转hDAF基因小鼠的构建(英文)

本工作构建了含有ｈＤＡＦ基因的转基因小鼠,以便研究ｈＤＡＦ基因能否消除异种器官移植中的排斥反应。 采用ＤＮＡ重组的方法构建ｈＤＡＦ基因的表达载体ｐＳＰ６４ＨＰ（Ｆｉｇ．１）。通过受精卵显微注射,将其中的目的基因片段,转移到小鼠体内,建立转基因小鼠。再通过Ｄｏｔ ｂｌｏｔｔｉｎｇ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ杂交方法对出生小鼠的基因组特征进行查证。 连续两次对直接裂解菌液做ＰＣＲ扩增,筛选出重组质粒（Ｆｉｇ．２＆３）,酶切图谱（Ｆｉｇ．４）和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交（Ｆｉｇ．５）分析结果与预期吻合,出现预期条带;小鼠受精卵注射后存活比率为７７．９％,受精卵的发育率为３．４％,出生小鼠中,１０．５％出现清晰杂交信号。 表明：ｈＤＡＦ基因表达载体构建成功;并整合入小鼠基因组中。     

乌头总生物碱贴片抗炎镇痛药效学研究

本文采用蛋清所致大鼠足跖肿胀和小鼠二甲苯所致耳廓肿胀模型研究乌头总生物碱贴片的抗炎作用及化学刺激法和热板法研究乌头总生物碱贴片对小鼠的镇痛作用进行实验.镇痛抗炎实验表明,乌头总生物碱贴片能提高小鼠热板法所致疼痛的痛阈值并减少醋酸所致小鼠扭体反应次数;对二甲苯所致小鼠耳肿胀有明显的抑制作用,能明显减轻蛋清所致的大鼠足跖肿胀.结果表明乌头总生物碱贴片具有明显的抗炎及镇痛作用.     

细胞松弛素B促微丝解聚对DNA合成的作用

利用微丝（ＭＦ）解聚药物细胞松弛素Ｂ（ＣＢ）处理Ｇ０期小鼠Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２成纤维细胞,对Ｇ０至Ｓ期ＤＮＡ合成,胸腺嘧啶核苷激酶（ＴＫ）活性、ＴＫ基因表达、钙调素（ＣａＭ）水平和一些细胞周期早期基因的表达进行了观察。Ｇ０期细胞经３ｍｇ／ＬＣＢ处理２ｈ,促ＭＦ解聚增强了血清对Ｓ期细胞ＴＫ活性、ＴＫ基因表达和ＤＮＡ合成的刺激作用,并促进细胞提前进入Ｓ期。血清刺激Ｇ０期细胞进入晚Ｇ１期和Ｓ期时,ＣａＭ     

人生长激素基因逆转录病毒载体的构建及其对3T3和ES细胞的转化与表达

为了研究生长激素基因在异源细胞中的表达,构建了携带人生长激素基因（ｈＧＨ）的逆转录病毒载体ｐＩＮＳ－ＧＨ,并将其导入小鼠成纤维细胞３Ｔ３和小鼠胚胎干细胞（ＥＳ细胞）ＣＣＥ中。ｐＩＮＳ－ＧＨ转化３Ｔ３细胞,获得了高效表达的克隆,即用放射免疫法检测到克隆培养基中有大量的人生长激素蛋白富积,如ＧＨＳＮＣ２０,富积率高达３７８４ｎｇ／ｍｌ,而且外源基因的整合很稳定。不同的３Ｔ３转化克隆的表达率有显著的差异,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交的结果表明,这种差异与外源基因整合的拷贝数无关。ｐＩＮＳ－ＧＨ转化ＣＣＥ细胞没有获得明显表达的克隆,而且外源基因的整合也不稳定。转化的ＥＳ细胞克隆总ＤＮＡ的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明,ｈＧＨ基因的确整合到细胞基因组中。目前尚未发现明显的外源ＤＮＡ重排的迹象。     

人粒细胞集落刺激因子（hG－CSF）cDNA3′－UTR对其表达的影响

利用人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ３′端非翻译区（３′－ＵＴＲ）中存在的ＤｒａⅠ酶切位点,通过部分酶切与完全酶切,删除３′－ＵＴＲ不同长度,构建了四种ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ瞬时重组表达质粒。转染ＣＯＳ－７细胞后,生物活性测定结果提示,ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ３′－ＵＴＲ对其表达起负调控作用,其关键性序列位于紧接终止密码子ＴＧＡ下游的６５ｂｐ范围内,３′－ＵＴＲ对ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ表达的影响与转录水平的差别有一定关系。     

