麻疯树悬浮细胞系的建立与优化

以麻疯树无菌幼苗为外植体,研究疏松愈伤组织诱导方案及不同培养条件对麻疯树悬浮细胞生长的影响,旨在建立麻疯树悬浮细胞体系.结果表明,麻疯树疏松愈伤组织诱导的最适培养基及激素组合为:MS+2,4-D0.6mg/L+BA 1.0 mg/L+蔗糖30 g/L,此培养基上诱导出的愈伤组织湿润松散,颜色鲜艳.接种愈伤组织进行悬浮培养的液体培养基最适激素组合为:NAA 0.2mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+BA 0.5 mg/L.初代愈伤组织适宜用于悬浮培养,摇床转速应低于120 r/min为宜,这样培养的悬浮细胞分散度最高.培养基中添加500 mg/L水解酪蛋白能有效地促进悬浮细胞的生长.悬浮细胞振荡培养过程中悬浮细胞生长的时间进程为起始培养的第5天前,细胞增殖十分缓慢;第5-11天期间生长迅速;第13天后基本停止生长.在上述优化培养条件下,麻疯树悬浮细胞系增长速率最快,细胞生长状态最佳.     

向日葵悬浮培养再生芽

从54份向日葵(Helianthus annuus L.)材料中筛选出三个再生能力较强的基因型,取其下胚轴诱导愈伤组织,再以愈伤组织制备悬浮细胞系。在 MS 添加 BA(0.5mg/l)和2,4-D(0.001mg/l)液体培养基上确定细胞生长量,悬浮培养细胞在去掉2,4-D 的 MS 培养基上能够诱导芽的再生。     

紫茉莉悬浮细胞培养体系的建立

为建立紫茉莉(Mirabilis jalapa L.)悬浮细胞培养体系,以紫茉莉无菌苗叶片诱导的愈伤组织为材料,筛选紫茉莉悬浮细胞的适宜培养体系。结果表明,紫茉莉愈伤组织在MS+2,4-D 1 mg L-1+KT 0.5 mg L-1的液体培养基中悬浮继代培养3~4次,能得到稳定的悬浮细胞系。培养基的pH值为5.5~5.9,蔗糖浓度为30 g L-1更适合悬浮细胞的生长。紫茉莉悬浮细胞的生长曲线大致呈S型。最佳继代培养时间是10 d,培养液的体积为40 mL时,接种量为7.5 mL,可以较好地保持悬浮细胞系。1 L培养液中可提取分泌蛋白(0.42±0.15) g。这些有助于对悬浮细胞提取分泌蛋白的研究。     

生姜离体叶片愈伤组织悬浮细胞系建立与植株再生

以‘莱芜大姜’为试材,研究了生姜离体叶片愈伤组织的诱导以及细胞悬浮系建立与植株再生。结果表明,以生姜试管苗叶片为外植体,接种到MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖的培养基上,可有效诱导出生长迅速、质地疏松的愈伤组织。将获得的愈伤组织接种到MS+0.15 mg/L 2,4-D+6.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖的液体培养基上,25℃黑暗条件下震荡培养25-30 d,可建立分散性好、生长迅速的悬浮细胞系,细胞悬浮系培养的适宜参数为:初始接种量为1.0-1.5 g,继代培养的适宜间隔期为15 d,继代培养液体培养基更新比例为3/4。将悬浮细胞接种到固体培养基MS+0.2 mg/L NAA+10.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖上可获得再生植株。     

诺丽茎段愈伤组织诱导优化及细胞悬浮系的建立

为获取诺丽茎段中的次生代谢物并为建立遗传转化体系奠定基础,以诺丽茎段(无腋芽)为外植体诱导愈伤组织,并建立细胞悬浮系,对影响愈伤组织的诱导及细胞悬浮系的因子进行了研究。结果表明:愈伤组织诱导的最优培养基是MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L2,4-D;悬浮培养的最佳培养基为MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L2,4-D+3%蔗糖,pH为5.85,当初始接种量为37.5g/L、摇床转速为110r/min且(25±2)℃暗培养时,悬浮细胞生长良好,生长速率最大;诺丽茎段悬浮细胞生长曲线呈"S"型,最适继代周期为12–20 d;培养过程中,培养基的pH呈先下降后缓慢升高的变化趋势,诺丽茎段愈伤组织悬浮细胞培养的最适pH在4.5–5.0之间。文中成功建立了以诺丽茎段为外植体的稳定的细胞悬浮系。     

