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1.
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Polycomb Group蛋白复合体与植物春化作用
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An YR Xu JB An HL《遗传》,2011年第33卷第3期
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Polycomb Group(PcG)蛋白能形成Polycomb Repressive Complex 1(PRC1)和PRC2等复合体,通过一个保守且表观遗传的机制调节基因表达并控制动植物的发育。拟南芥中由VERNALIZATION2参与形成的PRC2复合体(VRN2-PRC2)在春化过程中能对主要开花抑制基因FLOWER LOCUS C(FLC)的染色质进行组蛋白甲基化修饰,形成H3K27me3(组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化)等转录抑制标记,从而抑制FLC转录,促进开花。虽然麦类作物的春化机理与拟南芥有较大差异,但最近的研究表明麦类作物春化过程也受PcG蛋白调控。文章对拟南芥PcG蛋白介导的春化调节机制进行综述,期望能对植物尤其是麦类作物的春化机理研究提供资料。
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2.
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大豆GmF6′H1基因的克隆及功能验证
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王 蕾 张 娟 魏丽娟 刘林德《西北植物学报》,2015年第35卷第2期
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以大豆品种‘黑农35号’为材料,利用同源克隆方法获得了一个依赖于Fe(Ⅱ)和2-酮戊二酸的双加氧酶基因,命名为GmF6′H1。荧光定量PCR分析显示GmF6′H1在大豆根中的表达量最高,其次是荚果、叶和茎;2,4-D处理对大豆GmF6′H1的转录水平影响很小,水杨酸和激动素的处理均显著提高了GmF6′H1基因的表达,但随着处理时间的延长表达水平稳定下降,最后接近处理前的水平。带有组氨酸标签的GmF6′H1异源表达的蛋白纯化后,以阿魏酰辅酶A为底物研究了其酶活特性,利用HPLC分析检测到GmF6′H1能够催化阿魏酰辅酶A生成东莨菪素。采用农杆菌介导法将该基因转入拟南芥Atf6′h1突变体,转基因拟南芥与Atf6′h1突变体植株外在表型没有明显的差异,而香豆素的含量分析显示,转基因株系根中香豆素的含量较拟南芥Atf6′h1突变体有所提高,与野生型拟南芥中香豆素的含量接近。
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3.
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彩叶草羟基丙酮酸还原酶基因CbHPR的克隆及分析 被引次数：1
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祝钦泷 李名扬《西北植物学报》,2009年第29卷第5期
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为研究C3植物彩叶草的光呼吸作用,根据获得的HPR EST片段,采用RACE和文库结合的方法,克隆了HPR蛋白的全长cDNA,命名为CbHPR(GenBank accession No.EF125078).序列分析结果表明,该cDNA全长为1 393 bp,包含一个1 161 bp的ORF框,编码386个氨基酸;其5′-UTR区含有2个终止子TGA,3′-UTR区具有推测的加尾信号AATAAA;CbHPR蛋白C端具定位于微体的转运信号S-K-L,具有1个保守的2-Hacid_dh_C domain结构域(D-异构体-羟基酸脱氢酶-NAD结合结构域)、5个S磷酸化位点、4个T磷酸化位点和6个Y磷酸化位点.PSORT定位分析显示,CbHPR定位于叶的过氧化物酶体中.多序列比较和进化树分析表明,CbHPR与其他植物HPR一致性高达87%～90%,与拟南芥AtHPR具有相似的功能.CbHPR基因的克隆与分析,为进一步研究该基因在彩叶草的光呼吸作用中的表达调控奠定了基础.
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4.
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拟南芥PRC1蛋白功能研究进展
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丰景 卢江《植物生理学报》,2018年第5期
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多梳家族蛋白(Pc G)是一类高度保守的表观调控因子,在动植物中普遍存在,发挥着重要的生物学功能。Pc G蛋白形成多个蛋白复合物,如Polycomb repressive complex 1(PRC1)和PRC2,其作用是抑制基因的表达。PRC2组分在植物中保守并且已经在拟南芥中被广泛研究。相比之下,PRC1的组成和功能在动植物之间存在较大差异。本文对拟南芥PRC1蛋白的特异性和保守性进行了综述,并强调了拟南芥PRC1组分在种子胚发育、种子萌发、茎尖干细胞命运确定和花发育中的关键作用。
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5.
