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相似文献
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1.
以玉米根微粒体为材料进行的微量放射配体结合(MRLB)实验表明玉米根微粒体膜上存在着ABA结合位点,ABA与ABA结合蛋白(ABA-BP)结合的最适pH为6.5,结合反应对温度(0℃和25℃)不太敏感,ABA与ABA-BP的结合反应是一个动态平衡过程,5min即可达最大结合(Bmax)的50%,30min达到最大结合,1h内基本保持不变。胰蛋白酶处理表明此结合位点为蛋白质,冻融实验则表明此蛋白与ABA的结合不仅要求其自身具有特定构象而且需要有一定的膜脂环境,DTT处理实验结果显示ABA-BP中可能存在着二硫键。逆境处理可以提高玉米根微粒体膜对ABA的结合活性,盐胁迫、渗透胁迫、干旱胁迫和热冲激处理分别使结合活性上升34.9%、17.8%、23.1%和13.3%。  相似文献   

2.
葡萄果实微粒体上存在高亲和力的脱落酸(ABA)结合位点,这些位点与ABA的结合具有饱和性,高亲和力及低容量,胰蛋白酶或DTT处理可以使该位点的特异结合活性下降约90%,表明此结合位点是一种蛋白质,故称为ABA结合蛋白,它含有维系蛋白质特定构象的二硫键,该蛋白与ABA反应的最适pH为6.0,说明与配基结合部位可能存在带有正电荷的氨基酸残基,结合活性在25℃高于0℃,结合反应达到动态平衡需要30min,30min以后结合活性随时间延长而下降。该蛋白与ABA结合反应的平衡解离常数为17.5nmol/L,最大结合容量(Bmax)为98.4fmol/mgprotein。  相似文献   

3.
葡萄果实中脱落酸结合蛋白的存在及其性质   总被引:4,自引:0,他引:4  
葡萄果实微粒体上存在高亲和力的脱落酸(ABA)结合位点,这些位点与ABA的结合具有饱和性,高亲和力及低容量。胰蛋白酶或DTT处理可以使该位点的特异结合活性下降约90%,表明此结合位点是一种蛋白质,故称为ABA结合蛋白,它含有维系蛋白质特定构象的二硫键。该蛋白与ABA反应的最适pH为6.0,说明与配基结合部位可能存在带有正电荷的氨基酸残基,结合活性在25℃高于0℃,结合反应达到动态平衡需要30min  相似文献   

4.
玉米根ABA结合蛋白的亚细胞定位及动力学性质   总被引:9,自引:0,他引:9  
以玉米(Zea maysL.)根或胚芽鞘为材料,经匀浆、分级离心得到胞质部分和膜部分(微粒体),进一步用6.2% (W/W ) Dextran T500 和PEG 3350 两相系统制备质膜,用1% 和8% (W /W) Dextran T70 梯度离心制备液泡膜. 电镜鉴定及多种标志酶检测表明,制备获得了高纯度正向型质膜和富含液泡膜的组分,其它内膜的污染很少. 用微量放射配体结合(MRLB)实验证明,玉米根微粒体的ABA专一性结合位点主要分布在液泡膜和质膜上,这两种膜组分与ABA 的特异结合活性分别为2485.4 fm ol/m g protein 和1257.3 fm ol/m g pro-tein,玉米根段胞质部分结合活性最低(差一个数量级).质膜上ABA-BP与ABA 的结合平衡解离常数(KD)为1.57 nm ol/L.  相似文献   

5.
蚕豆叶片下表皮ABA结合蛋白提取及分离条件的选择   总被引:1,自引:0,他引:1  
以蚕豆(ViciafabaL.)叶片下表皮为材料,比较TritonX100、冷丙酮和(NH4)2SO4对ABA结合蛋白(简称ABABP)的提取效果。结果表明:0.5%(W/V)TritonX100去垢剂提取的ABABP与ABA特异结合活性较高(0.487nmol/gprotein),维持结合活性的时间较长(4℃下反应40h保持最大结合的60%);而冷丙酮法提取的ABABP特异结合活性只有0.325nmol/gprotein,且容易失活,10h仅保持最大结合的30%左右。实验比较了各种盐离子对ABABP的影响,高盐(>300mmol/LNaCl)不利于ABABP的结合反应,低浓度KCl对ABABP活性略有促进。ABABP的结合活性需要介质中有一定量的Ca2+和Mg2+,用EDTA螯合介质中Mg2+、Ca2+后,ABABP活性大大降低,分别为最大结合的75%和60%。ABABP与ABA反应的最适pH在6.5,这些条件为亲和层析纯化ABABP提供了依据。  相似文献   

