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1.
以玉米根微粒体为材料进行的微量放射配体结合(MRLB)实验表明玉米根微粒体膜上存在着ABA结合位点,ABA与ABA结合蛋白(ABA-BP)结合的最适pH为6.5,结合反应对温度(0℃和25℃)不太敏感,ABA与ABA-BP的结合反应是一个动态平衡过程,5min即可达最大结合(Bmax)的50%,30min达到最大结合,1h内基本保持不变。胰蛋白酶处理表明此结合位点为蛋白质,冻融实验则表明此蛋白与ABA的结合不仅要求其自身具有特定构象而且需要有一定的膜脂环境,DTT处理实验结果显示ABA-BP中可能存在着二硫键。逆境处理可以提高玉米根微粒体膜对ABA的结合活性,盐胁迫、渗透胁迫、干旱胁迫和热冲激处理分别使结合活性上升34.9%、17.8%、23.1%和13.3%。 相似文献
2.
葡萄果实微粒体上存在高亲和力的脱落酸(ABA)结合位点,这些位点与ABA的结合具有饱和性,高亲和力及低容量,胰蛋白酶或DTT处理可以使该位点的特异结合活性下降约90%,表明此结合位点是一种蛋白质,故称为ABA结合蛋白,它含有维系蛋白质特定构象的二硫键,该蛋白与ABA反应的最适pH为6.0,说明与配基结合部位可能存在带有正电荷的氨基酸残基,结合活性在25℃高于0℃,结合反应达到动态平衡需要30min,30min以后结合活性随时间延长而下降。该蛋白与ABA结合反应的平衡解离常数为17.5nmol/L,最大结合容量(Bmax)为98.4fmol/mgprotein。 相似文献
3.
葡萄果实中脱落酸结合蛋白的存在及其性质 总被引:4,自引:0,他引:4
葡萄果实微粒体上存在高亲和力的脱落酸(ABA)结合位点,这些位点与ABA的结合具有饱和性,高亲和力及低容量。胰蛋白酶或DTT处理可以使该位点的特异结合活性下降约90%,表明此结合位点是一种蛋白质,故称为ABA结合蛋白,它含有维系蛋白质特定构象的二硫键。该蛋白与ABA反应的最适pH为6.0,说明与配基结合部位可能存在带有正电荷的氨基酸残基,结合活性在25℃高于0℃,结合反应达到动态平衡需要30min 相似文献
4.
玉米根ABA结合蛋白的亚细胞定位及动力学性质 总被引:9,自引:0,他引:9
以玉米(Zea maysL.)根或胚芽鞘为材料,经匀浆、分级离心得到胞质部分和膜部分(微粒体),进一步用6.2% (W/W ) Dextran T500 和PEG 3350 两相系统制备质膜,用1% 和8% (W /W) Dextran T70 梯度离心制备液泡膜. 电镜鉴定及多种标志酶检测表明,制备获得了高纯度正向型质膜和富含液泡膜的组分,其它内膜的污染很少. 用微量放射配体结合(MRLB)实验证明,玉米根微粒体的ABA专一性结合位点主要分布在液泡膜和质膜上,这两种膜组分与ABA 的特异结合活性分别为2485.4 fm ol/m g protein 和1257.3 fm ol/m g pro-tein,玉米根段胞质部分结合活性最低(差一个数量级).质膜上ABA-BP与ABA 的结合平衡解离常数(KD)为1.57 nm ol/L. 相似文献
5.
蚕豆叶片下表皮ABA结合蛋白提取及分离条件的选择 总被引:1,自引:0,他引:1
以蚕豆(ViciafabaL.)叶片下表皮为材料,比较TritonX100、冷丙酮和(NH4)2SO4对ABA结合蛋白(简称ABABP)的提取效果。结果表明:0.5%(W/V)TritonX100去垢剂提取的ABABP与ABA特异结合活性较高(0.487nmol/gprotein),维持结合活性的时间较长(4℃下反应40h保持最大结合的60%);而冷丙酮法提取的ABABP特异结合活性只有0.325nmol/gprotein,且容易失活,10h仅保持最大结合的30%左右。实验比较了各种盐离子对ABABP的影响,高盐(>300mmol/LNaCl)不利于ABABP的结合反应,低浓度KCl对ABABP活性略有促进。ABABP的结合活性需要介质中有一定量的Ca2+和Mg2+,用EDTA螯合介质中Mg2+、Ca2+后,ABABP活性大大降低,分别为最大结合的75%和60%。ABABP与ABA反应的最适pH在6.5,这些条件为亲和层析纯化ABABP提供了依据。 相似文献
6.
