发酵性丝孢酵母胞内脂肪酶与蛋白酶性质的研究

为了探讨发酵性丝孢酵母胞内脂肪酶和蛋白酶的潜在应用,通过超声波破碎细胞获得胞内酶,研究了温度、pH、金属离子、有机溶剂、表面活性剂、蔗糖、淀粉、酪蛋白对粗酶液的酶活力的影响.研究结果表明,两种酶的最适反应条件均为55 ℃、pH中性;5 mmol/L的金属离子Ca2+、Mn2+降低了脂肪酶活力,而提高了蛋白酶的活力;20％ (v/v)甲醇、乙醇、异丙醇、正己烷、甲苯对脂肪酶均具有激活作用,其中正己烷激活作用最大;而所试有机溶剂均严重抑制蛋白酶活力;0.01％(v/v) TritonX-100和蔗糖7.5％ (w/v)对脂肪酶和蛋白酶均具有激活作用,0.5％ (w/v)可溶性淀粉和1％ ～2.5％ (w/v)酪蛋白均能提高脂肪酶活力且降低蛋白酶活力.这些特性使发酵性丝孢酵母胞内脂肪酶和蛋白酶应用于洗涤剂具有可能性.     

本期重点推介

正节肢动物中丝氨酸蛋白酶(SP)及其同源蛋白是蛋白酶中的一个超家族,参与多种生命活动,且受丝氨酸蛋白酶抑制剂(SPI)的严格调控。Kazal型SPI(KaSPI)是最为保守的一类。为了探究KaSPI在大豆蚜Aphisglycines生存和抵御病原入侵中的作用,东北农业大学农学院陈雅茹和樊东等克隆测定了大豆蚜KaSPI基因AgKaSPI的cDNA序列,分别检测了AgKaSPI在其不同发育阶段以及蜡蚧刺束梗孢菌Akanthomyceslecanii侵染后不同时间其成虫体内的表达水平,并测定分析了RNAi干扰AgKaSPI后其成虫体内AgKaSPI含量,丝氨酸蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶活性及蜡蚧刺束梗孢菌侵染成虫的死亡率变化,结果表明AgKaSPI可能通过调节丝氨酸蛋白酶活性参与了大豆蚜对蜡蚧刺束梗孢菌的免疫反应(pp.908-919)。     

中性蛋白酶高产菌株的筛选及产酶酶系分析

目的:满足水产中对中性蛋白酶的需求。方法:以实验室保藏的米曲霉ZW为出发菌株,经Co60定向诱变,通过透明圈法初筛、摇瓶发酵复筛,筛选中性蛋白酶活力高的菌株,并对其进行产酶酶系分析。结果:筛选到的米曲霉ZW-06产中性蛋白酶酶活可达15000U/g干曲,比诱变前酶活提高了74%,是目前国内报道的固体发酵产中性蛋白酶活力最高的菌株;经过10代传代之后,酶活力仍保持稳定。通过对米曲霉ZW-06进行产酶酶系分析,发现发酵产物中除了有较高的中性蛋白酶酶活,还有较高的木聚糖酶和酸性纤维素酶酶活,酶活分别达到49879U/g干曲和21099U/g干曲。结论:米曲霉ZW-06在饲料工业中有很大     

用吸附-交联法在磁性胶体粒子上固载中性蛋白酶

利用吸附-交联法,在磁性胶体粒子表面固载 ASl.398 中性蛋白酶,可以制备出活性达 2500U/g 的磁性固定化中性蛋白酶.该固定化酶具有较好的耐热性和操作稳定性,最适作用 pH6.0—6.5,最适作用温度60℃.考察了交联剂用量、温度、pH及酶与载体比例对 AS1.398 中性蛋白酶固定化的影响.     

AS1.398中性蛋白酶的固定化研究

本文对枯草杆菌AS1.398中性蛋白酶的固定化进行了研究。考查了温度,pH值、交联剂用量,以及载体与酶的比例等因素对AS1.398中性蛋白酶固定化的影响;确定了固定化AS1.398中性蛋白酶的一些催化特性:最适温度60℃,最适pH值8.0,操作半衰期88天。固定化AS1.398中性蛋白酶活性回收为74％。     