失血性休克后IL—1活性变化及其与肠源性内毒素血症的关系

目的：观察失血性休克后血浆ＩＬ－１活性的变化及其与肠源性内毒素血症的关系。方法：复制容量控制失血性休克及肠源性内毒素血症模型,改良ＬＡＦ法及显色基质偶氮法检测ＩＬ－１及ＥＴ。结果：普通ＳＤ大鼠３０％失血后２～３ｈ及６～１０ｈ血浆ＩＬ－１活性升高,３ｈ后ＥＴ水平显著升高;失血前胃内灌注双岐杆菌或失血后静注ｒＢＰＩ,大鼠血浆ＥＴ水平无明显升高,ＩＬ－１活性第１峰仍然存在,但第２峰消失。无菌ＳＤ大鼠１０％失血、灌注ＬＰＳ后１ｈ血浆ＥＴ水平升高,２ｈ后ＩＬ－１活性升高。结论：失血性休克后ＩＬ－１活性呈双峰型升高,第１峰与内毒素无关,第２峰为内毒素刺激峰,内毒素主要来源于肠道     

三株散发性戊型肝炎病毒变异株的部分序列比较

对三株散发性戊型肝炎病毒Ｃｈ－Ｔ１１、Ｃｈ－Ｔ２１、Ｃｈ－Ｆ４０的部分基因组做克隆测序,经比较发现与其它国内外ＨＥＶ株ＯＲＦ２部分相应核苷酸序列同源性在７８．３－８１．３,Ｃｈ－Ｔ２１与Ｃｈ－Ｔ４０的核苷酸同源性９８．８％,而Ｃｈ－Ｔ１１与前两者的同源性则分别为８９．８％和９０．２％。Ｃｈ－Ｔ１１、Ｃｈ－Ｔ２１、Ｃｈ－Ｔ４０与其它ＨＥＶ株相应氨基酸序列同源性在９５．８－９７．９％,它们之间的氨基酸     

人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的人血管壁细胞生长的作用

通过培养的人主动脉平滑肌细胞（ｈＡＳＭＣ）及脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＥＣ）,应用３Ｈ－ＴｄＲ参入、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析、逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、放射免疫分析（ＲＩＡ）、和紫外比色法等技术观察了人主动脉中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对ｈＡＳＭＣ和ｈＵＶＥＣＤＮＡ合成的作用及对血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）、ＰＤＧＦ受体、转化生长因子β（ＴＧＦ－β）、内皮素－１（ＥＴ－１）或碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达和肾素－血管紧张系统（ＲＡＳ）的影响,结果显示,ＨＳＰＧ明显抑制培养的ｈＡＳＭＣ基础的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：１０３８５±３２６３ｖｓ,２５５４１±６４２１,Ｐ＜０．０１）及外源性ＰＤＧＦ诱导的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：９８７８±１９４７ｖｓ．１３４８１±４４ｌ０,Ｐ＜０．０５）;抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－Ｂｐ和ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,提高ＰＤＧＦａ和β受体ｍＲＮＡ的表达;显著降低ｈＡＳＭＣ培养液中血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的浓度和血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）的活性,推测ＨＳＰＧ抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－β及ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,降低ＡＣＥ活性及ＡｎｇⅡ浓度是其抑制ｈＡＳＭＣ增殖的重要机     

人粒细胞集落刺激因子（hG—CSF）cDNA3‘—UTR对其表达的影响

利用人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ（）ｃＤＮＡ３＇端非翻译区（３＇ＵＴＲ）中存在的ＤｒａＩ酶切位点,通过部分酶切与完全酶切,删除３＇－ＵＴＲ不同长度构建了四种ｈＧ－ＣＳＦ ｃＤＮＡ瞬时重组表达质粒,转染ＣＯＳ－７细胞手,生物活性测定结果提示,ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ３＇－ＵＴＲ对其表达起负调控作用,其关键性序列位于紧接终止密码子ＴＧＡ下游的６５ｂｐ范围内,３＇－ＵＴＲ对ｈＧ－ＣＳＦ ｃＤＮＡ表达的     