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H5N1型禽流感病毒核蛋白C端缺失削弱核蛋白间的相互作用 被引次数：2
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李斌 周晓巍 张莹莹 孙玉梅《生物技术通讯》,2009年第20卷第1期
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目的：克隆H5N1型禽流感病毒的核蛋白（NP）基因，将其定向插入双分子荧光载体，在细胞水平验证NP-NP的相互作用，进而确定NP-NP相互作用的关键区域。方法：根据双分子荧光互补（BiFC）实验的载体和NP基因序列设计引物，将NP的结构基因定向克隆到荧光载体上，得到重组荧光载体pBiFC-YC155-NP、pBiFC-YN155-NP、pBiFC-YC173-NP和pB-iFC-YN173-NP，瞬时转染293FT细胞，研究NP-NP相互作用；进一步对NP的C端进行缺失突变，然后定向克隆到pBiFC-YN173载体，令其分别与pBiFC-YC155-NP共转染293FT细胞，确定NP的C端在NP-NP相互作用过程中的地位。结果：构建了NP基因的BiFC载体pBiFC-YC155-NP、pBiFC-YN155-NP、pBiFC-YC173-NP和pBiFC-YN173-NP；将pBiFC-YC155-NP和pBiFC-YN173-NP、pBiFC-YC173-NP和pBiFC-YN173-NP共转染293FT细胞后出现了荧光；缺失实验表明，NP的C端是NP在体内相互作用形成寡聚体所必需的。结论：验证了H5N1型禽流感病毒NP在体内的相互作用，并初步证明NP的C端是NP形成寡聚体的必需片段，为进一步研究NP的作用奠定了基础。
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6.
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KAP-1:转录调控中的一个桥梁分子
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杨冬 姜颖 贺福初《遗传》,2007年第29卷第2期
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KAP-1(又称TIF1b, TRIM28等)是一种转录中介因子, 在诸多转录调控复合体中起桥梁作用。它通过其N端RBCC结构域与含KRAB结构域的锌指蛋白、MDM2、MM1、C/EBPb等相互作用; 通过C端的PHD及BrD结构域与SETDB1、Mi-2a等分子相互作用, 参与形成具有组蛋白甲基化酶或组蛋白去乙酰化酶活性的复合体; 通过中间的HP1BD区域与HP1蛋白相互作用, 进而与组蛋白相结合。大量研究表明, KAP-1作为一个桥梁分子, 主要以共抑制因子形式参与转录抑制复合体的形成, 在某些复合体中也可作为共激活因子发挥作用。KAP-1参与形成的复合体在精细胞发育、胚胎早期发育等生理过程中发挥重要的调控作用, 这种调控属于表观遗传调控范畴。
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7.
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SARS病毒受体ACE2的克隆、原核表达及其功能区鉴定 被引次数：1
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杨国良 费小战 陈焕春 郭爱珍《病毒学报》,2006年第22卷第2期
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ACE2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)是SARS冠状病毒(severe acute respiratory syndrome associatedcoronavirus,SARS-CoV)的主要受体。此研究旨在鉴定ACE2的SARS-CoV受体功能区,为进一步阐明SARS-CoV与细胞间的相互作用机制及研制抗病毒药物等提供理论依据。利用RT-PCR从Vero-E6细胞的mRNA中分两段扩增ACE2基因,其中N端片段ACE2A1-367(102~1 210nt)不包括ACE2的酶活性位点(1 223~1 237nt,或374~378aa),而C端片段ACE2B335-805(1 101~2 524nt)包括ACE2的酶活性位点。扩增片段克隆入pMD-18T,并进行测序鉴定。进一步构建与GST基因融合表达的原核表达质粒pGEX-ACE2A与pGEX-ACE2B,IPTG诱导表达。表达的融合蛋白分子量为65kD和77kD,主要以包涵体形式存在。Western blot证实表达产物具有免疫学活性。将纯化的包涵体蛋白质复性后进行Western blot分析,证实pGEX-ACE2A表达的蛋白(~65kD)能与SARS-CoV S1蛋白特异结合,而pGEX-ACE2B表达的蛋白(~77kD)不能与S1蛋白结合。结果表明,ACE2的受体活性与酶活性位点无关,受体功能区在ACE2 N端367个氨基酸内。
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8.