二氯苄醇的改性及其抗菌性研究

本文通过酰氯化反应对二氯苄醇(DCBA)进行改性,使用红外光谱仪和核磁共振波谱仪对其结构进行表征分析;将其添加到漱口水和洗发水中,研究其在不同温度下的稳定性及其抗菌性能。结果显示,改性DCBA在水中和漱口水中的溶解性和稳定性明显提高,在洗发水中对马拉色菌有良好的抗菌性。此外,改性DCBA对铜绿假单胞菌等部分菌株的抗菌性能也有所提高。     

改性壳聚糖吸附Cu(Ⅱ)及其生物活性研究

壳聚糖具有特殊的生物活性和生理调节机能,其分子的重复单元中富含氨基和羟基,对Cu(Ⅱ)具有良好的络合能力.壳聚糖分子结构的规整性和分子间氢键的存在使其难溶于多数溶剂,对壳聚糖进行改性以增强溶解性和对Cu(Ⅱ)的吸附能力是壳聚糖研究的热点.文章综述了目前壳聚糖的理化改性和对Cu(Ⅱ)的吸附研究,对吸附过程的影响因素做了总结,对壳聚糖吸附体内Cu(Ⅱ)生物学活性的应用作了展望.     

青蛤Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆及其在组织间的表达分析

利用构建的SMART-cDNA文库及高通量测序方法,获得了青蛤Kazal家族丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(Serine Protease Inhibitor,SPI)的全长序列,采用荧光定量PCR方法分析了SPI在青蛤各组织的表达情况,并在鳗弧菌胁迫下分析了SPI在青蛤血液中的时序表达关系。结果表明,青蛤SPI基因全长587 bp,CDS为67~520 bp,编码151个氨基酸,具有19个氨基酸的信号肽序列;荧光定量PCR结果显示,该基因在血液、肝脏、外套膜、鳃和闭壳肌等组织中表达差异明显,其中血液中表达水平最高,在闭壳肌中表达水平较低,其他组织表达量极少;在鳗弧菌刺激后3 h和48 h青蛤血液中SPI的表达量出现明显上调的趋势且与对照组有极显著性差异(P0.01),说明SPI基因在青蛤的免疫反应中具有重要的作用。     

尖孢镰刀菌M1耐热蛋白酶纯化及酶学性质

【背景】前期工作中,从北大仓白酒大曲分离到一株真菌,经形态学和分子生物学方法,将其鉴定为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporim)M1,研究发现该菌能产中性蛋白酶。中性蛋白酶是应用于工业化生产的重要酶制剂。由于其作用条件温和、催化速率较高,被广泛应用于食品、医药、皮革、饲料、化工和废弃物处理行业。【目的】为了使该菌蛋白酶应用于相关工业生产,需要对该蛋白酶进行纯化和酶学特性研究。【方法】采用硫酸铵分级分离、疏水和离子交换层析对该菌蛋白酶进行纯化,通过SDS-PAGE测定酶的纯度和分子量,并研究其热稳定性和酸碱适应性。【结果】经各步层析,蛋白酶纯化倍数达26.1,得率为7.9%;经测定纯酶的分子量为62 kD;该酶最适温度为40℃,最适pH为7.0,属于中性蛋白酶;该酶对酸较敏感,对碱有较强的耐受性;耐热性较强,但酶活性不受乙二胺四乙酸二钠盐抑制。【结论】由于该中性蛋白酶具有较好的耐热性,因此,可作为工业生产上潜在的生物催化剂。     

蛋白酶分泌菌对重金属胁迫的反应

本文研究了Pb、zn、cu和Cd对3种蛋白酶产生菌:碱性地衣芽孢杆菌2709(Bacilluslicheniformis 2709)、中性枯草杆菌1.398(Bacillus subtilis1.398)和酸性宇佐美曲霉537(Aspergillususamii 537)生长及其酶活性的影响,并采用生长抑制皿分析(GIPA)方法针对3种菌株在Pb、zn、Cu、Cd不同胁迫浓度下的生长量进行打分,分析其耐性与抗性指标(MTC与MIC).结果表明4种重金属在超过一定临界浓度后,对3种菌株的生长和蛋白酶活性均产生了较大的抑制作用.碱性蛋白酶对4种重金属均具有较大的适应性,其次是中性蛋白酶对Zn和Cd具有一定的适应性.而酸性蛋白酶对4种重金属均表现出被抑制状态.3种菌株对Pb和Zn耐性与抗性最高(2.0 mmol/L～6.0 mmol/L),其次是对Cd也具有一定的抗性(0.5 mmol/L～0.75 mmol/L).