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1.  L—赖氨酸高产菌株选育的研究  被引次数:3
   齐秀兰  阎浩林《微生物学杂志》,1997年第17卷第2期
   L-赖氨酸产生菌钝齿棒杆菌(Corynebacteriumcrenatum)N30-25菌株经紫外线诱变处理,分别在含有不同浓度的七叶苷的培养基上进行筛选,经摇瓶多次复筛获得了3株高产变异菌株。对这3株菌在相同发酵条件下进行发酵生产L-赖氨酸,与出发菌株比较,产量提高了22-31%,经过3次传代,产生L-赖氨酸能力仍很稳定。    

2.  发酵法生产L-精氨酸放大过程的工艺研究  被引次数:3
   龚建华 丁久元 陈琦 郑翠风 刘增强《微生物学报》,1991年第31卷第6期
   本文报道了L-精氨酸产生菌株钝齿棒状杆菌突变株971.1继摇瓶发酵条件研究后所进行的2.6L台式发酵罐,2 0 0L和2000L通用发酵罐放大试验及其工艺条件研究的结果。试验表明,发酵PH值及供氧强度的合理控制对提高L-精氨酸的积累量非常重要。在所获得的工艺条件下,2000L发酵罐稳产试验的产酸率平均可达29.0mg/ml,最高32.0mg/ml。发酵液中L-精氨酸的提取收率平均为55.9%,最高可达66.04%。产品的质量符合药典标准。本文也对试验结果进行了分析与讨论。    

3.  L-赖氨酸分批发酵连续补糖的研究  被引次数:1
   龚建华 陈琦《生物工程学报》,1987年第3卷第4期
   用L-赖氨酸产生株纯齿棒状杆菌PI-3-2(Hsc-,AEC+)在8L自控发酵小罐上,用恒稀释率指数递增方式连续补加葡萄糖液进行L-赖氨酸分批发酵的研究。结果表明,一次投糖分批发酵时,较高糖浓度使比产酸速率Qp值下降,不能有效地提高产酸水平。采用连续补糖方式可以改变菌体竞争底物的能力或改善代谢途径,增大耗底物分数a2或真正产酸率yp,;从而增加表观产酸率Yp值,提高葡萄糖转化率。此方式的发酵属Caden动力学分类第I型,在发酵的中后期控制H等条件,可增加比产酸速率Qp值,提高发酵水平。PI-3-2菌株的产酸水平可由47.Mg/ml提高到64.2mg/ml(总糖浓度18.18%时),避离可达73.3mg/m1(总糖浓度22.73mg/ml时)。    

4.  枯草芽孢杆菌C1—B941的D—核糖发酵中间试验  
   孙文敬 付春生《工业微生物》,1999年第29卷第4期
   使用转酮醇酶变异株-枯草芽孢杆菌C1-B941进行了D-核糖发酵中间试验。3000L发酵罐试验结果表明,发酵培养基中的葡萄糖浓度为18%时,发酵周期约为64h,发酵转化率达36.84%,发酵液经离子交换树脂纯化后,可以直接用于生产VB2合成的中间体-N-D-核糖醇基-3,4-二甲苯胺。    

5.  L-精氨酸产生菌诱变育种的研究  被引次数:12
   路志强 龚建华 丁久元 陈琦《微生物学报》,1988年第28卷第2期
   本文报道了L-精氢酸产生菌诱变育种的研究结果。以谷氨酸产生菌钝齿棒状杆菌AS1.542为出发菌株,经亚硝基胍多次逐级诱变,获得了一株能够积累大量L-精氨酸的菌株971.1。该菌属于组氢酸缺陷型,并具有对磺胺孤的抗药性。在以葡萄糖为碳源、硫酸铵为氮源的培养基中直接发酵四天,产酸最高可达25·2 mg/ml,并具有较高的产酸稳定性。    

6.  过量表达钝齿棒杆菌柠檬酸合酶编码基因prpC2对L-精氨酸合成的影响  
   房战  徐美娟  饶志明  满在伟  许正宏  耿燕  陆茂林《中国生物工程杂志》,2015年第3期
   钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)SYPA5-5是诱变选育的一株高产精氨酸菌株。柠檬酸合酶作为TCA途径的关键酶,对细胞胞内氨基酸代谢流调节有重要作用。在钝齿棒杆菌SYPA5-5中过量表达同源的柠檬酸合酶(citrate synthase)基因prp C2,研究其对精氨酸及副产物合成的影响。重组菌C.crenatum SYPA5-5/p DXW-10-prp C2胞内柠檬酸合酶比酶活提高了5.37倍,使L-精氨酸产量在5L发酵罐中达到44.7g/L,与对照相比提高了23.1%。同时,有机酸测定分析TCA循环的精氨酸前体柠檬酸及异柠檬酸的量有所提高,且赖氨酸合成前体草酰乙酸量减少,氨基酸测定分析L-精氨酸发酵中最主要的副产物L-赖氨酸浓度由原来的5.96g/L降到1.21g/L,降低了80%。    

