龄弱雏分离到25株沙门氏菌,从120份商品代10日龄雏鸡分离到82株沙门氏菌。分离的沙门氏菌对多粘菌素B、亚胺培南、多西环素、甲氧苄啶、替加环素、氟苯尼考、头孢噻肟、恩诺沙星表现为全部敏感,对呋喃妥因、青霉素、利福平、利奈唑胺、万古霉素均表现为全部耐药;对阿莫西林耐药的菌株有30株(占27.27%),敏感的有80株(占72.73%)。耐药基因的PCR检测结果显示：β内酰胺类耐药基因blaTEM存在于所有沙门氏菌分离株中,但其他常见耐药基因在本研究的分离株中未发现。通过对分离菌7对管家基因进行PCR扩增、测序和MLST分型,发现所有沙门氏菌分离株的ST型均为ST11,属于肠炎沙门氏菌。MLST分型结果结合药敏试验结果表明,分离的沙门氏菌属于同一进化系统,具有相同或相似的来源。【结论】被调查商品鸡群的肠炎沙门氏菌感染很可能是其同一来源的父母代种鸡场垂直传播所致,这为该地区白羽肉鸡的沙门氏菌防治提供了参考。     

2012–2015年江淮地区猪丹毒杆菌分离株血清型、spaA基因遗传进化及PFGE基因型分析

【目的】了解2012–2015年江淮地区猪丹毒杆菌分离株血清型分布、spaA基因遗传进化关系和基因分型特征。【方法】收集临床分离鉴定的42株猪丹毒杆菌，应用琼脂扩散沉淀实验、PCR扩增和序列分析技术、脉冲场凝胶电泳分型技术(PFGE)分别测定分离株的血清型、spaA基因遗传变异性及PFGE基因型。【结果】42株猪丹毒杆菌分离株血清型均为1a型；spaA基因与猪丹毒杆菌国内外参考株核苷酸序列相似性为98.5%–100%，分离株在第609 bp处出现T突变为G、769 bp处C突变为A，对应的氨基酸第203位Ile突变为Met、第257位Leu突变为Ile，为Met-203、Ile-257型；分离株形成8个PFGE基因型，相似度达88.8%–100%，优势基因型为ER2 (54.8%)，弱毒疫苗G4T10和GC42株独立为同一个基因型。【结论】江淮地区致病猪丹毒杆菌流行血清型为1a型，spaA基因相似性高，分离株变异小、源于同一克隆系，Met-203、Ile-257型菌株致病力强，是江淮地区猪丹毒发生与流行的主要致病菌型。     

副猪嗜血杆菌安徽株血清型、基因型及耐药性

【背景】副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis,HPS)是猪革拉瑟氏病(Gl?sser’sdisease)的病原体,由于长期使用抗生素产生的耐药性以及灭活疫苗缺乏交互免疫保护力,目前对该病无法形成有效防控。【目的】了解安徽地区副猪嗜血杆菌血清型、基因型及耐药性特征,为猪革拉瑟氏病的有效防控提供科学依据和技术支撑。【方法】针对2008–2017年安徽地区分离的44株HPS,利用PCR反应鉴定血清型,应用多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)进行基因分型,通过微量稀释法测定最小抑菌浓度(minimalinhibitoryconcentration,MIC)。【结果】44株HPS共检测出6种血清型(1、4、5、7、13、14),血清型4型和13型为优势血清型,各占40.91%;9种ST型(ST241、ST267、ST268、ST269、ST270、ST271、ST272、ST273和ST274)中ST267和ST268为优势基因型,各占40.91%;对庆大霉素、青霉素的敏感率分别为100%和93.2%,86.4%的分离株呈现多重耐药,耐药谱型有33种,其中以甲氧苄啶/磺胺甲噁唑-四环素构成比最大,为42.4%。【结论】安徽地区HPS流行血清型和基因型呈现多元化,具有较高的遗传异质性,多重耐药现象严重,血清型、ST型与耐药性之间无明显相关性。