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油菜AP2/ERF-B4类转录因子克隆及表达载体的构建 被引次数：1
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庄静 熊爱生 乔玉山 章镇 姚泉洪《西北植物学报》,2008年第28卷第8期
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利用油菜UniGene数据库,以拟南芥转录因子保守序列为探针,通过电子克隆方法分离得到一个UniGene库Bna.17538,进一步序列拼接得到一个油菜AP2/ERF-B4亚族的转录因子BnaERFB4-1,长度为672 bp,并进行了相关的生物信息学分析.结果显示BnaERFB4-1是亲水性蛋白,蛋白质三级结构与拟南芥RAP2.6L非常相似,蛋白质无序化程度大于拟南芥RAP2.6L.设计引物通过PCR和RT-PCR方法分别从甘蓝型油菜沪油15幼苗的DNA和cDNA中分离了BnaERFB4-1基因,命名为BnaERFB4-1-Hy15.序列测定和分析显示,来源于沪油15的BnaERFB4-1-Hy15基因与电子克隆的基因序列差异很小,有3个氨基酸位点不同,存在一个内含子.将BnaERFB4-1-Hy15基因通过BamHⅠ和SacⅠ酶切后分别插入酵母表达载体YK3302和植物双元表达载体pYF1404的相应位置,构建了BnaERFB4-1-Hy15基因的酵母体内结合和植物转化载体,为深入研究该基因在油菜抗逆调控中的作用奠定了基础.
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9.
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水稻/拟南芥防御病原细菌入侵的表观遗传调控研究进展
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徐以华 黎起秦 刘连盟 王玲 丁新华 侯雨萱 黄世文《生物技术通报》,2018年第2期
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表观遗传修饰是指在不改变基因序列的情况下,通过对DNA和组蛋白等一系列可逆的共价修饰调控生物体的基因表达,在应对生物和非生物因素胁迫以及适应环境变化的过程中发挥着非常重要的作用。最近的研究表明,表观遗传修饰参与水稻/拟南芥抵御细菌入侵的免疫反应(包括效应识别、信号转导和快速防御反应等)。对基因组DNA甲基化、组蛋白修饰(甲基化/去甲基化、乙酰化/去乙酰化和泛素化)和小RNA在内的表观遗传修饰在水稻/拟南芥对病原细菌入侵的防御反应中的功能和分子调控机制进行了综述,有助于系统地全面理解表观遗传抗病性,为其抗病育种提供理论支持和基因资源。
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10.
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组蛋白去乙酰化酶HDAC2突变体构建及其SUMO修饰E3连接酶功能研究
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郭韡 熊渊 黄宏 邢伟 李向云 徐祥《现代生物医学进展》,2013年第13卷第6期
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目的:针对人源HDAC2外显子拼接功能区(CDS)基因,运用双管法突变体构建技术,构建HDAC2去乙酰化酶功能失活的片段缺失与关键位点突变体,检测突变体的SUMO化修饰E3连接酶功能活性,探究此HDAC2新功能是否受到其固有的去乙酰化酶功能的影响.方法:设计HDAC2 100-322位氨基酸密码子缺失的片段突变体引物与142位H→A点突变体引物,利用HDAC2的pcDNA3.1真核表达质粒为模板,通过耐热Fusion酶PCR反应双管扩增相应的单链DNA,并经退火、模板酶切、乙醇纯化、感受态转化、抗性平板筛选、测序鉴定获得两种HDAC2去乙酰化酶功能失活的pcDNA3.1真核表达质粒.免疫印迹检测突变体质粒在细胞中的表达,荧光素酶(LUC)报告基因实验检测其SUMO化修饰E3连接酶功能活性.结果:成功构建HDAC2去乙酰化功能失活的片段缺失突变体pcDNA3.1/HDAC2 (DEL 100-322AA)与关键位点突变体pcDNA3.1/HDAC2(142 H→A).C-myc标签的免疫印迹检测显示两种突变体在细胞中可稳定表达.将突变体转染进入三种细胞,LUC报告基因分析结果显示突变体仍具有E3连接酶功能活性.结论:HDAC2的E3连接酶功能不依赖于其去乙酰化酶活性,并且E3连接酶功能结构域位于其序列C端.
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11.
