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相似文献
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1.
研究在BEP2D细胞中,作为Smads蛋白家族的抑制分子,Smad7对胞外信号调节的蛋白激酶(ERK1/2或p44/42)磷酸化水平的调控。将Smad7真核表达载体或人工合成的Smad7-siRNA转染BEP2D细胞,TGF—β刺激,通过Western印迹检测Smad7对p44/42蛋白磷酸化的影响。结果在永生化BEP2D细胞中,TGF-β1刺激后5min开始,可以检测到磷酸化的p44/42;到60min达到高峰,之后逐渐降低。细胞转染Smad7,TGF-β作用60rain后,p44/42磷酸化水平明显增高;而转染Smad7-SiRNA,TGF-β作用60min后,p44/42磷酸化水平显降低。p44/42蛋白水平基本上不受TGF—β1刺激及Smad7表达水平的影响。以上结果说明,在BEP2D细胞中,Smad7可参与TGF—β对ERK/MAPK通路的活化作用。  相似文献   

2.
RNA干扰对Smad7基因的抑制作用   总被引:1,自引:1,他引:0  
小分子干扰RNA(siRNAs)可以高效、特异地阻断体内同源基因的表达,促进同源mRNA降解,称为RNA干扰(RNAi)。本研究旨在探讨Smad7基因的siRNAs是否能抑制基因的表达。利用RNA干扰技术,设计并合成了针对Smad7基因的siRNAs,用脂质体转染法瞬时转染BEP2D和BERP35T2细胞,用Northern blot法检测RNAi效应;同时设计并合成了绿色荧光蛋白(GFP)的siRNAs,瞬时转染稳定表达绿色荧光蛋白的BERP35T2细胞,检测荧光强度有无改变。结果表明RNA干扰技术能明显抑制Smad7基因的表达,并能显减弱绿色荧光的表达强度,为进一步研究Smad7基因功能及TGF-β信号转导通路奠定了基础。  相似文献   

3.
Smad7基因的克隆、表达及对c-myc基因的调控   总被引:1,自引:0,他引:1  
Smad7是TGr-β家族信号转导通路的抑制分子,可反馈调节TGF-β/Smads信号转导通路,从功能推测,Smad7表达紊乱,可影响细胞对TGF-β的应答,从而促进细胞的恶性化进展,为了深入探讨Smad7基因功能,通过设计引物,用Touchdown巢式.PCR法从人胎脑文库中扩增Smad7基因编码区全长,回收产物,克隆并构建真核表达载体,同融合有报告基因的c-myc顺式增强子元件共转染BEP2D细胞,结果表明:TGF—p可抑制c.myc报告基因的活性,Smad7基因可正调控c.myc报告基因的表达,并拮抗TGF.B对该基因的抑制作用.由此得出结论:Smad7基因通过桔抗TGF.B来调控c.myc基因、  相似文献   

4.
为了探讨在人永生化支气管上皮细胞BEP2D细胞中,Smad4分子对 ERK/MAPK通路的作用,我们用RNA干扰的方法分别设计了两对Smad4 siRNA,并使BEP2D细胞中Smad4靶向沉默,用Western印迹分析了细胞内ERK激酶和MEK激酶磷酸化水平的变化.结果发现,当Smad4表达沉默后,ERK激酶磷酸化水平未变,MEK激酶磷酸化水平有所降低;再加TGF-β1诱导后ERK激酶和MEK激酶磷酸化水平均显著降低至基础水平以下.结果表明在BEP2D细胞中,Smad4的缺失抑制TGF-β1对ERK/MAPK通路的活化,故提出TGF β活化ERK/MAPK通路需要Smad4存在的假设.  相似文献   

5.
目的:探讨人永生化BEP2D细胞中TGF-β活化ERK/MAPK通路的机制。方法:用RNA干扰的方法设计siRNAs使人永生化BEP2D细胞中TβRⅡ、Smad7基因沉默,用Westernblot分析TGF-β1诱导的ERK激酶磷酸化的变化。结果:当Smad7表达沉默后,TGF-β1诱导的ERK激酶磷酸化水平显著降低;当TβRⅡ和Smad7表达同时发生沉默后,细胞内TGF-β1诱导的ERK激酶磷酸化水平进一步降低到基础水平以下。结论:TGF-β1以受体和Smad7依赖的方式活化ERK/MAPK通路。  相似文献   