7.  二甲基亚砜和吐温80对钝齿棒杆菌产生赖氨酸影响的研究  被引次数:1
   齐秀兰 阎浩林《生物技术》,1997年第7卷第5期
   以赖氨酸产生菌钝齿捧杆菌(Corynebacteriumcrenatum)E0.7-66(HS ,AECrr,TArr,ESr)为出发菌种,对菌体进行亚硝酸诱变处理,并且通过提高抗七叶苷[1,2]剂量,筛选得到高抗七叶苷突变株E0.8-26,其L-赖氨酸产量较出发菌株提高了13.1%.在发酵至28h时,加入0.2%的吐温80或0.5%的二甲基亚砜,分别又使L-赖氨酸产量提高12.8%和13.3%。因此通过使用表面活性剂来改变细胞质膜造性,可使产酸量大幅度提高,该途径是筛过高产菌株的良好方法.    

8.  枯草芽孢杆菌C1-B941的D-核糖发酵中间试验  被引次数:1
   孙文敬  谢红  杨庆文  高润香  赵峰梅  蒋明珠  付春生  程建戎  郭金权  杨林娥《工业微生物》,1999年第29卷第4期
   使用转酮醇酶变异株—枯草芽孢杆菌C1-B941进行了D-核糖发酵中间试验。3000L发酵罐试验结果表明,发酵培养基中的葡萄糖浓度为18%时,发酵周期约为64h,发酵转化率达36.84%。发酵液经离子交换树脂纯化后,可以直接用于生产VBZ合成的中间体—N-D-核糖醇基-3,4-二甲苯胶。    

9.  赖氨酸高产菌株选育的基础研究  
   戴勤娟《生物技术世界》,2013年第8期
   以本实验室提供的谷氨酸棒状杆菌为出发菌株,经紫外线或硫酸二乙酯(DES)诱变处理,共检出营养缺陷型12株,并进行鉴定,从中筛选出赖氨酸的高产菌株,且对其进行发酵产酸试验。本文研究旨在选育赖氨酸的高产菌株,并研究适宜的发酵工艺,以提高产酸率,降低生产成本。    

10.  均匀设计在L-异亮氨酸发酵中的应用  被引次数:1
   刘党生 王鹏 李福德 李建梅《生物工程学报》,1991年第7卷第3期
   本试验用均匀设计方法考查了9种培养基组成对L-异亮氨酸产生菌钝齿棒状杆菌(Cory-nebacterium crenatum)All发酵的影响,获得优化配比为;葡萄糖12%,硫酸铵2%,磷酸二氢钾0.1%,磷酸氢二钾O.45%,硫酸镁O.055%,生物索1μg,硫胺素15μg,硫酸亚铁2ppm,硫酸锰2ppm,碳酸钙4%,pH7.0~7.2。在此条件下,菌株A11可产生L-异亮氨酸15.1mg/m1。与正交设计相比,均句设计具有试验次数少,工作效率高和便于分析因素影响等优点。    

11.  以葡萄糖为底物一步法合成γ-氨基丁酸整合型重组钝齿棒杆菌的构建  
   孙红梅  饶志明  李秀鹏  徐美娟  张显  许正宏《微生物学报》,2013年第53卷第8期
   [目的]为了构建一株直接利用廉价的葡萄糖合成γ-氨基丁酸的重组钝齿棒杆菌,将来自于植物乳杆菌γ-氨基丁酸合成途径的关键酶谷氨酸脱羧酶基因(lpgad)在产谷氨酸菌株钝齿棒杆菌中进行整合表达,实现葡萄糖到GABA的一步法生产.[方法]运用PCR技术扩增得到带有tac启动子的谷氨酸脱羧酶基因tacgad.通过重叠PCR的方法获得钝齿棒杆菌精氨酸合成途径关键酶N-乙酰谷氨酸激酶(NAGK)基因内部缺失型基因△argB.利用自杀载体pK18mobsacB构建同源整合载体pK18-△argB::tacgad,以△argB的上下游序列为同源臂,通过两次同源重组将tacgad基因整合到钝齿棒杆菌基因组,同时将NAGK基因argB灭活,利用蔗糖致死基因sacB反向筛选标记筛选得到谷氨酸脱羧酶的重组钝齿棒杆菌C.crenatum △argB::tacgad.重组钝齿棒杆菌以葡萄糖为底物进行发酵,测定GABA含量.[结果]重组菌C.crenatum △argB::tacgad成功表达谷氨酸脱羧酶,同时阻断了精氨酸合成途径对谷氨酸到GABA代谢途径的竞争,粗酶液基本检测不到NAGK活性,发酵液无精氨酸合成.通过96 h发酵,重组菌可积累约8.28 g/L的GABA.[结论]本研究通过将谷氨酸脱羧酶基因定向整合到钝齿棒杆菌精氨酸合成途径的关键酶基因argB内部,成功表达谷氨酸脱羧酶的同时阻断竞争途径精氨酸的合成.本研究为实现直接利用葡萄糖合成GABA的一步法生产奠定了基础.    