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拟南芥转录因子HB22与CRY1相互作用研究
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曾婷 何志敏 段桂芳 赵小英 唐冬英 刘选明《生命科学研究》,2013年第17卷第3期
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通过酵母双杂交的方法,从拟南芥转录因子库中筛选出了6个与CRY1相互作用的转录因子.为了测定其中的HB22与CRY1相互作用的强度,采用了ONPG与CPRG两种方法对其β-半乳糖苷酶活性进行了分析.结果显示在蓝光光强为50μmol/m2s,孵育时间为4 h的情况下,蓝光与暗处理情况下的β-半乳糖苷酶活性比值分别为1.668和2.18.进一步设置蓝光处理时间及光强梯度实验数据显示,在蓝光光强为50μmol/m2s孵育时间为3 h时,二者相互作用强度达到最高.说明HB22与CRY1的相互作用具有蓝光响应.对蓝光处理不同时间的野生型col-4与cry1缺失突变体的材料进行HB22基因的定量PCR分析,发现拟南芥cry1缺失突变体中该基因的表达量比野生型中高,在蓝光处理2 h时,缺失突变体中表达量为野生型中的6倍左右.说明CRY1可能介导蓝光抑制HB22基因表达.
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12.
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植物表观遗传修饰与病原菌胁迫应答研究进展
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潘丽娜 王振英《西北植物学报》,2013年第33卷第1期
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真核生物基因表达受到染色质结构的调控,组蛋白与DNA的共价修饰构成表观遗传标签,并在植物胁迫应答如防御病原菌侵染过程中起重要作用.病原菌侵染可引起基因组整体DNA甲基化模式变化及胁迫应答基因的位点特异性去甲基化,导致植物抗性基因表达上调或下调,并进一步调控植物对病原菌的胁迫应答;组蛋白去乙酰化酶HDAC通过茉莉酸途径增强植物对病原菌的胁迫应答;此外,染色质重塑复合物Swr1复合体通过识别DNA基元和组蛋白乙酰化修饰状态靶向基因启动子,负调控SA敏感基因.该文从DNA甲基化、组蛋白乙酰化、甲基化修饰,染色质重塑等方面着重阐述植物与病原菌互作过程中发生的主要事件的分子基础及其研究进展.
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13.
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油茶CoSAD基因载体的构建、鉴定及功能分析
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陈鸿鹏 谭晓风 谢耀坚 张党权 曾艳玲《植物资源与环境学报》,2015年第2期
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为揭示油茶( Camellia oleifera Abel)硬脂酰-ACP脱饱和酶( SAD)基因(即CoSAD基因)的功能,构建了该基因的原核表达载体pET28b-CoSAD、植物表达载体pBI121-CoSAD和RNA干扰载体pBI121-CoSAD RNAi,并采用PCR扩增及双酶切方法对3类载体进行鉴定；在此基础上,对原核表达载体中的CoSAD基因进行诱导表达分析,并对pBI121-CoSAD转化的拟南芥〔Arabidopsis thaliana ( Linn.) Heynh.〕sad突变体植株和pBI121-CoSAD RNAi转化的拟南芥野生型植株进行转基因鉴定和主要脂肪酸成分含量分析。 PCR扩增和双酶切结果显示：从 pET28b-CoSAD、pBI121-CoSAD和pBI121-CoSAD RNAi 载体的阳性克隆中均可获得目的条带,表明这3类载体均构建成功；用1 mmol·L-1 IPTG分别诱导0.5、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0 h,CoSAD基因均能够在pET28b-CoSAD转化的大肠杆菌BL21感受态细胞中正常表达,能够获得与预测结果相符的相对分子质量约47000的特异目的蛋白条带,且蛋白活性随诱导时间的延长而升高。从pBI121-CoSAD转化的拟南芥突变体植株和pBI121-CoSAD RNAi转化的拟南芥野生型植株中也均可扩增出目的条带。 GC-MS分析结果显示：与拟南芥野生型植株相比,其突变体植株的硬脂酸和棕榈酸含量较高、油酸和棕榈油酸含量较低；但突变体植株经pBI121-CoSAD转化后,硬脂酸和棕榈酸含量降低而油酸和棕榈油酸含量提高；野生型植株经过pBI121-CoSAD RNAi转化后,硬脂酸和棕榈酸含量提高、油酸和棕榈油酸含量降低,表明pBI121-CoSAD转化能够促进拟南芥sad突变体植株体内饱和脂肪酸向不饱和脂肪酸转化,而pBI121-CoSAD RNAi转化对拟南芥SAD基因的表达有明显的抑制作用,这2种重组质粒均可影响拟南芥植株的脂肪酸含量。研究结果表明：油茶CoSAD基因具有调控饱和脂肪酸(硬脂酸和棕榈酸)向不饱和脂肪酸(油酸和棕榈油酸)转化的功能,对茶油的脂肪酸组成具有关键的调控作用。
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14.