6.
目的:通过观察在肾小球硬化动物模型中TGF-β、Smad2和Smad7蛋白和mRNA表达的意义,了解TGF-β/Smads信号通路在肾小球硬化中的作用.方法:制备肾小球硬化动物模型,检测24小时尿蛋白定量、血浆白蛋白及血尿素氮水平,观察肾组织形态学改变;免疫组织化学检测TGF-β1、Smad2和Smad7蛋白水平;荧光定量PCR检测TGF-β1、Smad2和Smad7 mRNA的水平结果:TGFβ1、Smad2和Smad7正常情况下普遍在肾小球系膜细胞、肾小管上皮及间质细胞中有少量表达;模型组4周时TGFβ1和Smad2蛋白表达增加,Smad7蛋白表达下降;6~8周时TGF-β1和Smad2蛋白表达明显增加,Smad7蛋白表达明显下降.模型组4周时TGF-β1和Smad2 mRNA出现表达上调,6~8周TGF-β1和Smad2 mRNA表达明显增加.4周时Smad7 mRNA表达下调,6~8周Smad7 mRNA表达明显下降.模型组与对照组比较有显著性差异(p<0.01).结论:TGF-β/Smad信号通路参与了肾小球硬化的纤维化进程,Smad7是TGF-β/Smad信号通路抑制性调控因子,可能为治疗肾小球硬化提供治疗手段.  相似文献   

7.
Smad7基因在细胞恶性转化过程中的促增殖作用   总被引:7,自引:0,他引:7  
用基因转染的方法,建立稳定表达Smad7基因的永生化及恶性化人支气管上皮细胞系,用MIT法检测Smad7基因过表达对细胞生长、增殖的影响及对RFD-β1介导的生长抑制效应的影响。结果表明在永生化和恶性化人支气管上皮细胞系BEP2D和BERP2D和BERP35T2中各筛选到2个稳定表达SMAD7蛋白的克隆,命名为BS7-1、BS7-2(来源于BEP20),RS7-1、RS7-2(来源于BERP35T2)。这些细胞系细胞的生长、增殖能力均强于转染空载体的对照细胞系,同时TG-β1对这些细胞系的生长抑制能力明显减弱。提示Smad7基因通过降低细胞对形TGF-β的应答来促进细胞的生长、增殖能力。  相似文献   

8.
卵巢癌中TGF-β/Smads信号通路的功能研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
为探讨卵巢癌细胞中TGF-β的信号传导情况及TGF-β/Smads信号通路各组分在卵巢癌发生中的作用,采用MTT和活细胞计数方法研究了TGF-β1对卵巢癌细胞系HO-8910、HO-8910PM及SKOV3的生长抑制作用;并应用RT-PCR、荧光免疫组化等方法研究了TGF-β/Smads传导通路中各组分的表达和定位以及TGF-β1刺激前后Smad7和P-Smad2定位及表达的变化。结果显示,TGF-β1对细胞系SKOV3没有生长抑制作用.而SK-OV3细胞表达了TGF-β/Smads信号通路中的所有已知成分。且3种卵巢癌细胞在TGF-β1刺激后Smad7mRNA瞬时表达增加,Smad7蛋白表达亦增加并由胞核转位到胞浆,P-Smad2由胞浆转位到胞核。结果表明TGF-β/Smads信号传导通路在卵巢癌细胞HO-8910、HO-8910PM和SKOV3中是完整的,SKOV3细胞逃逸TGF-β介导的生长抑制作用可能是由于TGF-β/Smads信号通路下游发生异常。  相似文献   

9.
Smad通路是TGF—β信号转导的主要通路。Smad是细胞内信号转导通路中的胞液递质,调节细胞生长、分化。它由配体结合的跨膜受体激活,随机通过细胞质进入细胞核,在细胞核中作为转录因子激活TGF-β靶基因的表达。泛素-蛋白酶体通路(ubiquitin proteasome pathway,UPP)是一种细胞胞质和核内蛋白ATP依赖性的非溶酶体降解机制.具有高度选择性地进行细胞内蛋白质的降解。该文重点介绍Smad通路的泛素-蛋白酶体通路依赖性的蛋白质降解机制。  相似文献   