12.  紫外诱变原生质体选育赖氨酸高产菌株  被引次数:16
   王弘 齐秀兰 李福德《生物工程学报》,1990年第6卷第1期
   以钝齿棒杆菌102S2-58为出发菌株,在原生质体形成及再生的最佳条件下制备原生质体,并对原生质体进行紫外诱变处理,对大量的再生突变株进行发酵筛选.获得了高产稳定株102-100号,其发酵液经氨基酸自动分析仪测定L-赖氨酸积累量由出发菌株的5O.Omg/ml提高到80.8mg/ml,糖转化率达到63.88%.发酵液中主要副产酸——纈氨酸和蛋氨酸的量明显降低。    

13.  抗真菌多肽捷安肽素发酵中试研究  
   赖娅娜  雷宝良  李志东  钟娟  周金燕  杨杰  谭红《天然产物研究与开发》,2004年第16卷第5期
   对筛选出的一株芽孢杆菌ZK在1000L发酵罐中进行了代谢产物抗真菌多肽捷安肽素的放大中间试验。研究菌体的生长、还原糖的利用及产素的变化规律,为进行捷安肽素的工业化生产提供了依据。    

14.  一株AEC^hrL—赖氨酸产生菌  
   刘复军《生物技术》,1993年第3卷第5期
   从乳糖发酵短杆菌Brevibacterium Lactofermentum2645菌株出发选育L-赖氨酸产生菌,经分离复壮后,用硫酸二乙酯(DES)诱变处理,由添加S-(2-氨基乙基)—L—半胱氨酸(AEC)和L-苏氨酸的药物平板定向筛选,最后获得了一株L—赖氨酸高产菌E_(16-2)(AHV~(hr)SAM~gAEC~(hr))。进而通过正交试验、工艺条件试验最终获得了该菌株的最佳发酵条件,并考查了在此条件下的L-赖氨酸发酵过程,结果表明该菌具有生长、耗糖、产酸速度快、发酵周期短的明显特点。    

15.  钝齿棒杆菌的代谢改造:L-鸟氨酸与L-瓜氨酸合成菌株的构建  
   赵芹芹  罗玉常  窦文芳  张晓梅  耿燕  许正宏《微生物学通报》,2014年第41卷第10期
   【目的】对一株产L-精氨酸的钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum) SYPA5-5进行代谢工程改造,构建L-鸟氨酸和L-瓜氨酸合成菌株,并考察其发酵生产相应氨基酸的性能。【方法】分别敲除菌株SYPA5-5鸟氨酸氨甲酰转移酶(Ornithine carbamoyltransferase,OTC)的编码基因argF和精胺琥珀酸合成酶(Argininosuccinate synthase,ASS)的编码基因argG,构建能够合成L-鸟氨酸及L-瓜氨酸的重组菌株SYPA5-5△argF和SYPA5-5△argG;考察不同营养条件对上述重组菌株生长和相应氨基酸积累的影响。【结果】添加0.3 g/L L-精氨酸可满足SYPA5-5△argF的生长及L-鸟氨酸积累所需,L-鸟氨酸产量可达21.5 g/L;添加L-精氨酸有利于SYPA5-5△argG的生长,但不利于L-瓜氨酸的积累;不添加L-精氨酸时,L-瓜氨酸产量可达15.2 g/L,同时积累6.8 g/L的L-谷氨酸。【结论】分别敲除L-精氨酸生产菌株SYPA5-5的argF及argG基因,可实现L-精氨酸合成途径的中间代谢物L-瓜氨酸和L-鸟氨酸的积累,拓展了该菌株的工业应用范围。    