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紫花苜蓿NAC转录因子MsNAC1基因的克隆、生物信息学分析及非生物逆境胁迫下的表达分析
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申玉华 徐振军 杨晓坡 相吉山 文静 黄文婕《植物遗传资源学报》,2014年第15卷第6期
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NAC转录因子是高等植物所特有的具有多种生物功能的转录因子,在植物生长发育、抵抗逆境和激素调节等过程中发挥着重要作用。本研究利用RACE-PCR技术,克隆获得了紫花苜蓿NAC转录因子Ms NAC1(Gen Bank登录号为JN099384.1)基因的c DNA序列。生物信息学分析显示,Ms NAC1基因的开放阅读框(ORF)为993 bp,编码一个由330个氨基酸残基组成的亲水性蛋白,N-端具有保守的NAM结构域,C-端高度变异,具备NAC转录因子的基本特征;Ms NAC1蛋白被定位在细胞核中,含有2条核定位信号序列,具有9个糖基化位点和23个磷酸化位点,三级结构为对称的同型二聚体。多重比对发现,Ms NAC1蛋白与拟南芥ATAF1和水稻Os NAC6蛋白的同源性较高;系统进化分析表明,Ms NAC1蛋白属于NAC转录因子家族中的ATAF亚族,与ATAF1的亲缘关系最近。非生物逆境胁迫下的表达分析显示,Ms NAC1基因在高盐、干旱和低温胁迫下表达量均呈现先上调后下调的趋势,不同处理时间的差异达到极显著水平,并且根中的表达量上调幅度高于叶片,说明该基因可能参与调控非生物逆境胁迫的生理响应。
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组蛋白乙酰化／去乙酰化作用与真核基因转录调控 被引次数：1
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徐谷峰 王红梅 滕脉坤《生命的化学》,2001年第21卷第5期
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核小体组蛋白的翻译后修饰是真核基因转录调控中的关键步骤。对于组蛋白的这类修饰方式 ,近年来研究最为活跃的是组蛋白Ｎ末端区域保守的Ｌｙｓ上ε ＮＨ 3 的乙酰化作用。随着各种组蛋白乙酰化酶 /去乙酰化酶被克隆、鉴定 ,组蛋白乙酰化 /去乙酰化作用与真核基因转录调控之间的关系也开始逐步得以阐明。1 .真核转录相关的组蛋白乙酰化酶和组蛋白去乙酰化酶1 .1 组蛋白乙酰化酶 (ｈｉｓｔｏｎｅａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓ ｆｅｒａｓｅ ,ＨＡＴ) 核小体组蛋白中Ｎ末端区域上保守的Ｌｙｓ的乙酰化是染色质具有转录活性的标志之一。在组蛋白…
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水稻质体葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因的克隆与表达研究 被引次数：1
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侯夫云 黄骥 陆驹飞 王州飞 张红生《遗传学报》,2006年第33卷第5期
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戊糖磷酸途径是高等植物中重要的代谢途径，主要生理功能是产生NADPH以及供核酸代谢的磷酸戊糖。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PDH）是戊糖磷酸途径的关键酶，广泛存在于高等植物细胞的细胞质和质体中。木研究首次从水稻（Oryza sativa L.）幼苗中分离了核编码的质体G6PDH基因OsG6PDH2，序列分析表明OsG6PDH2编码一个具有588个氨基酸残基的多肽，等电点为8．5，分子量66kDa。OsG6PDH2的N端有1个70个氨基酸的信号肽，推测的裂解位点为Gly55和Val56，表明OsG6PDH2编码产物可能定位于质体。多序列比较的结果表明OsG6PDH2与拟南芥、烟草、马铃薯质体G6PDH的一致性分别达81％、87％、83％。进化关系说明水稻OsG6PDH2与拟南芥（AtG6PDH3）、马铃薯（StG6PDH1）处于高等植物P2型质体G6PDH分支上，暗示了OsG6PDH2可能是一个P2型的质体蛋白。Matinspector程序分析表明，OsG6PDH2在起始密码子上游含有一个bZIP转录因子识别位点、一个ABA应答元件、一个CRT／DRE元件和1个W-box元件。半定量RT-PCR分析表明，OsG6PDH2在水稻根、茎、叶和幼穗组织中都呈低丰度组成型表达，在根部表达较高，在水稻幼苗中的表达显著受暗处理的诱导。将OsG6PDH2的完整开放阅读框构建到大肠杆菌表达载体pET30a（＋）中，pET30a（＋）-OsG6PDH2在大肠杆菌中得到了有效表达。酶活性测定证明，OsG6PDH2的编码产物具有葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的功能。
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17.