复方庵摩勒颗粒剂镇痛抗炎作用的实验研究

目的观察复方庵摩勒颗粒剂镇痛抗炎作用,以促进临床应用。方法分别采用热板法、扭体法考察该药对小鼠镇痛作用,采用小鼠耳廓肿胀、小鼠足肿胀法考察该药对小鼠抗炎作用。结果比较空白组,热板和扭体实验中提取物组的镇痛作用明显,小鼠耳肿胀及足肿胀实验中提取物组抗炎作用明显,差异均有统计学意义(均P0.05);比较阳性组,提取物组的镇痛和抗炎作用无明显差异性(P0.05)。结论复方庵摩勒颗粒剂对实验小鼠具有明显的镇痛抗炎作用,为临床应用提供重要参考。     

不同海滨港湾环境条件下互花米草总黄酮积累动态研究

对两个不同海滨地区的互花米草体内的总黄酮（ Ｔｏｔａｌ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｏｆ Ｓｐａｒｔｉｎａ ａｌｔｅｒｎｉｆｌｏｒａ, Ｔ Ｆ Ｓ）的含量及其随时间和相关环境因子变化进行研究。初步研究结果显示,互花米草 Ｔ Ｆ Ｓ的积累与土壤含盐量呈强正相关关系,与土壤含氮量、土壤有机质呈正相关关系。 Ｔ Ｆ Ｓ的积累是互花米草在高盐度条件下的一种抗逆反应。     

Esc‐1GN shows therapeutic potentials for acne vulgaris and inflammatory pain

The inflammatory response plays important roles in acne vulgaris and pain pathogenesis. In previous study, Esc‐1GN with anti‐inflammatory, antimicrobial, and lipopolysacchride (LPS) binding activity was identified from the skin of the frog Hylarana guentheri. Here, we report its therapeutic potentials for acne vulgaris and inflammatory pain. Esc‐1GN destroyed the cell membrane of Propionibacteria acnes in the membrane permeability assays. In addition, bacterial agglutination test suggested that Esc‐1GN triggered the agglutination of P. acnes, which was affected by LPS and Ca²⁺. Meanwhile, in vivo anti‐P. acnes and anti‐inflammatory effects of Esc‐1GN were confirmed by reducing the counts of P. acnes in mice ear, relieving P. acnes‐induced mice ear swelling, decreasing mRNA expression and the production of pro‐inflammatory cytokines, and attenuating the infiltration of inflammatory cells. Moreover, Esc‐1GN also displayed antinociceptive effect in mice induced by acetic acid and formalin. Therefore, Esc‐1GN is a promising candidate drug for treatment of acne vulgaris and inflammatory pain.     

土壤水分条件对克隆植物互花米草表型可塑性的影响

在互花米草草滩挖掘沙蚕是海岸带常见的行为,会造成土壤结构松散,蓄水能力下降,局部土壤水分含量低.能否利用这些条件,降低互花米草种群的入侵性,并进而对互花米草的控制提供对策是一个重要的生态学命题.为此,实验模拟3种不同土壤蓄水条件,并测定互花米草在该条件下的形态与存活指标、克隆特征参数及生物量积累与分配格局.结果表明:土壤水分条件对互花米草的叶长和根状茎生物量均没有显著影响(p> 0.05);而其株高、分枝强度、克隆存活数、克隆存活率及地上生物量在各土壤水分条件间差异显著(p< 0.05);在低水分条件下,互花米草的芽数、基茎粗、地上生物量比和叶生物量比均显著低于其他两组处理(p< 0.05),地下生物量比则显著高于其他两组处理(p< 0.05);在中等水分条件下,互花米草的根状茎长、根状茎节数、地下生物量和茎生物量比与其他两组处理差异不显著(p> 0.05),而在其他两组处理间差异显著(p< 0.05);在高水分条件下,总生物量、茎生物量和根生物量显著高于其他两组处理(p< 0.05),根状茎生物量比则显著低于其他两组处理(p< 0.05),而这些指标在其他两组处理间均差异不显著(p> 0.05).由此推断,土壤水分条件适中有利于互花米草的生长扩张以占领有利的资源环境,而土壤水分条件低则抑制互花米草的生长繁殖,影响其种群延续.     