辣木资源利用中的悬浮细胞培养体系研究

辣木富含多种营养成分,在食品和药物开发方面有巨大的潜在开发价值。本文提供了一种可行的辣木细胞悬浮培养技术。由辣木的根诱导形成愈伤组织和叶诱导形成愈伤组织的合适细胞悬浮培养条件分别为MS培养基(MS)+1.0mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)+1.0mg/L激动素(KT)和MS+0.5mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT,摇床转速均为50~100r/min,将愈伤组织添加到液体悬浮培养基中20d左右可得到大量悬浮细胞。本研究为辣木细胞水平的培养和研究提供了一条途径,为辣木潜在价值的开发利用提供新的思路。     

濒危植物珙桐愈伤组织的诱导及悬浮细胞培养初探

以珙桐（Davidia involucrate）无菌苗的下胚轴为外植体,以LSD分析和正交设计与分析为主要研究方法。诱导和筛选愈伤组织,进行悬浮培养,初步建立了珙桐悬浮培养体系,并对珙桐悬浮培养中生物量和pH值的变化进行了初步研究。结果表明：KT和2,4-D的组合诱导出的愈伤组织更适合进行细胞悬浮培养,最佳愈伤组织诱导培养基为WPM＋KT 1.0 mg/L＋2,4-D 0.5 mg/L＋Vc 1.0 mg/L;悬浮细胞培养中,接种量和Ca2＋浓度是影响生物量的主要因素,最佳接种量为25 g/L,最佳Ca2＋浓度为标准WPM培养基中Ca2＋浓度的2倍;黑暗条件下,珙桐悬浮培养生物量变化曲线呈＂S＂型,在21 d时可获得最大生物量;pH值的变化与生物量的变化有一定的相关性。     

朱砂根愈伤组织培养及悬浮细胞系建立

以朱砂根(Ardisia crenata Sims.)无菌苗的茎段、叶片、胚轴和胚根为外植体进行愈伤组织诱导研究。结果表明:胚根在含有2,4-D的培养基中的诱导率最高,在添加5 mg L-1 AgNO3的MS+2,4-D 0.5 mg L-1+KT 0.01 mg L-1培养基中继代培养的增殖系数高达8倍以上。培养中获得了5种类型的愈伤组织(I-白色湿软状、Ⅱ-白色冰砂状、Ⅲ-淡黄色颗粒状、Ⅳ-黄绿色块状和V-绿色块状),其中Ⅱ和Ⅲ型愈伤组织可以成功建立悬浮细胞系,用M S+2,4-D 0.5 mg L-1+KT 0.01 mg L-1培养基进行固-液轮回培养,可以较好地保持悬浮细胞系。     

羊草与灰色赖草F1代细胞悬浮系的建立及植株再生

本研究以羊草(L eym us ch inensis)与灰色赖草(L eym us cinereus)杂种F1代幼穗为外植体诱导愈伤组织,在3.0 m g/L 2,4-D M S培养基上继代1次后,转入不同浓度激素(2,4-D、IAA、KT)配比和不同浓度蔗糖的M S液体培养基进行振荡培养,建立杂种F1代细胞悬浮系和植株再生体系.结果表明,细胞悬浮培养时,M S 1.0 m g/L2,4-D 0.1 m g/L KT 4%蔗糖的液体培养基最佳;悬浮细胞分化时,1.0 m g/L 2,4-D 0.1 m g/L KT 4%蔗糖 M S和1.0 m g/L 2,4-D 4%蔗糖 M S培养的悬浮细胞在1.0 m g/L NAA 0.5 m g/L KT M S分化培养基上的绿苗分化率分别达到83%和80%.细胞悬浮系及再生体系的建立为杂种F1代育性恢复的研究奠定了基础.     

药用植物刺山柑愈伤组织诱导及细胞生长代谢特征研究

本文研究了不同外植体及激素对刺山柑愈伤组织诱导的影响,不同激素配比对愈伤组织增殖培养以及悬浮细胞的生长与代谢特征.结果表明:以刺山柑叶片作为诱导愈伤组织的材料,效果较佳;愈伤组织诱导和继代的适宜培养条件是分别是MS+0.5 mg/L 2,4-D+1.0mg/L6-BA和MS+1.0mg/L2,4-D+1.5mg/L6-BA.刺山柑悬浮培养细胞的生长周期为30天左右,细胞生长曲线呈"S"形,生物量增长2.8倍左右;细胞生长周期内,碳源消耗规律表现为蔗糖和可溶性总糖的浓度持续降低,而还原糖则表现为先升高后降低;过氧化物酶活测定显示酶活水平与蔗糖浓度的高低呈一定程度的正相关.     