10.
G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白2(G protein-coupled receptor kinase interacting proteins 2,GIT2)是一种信号支架蛋白,可募集多种信号通路的关键分子,参与肌动蛋白细胞骨架组装、整合素介导的细胞粘附、G蛋白偶联受体的内化及胞内信号传递等生物学过程.采用酵母双杂交实验证明,TGF-β1信号通路的转录因子Smad3是GIT2的相互作用蛋白质,内、外源免疫共沉淀实验均证实,GIT2与Smad3存在蛋白质相互作用.报告基因实验及免疫印迹结果表明,GIT2增加Smad3的转录活性并增强TGF-β1诱导的Smad3的磷酸化.研究还发现,Git2-/-小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)的Smad3磷酸化受到抑制,其骨形成相关靶基因的表达水平也低于Git2+/+小鼠.本研究表明,GIT2通过与Smad3的相互作用调节其转录活性并活化TGF-β1信号通路,可能参与调节骨髓间充质干细胞的分化.  相似文献   

11.
12.
Smad蛋白家族是将TGF-β超家族成员与其受体结合后产生的信号从胞质传至细胞核内的中介分子,在心肌纤维化、心肌细胞肥大、凋亡及心脏发育等过程中发挥重要作用.本文就Smad在心脏中的各种不同效应,以及与Smad相关的转录因子、激酶等作一简要综述.  相似文献   

13.
用酵母双杂交系统研究Smad3和Smad4的相互作用   总被引:3,自引:0,他引:3  
Sm ad3 和 Sm ad4 是将 T G F β的信号从细胞外传递到细胞核内的重要的信号传导蛋白. T G F β与其受体结合后,激活受体的磷酸激酶,使 Sm ad3 发生磷酸化,活化的 Sm ad3 与 Sm ad4 结合,形成异源复合物,进入到核中.然后 Sm ad4 以 D N A 结合蛋白的形式与特定的 D N A 结合,将 T G F β的信号传到核内.激活转录,诱导背中胚层的形成,抑制细胞的分化等.经研究利用酵母双杂交试验,鉴定了 Sm ad3 和 Sm ad4 相互作用的功能区域.构建 Sm ad3 和 Sm ad4 的 C 端、 N 端和中间连接区的突变体,将这些突变体克隆到 p G A D424 和 p G B T9 载体中,并转化到 H F7 C 酵母中.通过 Leu- / Trp- / His- S D 平板上菌落的形成,和 X- gal显色反应鉴定转化到酵母中的两个克隆质粒的相互作用.结果显示 Sm ad4 与 Sm ad3 异源相五作用时,主要是通过 Sm ad4 的中间连接区.在同源作用时, Sm ad3 是通过 C 端,而 Sm ad4 是通过中间连接区进行的.  相似文献   

14.
廖清池  周胜华 《生物磁学》2011,(14):2779-2782
microRNA(miRNA)是一类非编码的小分子单链RNA,主要通过转录后抑制靶基因表达调节各种生物功能。miRNA表达水平在正常发育过程中以及在癌症及心血管疾病等各种疾病中发生变化。目前控制miRNA生物合成的信号途径以及调节机制尚未完全阐明。miRNA基因转录后在大蛋白复合体的介导下经一系列协调加工过程形成成熟的miRNA。近来发现转化生长因子β(TGFβ)信号途径的转导因子Smad蛋白在细胞核内调节miRNA的加工处理过程起重要作用。本文主要综述TGFβ/Smad信号途径在miRNA生物合成中的调节作用。  相似文献   

15.
16.
microRNA(miRNA)是一类非编码的小分子单链RNA,主要通过转录后抑制靶基因表达调节各种生物功能.miRNA表达水平在正常发育过程中以及在癌症及心血管疾病等各种疾病中发生变化.目前控制miRNA生物合成的信号途径以及调节机制尚未完全阐明.miRNA基因转录后在大蛋白复合体的介导下经一系列协调加工过程形成成熟的miRNA.近来发现转化生长因子B(TGFβ)信号途径的转导因子Smad蛋白在细胞核内调节miRNA的加工处理过程起重要作用.本文主要综述TGFB/Smad信号途径在miRNA生物合成中的调节作用.  相似文献   

17.
The transforming growth factor-β (TGF-β) family is involved in a variety of physiological processes, and transmits signals through phosphorylation of Smad by the receptor complexes. In the present study, effects of blocking solution in Western blot analyses on detection of phosphorylated Smad1/5/8 and Smad2 were examined. When EzBlock was used as a blocking reagent, phosphorylated Smad1/8 and Smad2 were most efficiently detected. The anti-phospho-Smad2 antibody specifically recognized the phosphorylated form of Smad2, whereas the anti-phospho-Smad1/5/8 antibody also reacted to the unphosphorylated form. These antibodies did not react with the other Smads.  相似文献   

18.
19.
20.
Smad及其结合蛋白在TGF β信号传导中的功能   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
王海霞  朱大海 《遗传》2003,25(4):479-483
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