盐度变化条件下芦苇对互花米草的化感效应

以芦苇凋落物为试材,采用溶液浸提法和厌氧腐解法,获得水提物和腐解产物两种浸提物母液;在5‰和10‰盐浓度下以两种浸提物母液和25%母液分别处理互花米草种子、刚萌发的幼苗以及互花米草滩涂中特有的互花米草益生菌,考察盐度变化对互花米草种子的萌发、幼苗生长以及菌落生长的影响.结果表明：盐处理能够显著促进互花米草种子的萌发、幼根以及互花米草益生菌的生长(P＜0.05).较高的盐浓度(10‰)下,芦苇水提物对互花米草的萌发、生长和互花米草益生菌的生长呈促进作用;当盐浓度降低至5‰时,该促进作用消失.在较低的盐浓度(5‰)下,芦苇腐解产物对互花米草萌发产生显著的抑制作用;在较高盐浓度(10‰)时,则对互花米草益生菌产生显著促进作用(P＜0.05);在试验的任一盐浓度下,芦苇腐解产物对互花米草幼苗和幼根的生长均存在显著的抑制效果(P＜0.05).     

Extract and compounds obtained from Mandevilla velutina inhibit arachidonic acid-induced ear oedema in mice, but not rat stomach contraction

This study was designed to analyse the effect of crude extract (CE) and some pure compounds isolated from M. velutina on arachidonic acid (AA)-induced ear oedema in mice. The effect of these compounds on contractions in the rat stomach induced by AA and prostaglandin E2 (PGE2) was also investigated. The CE given orally to mice (50-400 mg/kg) 1h before inhibited the ear oedema in a dose-dependent manner, with a maximal inhibition (MI) of 56%. Given topically, compound MV8612 (200-600 mg/ear) isolated from this plant inhibited the oedema in a concentration-dependent manner with a MI of 66%, while compounds MV8608 and MV8610 (100-600 mg/ear) caused less inhibition, MI 29% and 39% respectively. Compound MV8612, given i.p. (3-30 mg/kg) 30 min before, also caused a dose-dependent inhibition of AA-induced ear oedema (MI of 60.5% compared with 28% and 49% for MV8608 and MV8610). Indomethacin (0.25-1.0 mg/ear) applied topically had no effect, but orally (1-10 mg/kg) gave MI of 66%. Phenidone given orally (10-100 mg/kg) gave a MI of 30% but it was very potent topically (0.5-2 mg/ear) (MI 66%). Nordihydroguaiaretic acid applied either topically (0.5-2.0 mg/ear) or orally (10-100 mg/kg) caused MI of 63% and 47%, respectively. BW 755C, orally (10-100 mg/kg), inhibited the AA-induced oedema in a dose-dependent manner (MI 48%), but was less effective when applied topically (0.25-1 mg/ear) (MI 32%). In the rat stomach preparation, compounds MV8608 and MV8612 (0.1-20 micrograms/ml) had no significant effect on contractions to AA or PGE2, while indomethacin (0.01-3 micrograms/ml) potently inhibited AA contraction, but had no effect on the PGE2 response. These results indicate that MV8608 and MV8612 exhibit both a topical and a systemic anti-inflammatory profile, presumably by a mechanism not related to inhibition of cyclooxygenase.     

Enumeration and Localization of N(2)-Fixing Bacteria Associated with Roots of Spartina alterniflora Loisel

Numbers and possible locations of N(2)-fixing bacteria were investigated in roots of Spartina alterniflora Loisel, which support nitrogenase activity in the undisturbed native habitat. N(2)-fixing bacteria were recovered in cultures both from S. alterniflora roots and from the surrounding sediment, and they formed a greater proportion of the bacteria recovered from root homogenates than from salt-marsh sediment. N(2)-fixing bacteria were recovered in high numbers from the rhizoplane of S. alterniflora after roots were treated with 1 or 5% chloramine-T for 1 h or with 1% NaOCl for 1 or 2 h. Immersing S. alterniflora roots in 5% NaOCl for 1 h was more effective in distinguishing bacteria inside the roots since this treatment nearly eliminated N(2)-fixing bacteria recoverable from the rhizoplane, although high numbers of N(2)-fixing bacteria were recovered from homogenates of roots treated with 5% NaOCl for 1 h. However, this treatment was less effective with roots of Zea mays L. (Funks G4646) and Sorghum bicolor (L.) Moench (CK-60 A), indicating that techniques to surface sterilize roots should be evaluated for different plants. Bacteria were observed by light and electron microscopy inter- and intracellularly in the cortex and in the aerenchyma of S. alterniflora roots. This study clearly shows that bacteria, including N(2) fixers, colonize the interior of roots of S. alterniflora growing in a Chesapeake Bay, Maryland, salt marsh.     