16.  限制修饰系统cglI赋予钝齿棒杆菌抗噬菌体功能活性  
   胡永飞  李铁民  杨智勇  张博  李玉《微生物学报》,2008年第24卷第5期
   为解决氨基酸发酵工业中的噬菌体污染问题, 对cglI基因复合体在钝齿棒杆菌中的功能活性表达进行研究。通过PCR从谷氨酸棒杆菌基因组扩增cglI基因复合体, 构建重组质粒pJL23-cglI, 转化钝齿棒杆菌T6-13后得到重组菌株。定性和定量检测重组菌株的噬菌体抗性。实验结果表明, 携带cglI基因复合体的重组钝齿棒杆菌显示了明显的抗噬菌体功能活性和较广的抗噬菌体谱, 进而证实了cglI基因复合体用于构建钝齿棒杆菌抗噬菌体菌株的可行性, 为解决氨基酸发酵生产中的噬菌体污染问题提供了一种有效方法。    

17.  限制修饰系统cglI赋予钝齿棒杆菌抗噬菌体功能活性  
   胡永飞  李铁民  杨智勇  张博  李玉《生物工程学报》,2008年第24卷第5期
   为解决氨基酸发酵工业中的噬菌体污染问题, 对cglI基因复合体在钝齿棒杆菌中的功能活性表达进行研究。通过PCR从谷氨酸棒杆菌基因组扩增cglI基因复合体, 构建重组质粒pJL23-cglI, 转化钝齿棒杆菌T6-13后得到重组菌株。定性和定量检测重组菌株的噬菌体抗性。实验结果表明, 携带cglI基因复合体的重组钝齿棒杆菌显示了明显的抗噬菌体功能活性和较广的抗噬菌体谱, 进而证实了cglI基因复合体用于构建钝齿棒杆菌抗噬菌体菌株的可行性, 为解决氨基酸发酵生产中的噬菌体污染问题提供了一种有效方法。    

18.  钝齿棒杆菌精氨酸琥珀酸酶编码基因argH的克隆表达及其重组菌发酵产精氨酸研究  被引次数:2
   饶志明  徐美娟  陆元修  周晨  蓝春燕  窦文芳  张晓梅  许泓瑜  许正宏《中国生物工程杂志》,2010年第30卷第9期
   钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)SYPA是本实验室筛选获得的一株高产精氨酸生产菌株。精氨酸琥珀酸酶(AL)是精氨酸合成过程中的最后一个酶,催化底物精氨酸琥珀酸生成产物精氨酸。为进一步提高精氨酸产量,本文以钝齿棒杆菌基因组为模板,扩增得到其编码基因argH,全长为1434 bp,编码476个氨基酸,理论蛋白分子量大小为50.8 kDa,其与C. glutamicum ATCC 13032比对其同源性为99.4%,相差10 bp,3个氨基酸。将其在E.coli BL21(DE3)及C. crenatum SYPA中成功表达。利用载体pET-28a上的6×His?Tag选用Ni柱亲和层析纯化AL,纯化后获得的重组蛋白的比酶活达156.9mU/mg蛋白,总回收率为72.3%,对该酶的部分酶学性质进行了初步研究,并发现产物精氨酸对其具有反馈抑制作用。成功构建钝齿棒杆菌重组穿梭表达质粒pJC1-tac-argH并将其通过电击转化法转入C.crenatum SYPA中,加强其代谢途径中AL蛋白表达量,并对其发酵产精氨酸做了初步分析。结果表明与出发菌株相比,转化子在精氨酸琥珀酸酶酶活增强了66.8%的基础上精氨酸产量达40.9 g/L,比出发菌株产量的35.8 g/L提高了约14.2%。    

19.  北京棒状杆菌AS1.563发酵生产L-赖氨酸研究的扩大试验  
   《微生物学通报》,1980年第7卷第1期
   L-赖氨酸是一种人体必需的氨基酸,国外已应用于食品、饲料、医药等方面。本文主要介绍AS 1.563菌发酵生产L-赖氨酸研究的扩大试验结果。    

20.  L—盐酸赖氨酸的试制——第一报:生产工艺和配方的探选  
   邹荫甲《氨基酸和生物资源》,1984年第1期
   <正> 我们利用甜菜制糖的废母液为原料,以北京棒状杆菌的变株As 1563为菌种,改革了配方,减去了不利提纯的碳酸钙,并采用了廉价原料代替生物素,用发酵法制成了赖氨酸,经提取精制获得了质量合乎食用要求的L—盐酸赖氨酸。    

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