6.
猪肝微粒体NADH—细胞色素b5还原酶的纯化及特性分析   总被引:2,自引:0,他引:2  
采用硫酸铵分级分离,Sephadex G-100凝胶过滤,DEAE-纤维素离子交换层析以及5'-AMP-Sepharose 4B亲和层析,从猪肝微粒体中纯化得到可溶性的NADH-细胞色素b5还原酶,提纯倍数为750-800。总回收率为40%左右。纯化的酶呈典型的黄素蛋白吸收光谱,A273/A460比值为5.8.在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳板上呈单一的蛋白质区带,分子量为32kd。NADH和2,6-  相似文献   

7.
用植物体内天然存在并具有很高活性的玉米素(t-Z)和异戊烯基腺苷(iPA)作为配基,分别与Sepharose-4B偶联,制成亲和吸附介质,分离、纯化菜豆(Phaseolus vulgaris)黄化幼苗下胚轴中的细胞分裂素结合蛋白。一种分子量为15.5 kD(简称ZBP),只含一个多肽链;另一种分子量为165 kD(简称IBP),含有两种亚基,分子量分别为43 kD和40 kD。对ZBP的结合活性进行了研究,发现ZBP与t-Z结合时的解离常数(Kd)为3.2×10- 7 m ol/L。经计算,每个ZBP分子只有一个t-Z结合位点  相似文献   

8.
小麦叶绿体中的CTK结合蛋白属热敏感蛋白,它与6-BA结合的最适温度约为25℃;最适pH为8左右;在其蛋白分子上存在两类CTK结合位点,高亲和力位点与6-BA结合的Kα值为1.1×10-9mol/L,低亲和力位点的Kα值为9×10-7mol/L;激动素、玉米素对6-BA的结合只有部分抑制作用,而ABA、GA3、IAA及腺嘌呤则无竞争作用。CTK结合蛋白分子中的中性氨基酸含量很高,在中性介质中带弱负电。  相似文献   

9.
Nm23-H1/NDPK-A基因在大肠杆菌中的高效表达及产物纯化的研究   总被引:15,自引:1,他引:14  
利用聚合酶链反应(PCR)技术扩增人二磷酸核苷激酶A亚基(NDPK-A)基因,即nm23-H1/NDPK-K基因的编码序列,经序列分析后,定向克隆于表达质粒载体pBV220,在大肠杆菌DH5α中高效表达出重组人NDPK-A.表达产物为可溶性的非融合蛋白,占菌体总蛋白42%.斑点ELISA法鉴定表明表达产物与NDPK-A标准抗血清呈阳性反应.以DEAE纤维素弱阴离子交换层析、CibacronBlue染料亲和层析结合高效液相排阻色谱技术纯化rNDPK-A,得纯度为96.7%的目标蛋白.以反相高效液相色谱法进行酶活性分析,表明纯化的rNDPK-A能催化ATP+UDP=ADP+UTP的反应,比活性为800U/mg蛋白.  相似文献   

10.
精氨酸加压素(AVP)的C端内片段,AVP(4-8),具有增强记忆的功能,它在大鼠脑内引发一系列的生理和生化变化。GTP-结合调节蛋白(G蛋白)介导多数神经肽和神经调质的细胞内生理生化反应,放射性受体结合实验显示,在海马突触膜上存在AVP(4-8)的特异性结合位点。AVP(4-8)在海马突触膜上的结合能够进一步刺激GTPγS结合并可被AVP(4-8)的受体拮抗剂ZDC(C)PR所逆转。从以上实验结  相似文献   

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