互花米草与海三棱藨草的生长特征和相对竞争能力

外来物种互花米草(Spartinaalterniflora)已对我国特有种海三棱藨草 (Scirpusmariqueter)发生了竞争取代。作者通过在长江口崇明东滩湿地取样和盆栽竞争实验,比较了二者的主要生长特征和种间相对竞争能力。结果表明:无论是先锋种群还是成熟种群,互花米草的高度、盖度、地上生物量、地下生物量和平均每花序种子数都显著大于海三棱藨草;海三棱藨草的密度和单位面积结实枝条数显著大于互花米草。两种植物成熟种群的单位面积种子产量和种子的萌发率没有显著差异。种内竞争和种间竞争显著降低了两种植物的平均每株产生的无性小株数、结实株数、地上生物量和地下球茎数(海三棱藨草产生球茎),互花米草的种间竞争能力 (相对邻里效应指数 )显著大于海三棱藨草。互花米草在生长上的优势可能导致其在种间竞争上的优势,从而使互花米草能够在海三棱藨草群落中成功入侵。     

互花米草NAC转录因子家族的鉴定与表达分析

互花米草(Spartina alterniflora)作为一种海岸带盐生植物,高度耐盐胁迫,但因为缺少参考基因组,其耐盐的分子机制却尚未见报道。NAC家族蛋白是植物特有的转录因子,调控植物的生长发育和胁迫应答。为了鉴定互花米草NAC蛋白(SaNAC)并探究它们与互花米草生长发育及胁迫响应之间的关系,本研究以互花米草三代全长转录组数据为参考,通过与水稻(Oryza sativa)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)和玉米(Zea mays)NAC蛋白序列进行比对,并结合保守功能域进一步筛选,最终找到62个SaNAC蛋白。从蛋白序列比对、进化、motif预测、同源性比较、亚细胞定位、组织表达以及非生物胁迫下的基因差异表达等方面分别对互花米草NAC家族成员进行分析,结果发现SaNAC蛋白均含有保守的NAM结构域,且在进化上与水稻NAC家族具有一定的相似性;SaNAC家族中的两个蛋白SaNAC9和SaNAC49在细胞核表达;另外,本研究还发现互花米草SaNAC基因表达具有高度组织和胁迫应答差异性。这些结果表明互花米草NAC转录因子家族不仅具有保守的功能域,而且在调控互花米草的生长发育和非生物胁迫响应过程中具有重要的作用。     

互花米草黄酮含量分析及其生态学意义

互花米草原产于北美洲大西洋沿岸和墨西哥海湾,经引种和其他原因,已扩散到包括中国在内的多个国家和地区,并对被入侵地生态系统的结构和功能均造成了显著影响。有关该物种的入侵机制和控制策略是当前入侵生态学研究领域的热点。互花米草生物质材料中富含黄酮类物质,与该物种向海扩张的能力可能存在一定联系。鉴于黄酮广泛的应用价值,能否借助黄酮成分的开发带动生物质的收割,以达到有效控制该物种的目的,也是当前研究者所关注的问题。以芦丁为标准参照物,NaNO2-Al（ NO3）3法比较温室互花米草不同器官中总黄酮含量的差异,分析盐城滩涂互花米草越冬芽黄酮含量与所在地理位置之间的关系,采用L9（34）正交试验对干储互花米草叶总黄酮的提取工艺进行优化。互花米草叶片中黄酮类物质远高于根、根状茎、茎、叶鞘、颖稃及种子。盐城滩涂上互花米草越冬芽的黄酮含量随着由陆向海方向基本呈升高趋势。互花米草总黄酮最佳提取工艺为料液比1∶30,乙醇浓度70％,水浴温度80℃,水浴时间2h。互花米草植物材料中,尤其在叶部,黄酮含量十分丰富。该黄酮物质与互花米草在海岸带盐沼生态系统中的适应和向海扩张也存在正相关关系,可作为探索互花米草入侵机制的一个方向。利用本研究中所得优化提取工艺可从互花米草干储生物质中获得稳定的黄酮来源。配合黄酮经济成分的开发而推动生物质材料的收割利用,将成为互花米草生态控制的一项潜在策略。