云南红豆杉细胞的悬浮培养

在云南红豆杉细胞悬浮培养中,适宜的培养基为B5,接种量为0．5～0．8g干重细胞／100ml培养基,2,4－D浓度为1．0mg／L;培养细胞的生长周期约30d;培养基中较高浓度的蔗糖（40g／L）可提高紫杉醇含量;添加的椰子汁（CM）、酪蛋白氨基酸（C）和水解乳蛋白（LH）3种有机添加剂均能提高培养细胞中紫杉醇的含量,但只有CM和CA能促进细胞的生长。于B5培养基中添加不同浓度的NH4NO3对培养细胞无明显影响。     

除虫菊细胞的悬浮培养

除虫菊悬浮细胞从培养后第8天开始迅速生长,14 d达到最大生长量,其最适培养基为:MS 4mg·L-12,4-D 0.1mg·L-1NAA 0.3 mg·L-16-BA 30 g·L-1蔗糖,最适接种量为15 g·L-1,摇瓶装液的体积分数为40%,初始培养的最适pH值为5.8,收获时pH下降为4.6±1,最适培养温度为25℃.     

放大培养对岩黄连细胞悬浮培养的影响

为了优化岩黄连细胞悬浮培养的条件,研究了在放大培养过程中,岩黄连细胞生长与主要营养成分的代谢动力学,以及生物碱的产生情况。结果表明,在不同培养体系下,细胞生长曲线均呈现"S"型。随着培养体积从50、100 mL放大到500 mL和1 L,培养液中碳源、氮源和磷源的消耗减慢,细胞生物量减少,生物碱产量降低。其中100 mL培养体系所获生物量最高,达到15.2 g/L,生物碱产量也最高,脱氢卡维丁为8.35 mg/mL,小檗碱为4.58 mg/mL。根据本文结果,提出了岩黄连细胞培养条件的优化和大规模细胞培养生产岩黄连生物碱应采取的策略。     

液体悬浮培养促进铁皮石斛原球茎高效诱导、增殖的研究

用正交设计方法对铁皮石斛原球茎具有高效增殖影响的激素（BA,NAA,KT,马铃薯汁）以及配比进行研究,结果表明：以茎段为外植体在培养基Ms＋BA2．0mg／L＋NAA2．0mg／L＋马铃薯汁10％＋糖3％,具有很好的原球茎诱导作用,50d后诱导率达95．20％;原球茎在1／2MS＋BA2．0mg／L＋NAA1．0mg／L＋KT0．5mg／L＋糖3％的培养基上,以液体悬浮培养,原球茎增殖达49．032g／50d。     

从香蕉胚性细胞悬浮系获得再生植株

2个主栽香蕉品种的未成熟雄花诱导产生的胚性愈伤组织接种至液体培养基中,经3～4个月的继代培养后长成质地均匀的胚性细胞悬浮系(ECS),悬浮系中60%～80%是胚性细胞团.ECS接种至体胚再生培养基上约4～5周后开始出现再生体胚,萌发的体胚以MS培养基培养后可获得再生植株.     

葡萄子房胚性细胞悬浮系的建立及其生长特性研究

由葡萄栽培品种“蜜汁”子房诱导的愈伤组织,经不同浓度２,４－Ｄ试验表明,０．５ｍｇ／Ｌ的２,４－Ｄ最有利于形成胚性细胞;该浓度下形成的质地紧密适度的愈伤组织经２个月的悬浮振荡培养,成功地建立了分散性好、生长旺盛的胚性细胞悬浮系;并通过培养过程中生长曲线的测定,确定了细胞悬浮系的生长特性。     

不同因素对岩黄连悬浮细胞生长的影响

目的:建立一个快速生长的岩黄连悬浮细胞培养体系。方法:研究了接种量、基本培养基、初始pH值、不同碳源对岩黄连悬浮细胞生长的影响。结果:合适的接种量是7.5~10%(FW),接种量过少会抑制细胞生长;B5和MS基本培养基均适合岩黄连细胞的生长;最佳初始培养基pH值为6.0,此时获得的细胞生物量最高;岩黄连悬浮细胞培养的生长周期为24d,最大生物量出现在第18d,达到14.1g/l(DW);蔗糖比葡萄糖更有利于岩黄连细胞的生长,添加60g/l蔗糖所获得的生物量最高,达到18.5g/l(DW)。     

搅拌式生物反应器悬浮培养水母雪莲细胞的研究

应用 2L通气搅拌式生物反应器一步批式培养水母雪莲细胞。采用倾斜式搅拌桨代替透平桨 ,研究了搅拌转速、通气量和接种量对细胞生长和黄酮合成的影响 ,发现在 75r min、70 0～1000L min和 4.0～ 5.0gDCW L接种量下细胞生长和黄酮合成比较好。经过 12d培养细胞干重达 13.8gDCW L ,黄酮产量 416mg L ,黄酮含量占细胞干重的 30%。水母雪莲细胞生长及黄酮合成的进程表明 ,黄酮积累与细胞生长呈正相关。对细胞聚集体分布的研究发现 ,流变压力使细胞聚集体分裂 ,使反应器中细胞生长受到影响 ,黄酮产量较摇瓶中降低