猪肝微粒体NADH—细胞色素b5还原酶的纯化及特性分析 总被引:2,自引:0,他引:2
采用硫酸铵分级分离,Sephadex G-100凝胶过滤,DEAE-纤维素离子交换层析以及5'-AMP-Sepharose 4B亲和层析,从猪肝微粒体中纯化得到可溶性的NADH-细胞色素b5还原酶,提纯倍数为750-800。总回收率为40%左右。纯化的酶呈典型的黄素蛋白吸收光谱,A273/A460比值为5.8.在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳板上呈单一的蛋白质区带,分子量为32kd。NADH和2,6- 相似文献
7.
采用硫酸铵分级分离,SephadexG-100凝胶过滤,DEAE-纤维素离子交换层析以及5'-AMP~Sepharose4B亲和层析,从猪肝微粒体中纯化得到可溶性的NADH-细胞色素b5还原酶,提纯倍数为750~800。总回收率为40%左右。纯化的酶是典型的黄素蛋白吸收光谱,A273/A460比值为5.8。在SDS-聚丙烯酸胺凝胶电泳板上呈单一的蛋白质区带,分子量为32kd。NADH和2,6-二氯酚靛酚的Km值分别为24和45μmol/L,以2,6-二氯酚靛酚为底物时,该还原酶的催化作用可能为乒乓机制。该酶的纯化为分子水平研究其反应机制及制备相应的抗体以建立免疫学检测方法创造了条件。 相似文献
8.
小麦叶绿体中的CTK结合蛋白属热敏感蛋白,它与6-BA结合的最适温度约为25℃;最适pH为8左右;在其蛋白分子上存在两类CTK结合位点,高亲和力位点与6-BA结合的Kα值为1.1×10-9mol/L,低亲和力位点的Kα值为9×10-7mol/L;激动素、玉米素对6-BA的结合只有部分抑制作用,而ABA、GA3、IAA及腺嘌呤则无竞争作用。CTK结合蛋白分子中的中性氨基酸含量很高,在中性介质中带弱负电。 相似文献
9.
本文报道了[B1~Ala,B2-Ala]-胰岛素与人胎盘细胞膜胰岛素受体结合的特性和体外生物活力,并与胰岛素进行比较。在37℃和杆菌肽存在下,125I-[B1-Ala,B2-Ala]-胰岛素和125I-胰岛素与人胎盘细胞膜作用依赖于反应时间,反应6分钟到达平衡,此时,[B1-Ala,B2-Ala]-胰岛素和胰岛素与胰岛素受体的最大结合分别为每毫克膜蛋白结合6.44fmol和3.47fmol:达到平衡一半所需时间(T1/2)分别为19秒和25秒。用125I-[B1-Ala,B2-Ala]-胰岛素作为放射配体进行竞争性结合研究,从IC(50)得[B1-Ala,B2-Ala]胰岛素的受体结合活力为胰岛素的139.6%。Scatohard分析求得;[B1-Ala,B2-Ala]-胰岛素与高亲和和低亲和结合位点的结合常数在4℃时分别为5.88×108L/mol和7.63×105L/mol,而胰岛素分别为4.83×108L/mol和3.39×105L/mol。促脂肪细胞生成脂的实验表明:[B1-Ala,B2-Ala]-胰岛素的活力为胰岛素的130%。 相似文献
10.
光亲和标记鉴定玉米根脱落酸结合蛋白 总被引:1,自引:0,他引:1
光亲和标记鉴定玉米根脱落酸结合蛋白吴忠义,陈珈,朱美君(北京农业大学生物学院,100094)关键词结合蛋白;光亲和标记;ABA;受体;微粒体脱落酸(ABA)作为一大类植物激素,在高等植物的生长发育以及对逆境的适应过程中发挥着重要作用。在探讨激素作用的... 相似文献