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拟南芥IQM2 cDNA 的克隆与生物信息学分析
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陈羽中 周玉萍 叶蕙 桂林 郭培国 田长恩《武汉植物学研究》,2010年第28卷第3期
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拟南芥IQM2由At3g13600编码,是IQM家族的第二个成员,但在各种分子生物学相关的文献和数据库中都找不到其cDNA序列。本研究采用RACE和RT-PCR技术,克隆得到拟南芥IQM2基因的全长cDNA序列。该cDNA长2245 bp,其开放阅读框长1818 bp,编码1个由605个氨基酸残基组成的多肽链。生物信息学分析表明,IQM2蛋白含有一个IQ基序,属于钙不依赖性钙调素结合蛋白;其N端与豌豆重金属诱导蛋白6（HMIP6）有较高的同源性,而IQ基序则分布在HMIP6结构域内部;其C端与栝楼天花粉蛋白（trichosanthin）N端具有较高的同源性。
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18.
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植物同源结构域指蛋白在拟南芥等十字花科植物春化作用途径中的功能 被引次数：1
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胡功铃 陈国平 胡宗利 顾峰 李勇《生物工程学报》,2010年第26卷第1期
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春化低温处理可以使拟南芥等十字花科植物提前开花，该过程中涉及到一个重要的植物同源结构域指 (PHD-finger) 蛋白VERNALIZATION INSENSITIVE 3(VIN3)。PHD-finger结构域是真核生物中一种进化保守的锌指结构域，通常参与蛋白质之间的相互作用，特别是对核小体组蛋白进行甲基化、乙酰化、磷酸化等修饰。在春化处理过程中，VIN3及其同源基因编码的蛋白都具有PHD-finger结构域，该结构域通过对开花抑制基因FLOWERING LOCUS C染色质组蛋白进行H3K9、H3K27甲基化、H3K9和H3K14去乙酰化等修饰，调节FLC染色质结构状态，使其从松弛状态转变为高度凝缩状态而关闭其功能，从而影响FLC转录活性进而促进开花。以下综述了拟南芥等十字花科植物春化作用途径中PHD-finger蛋白的功能，并且概述了春化作用机制。
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19.
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地中海富盐菌PhaE蛋白乙酰化修饰对其功能的影响
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姜雄健 王前 刘桂明 赵大贺 刘景芳 向华《微生物学报》,2017年第57卷第11期
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[目的]研究地中海富盐菌PHA合酶（PhaEC）中PhaE亚基乙酰化修饰对其功能的影响，探讨乙酰化修饰对菌体生理代谢的调控作用。[方法]蔗糖密度梯度离心收集PHA颗粒，质谱鉴定颗粒结合蛋白PhaE的乙酰化位点。将乙酰化位点（赖氨酸，K）分别突变为精氨酸（R）（模拟去乙酰化）或谷氨酰胺（Q）（模拟乙酰化），利用同源双交换原理，将突变后的基因原位敲入基因组。以野生型为对照，检测突变对菌体生长、葡萄糖消耗和PHA合成能力的影响。利用Western blot检测PHA颗粒上PhaE的含量，进一步分析乙酰化修饰对蛋白功能的影响。[结果]在PhaE蛋白105位和170位赖氨酸（K）2个位点检测到乙酰化修饰。利用遗传操作系统将突变的基因原位敲入，共得到6种突变株。发酵结果表明，任何一种单突变对菌体生长及PHA合成的影响均不明显。但当2个位点同时突变成精氨酸（K105R/K170R）时，突变株生长及合成PHA的能力均受到明显抑制，2个位点同时突变成谷氨酰胺（K105Q/K170Q）则无明显影响。进一步的Western blot结果表明，突变成精氨酸的双突变株的PHA颗粒上，PhaE蛋白的含量相较于野生型约降低了一半。[结论]PhaE蛋白的去乙酰化能够导致菌株利用葡萄糖合成PHA的能力显著降低，其可能原因是降低了PhaE与PHA颗粒或PHA颗粒上PhaC的结合能力，从而降低了PhaEC合酶的活性。
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20.
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CHD4 在染色体重塑中的作用
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徐涛 万传君 王建校 李珊珊 顾永清《现代生物医学进展》,2014年第7期
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染色质作为真核细胞遗传信息，体内外各种因素的作用致使不断的产生损伤，但是细胞仍能保持正常的生长、分裂和繁殖，这与基因组稳定性和完整性保持，并且通过自身的损伤修复有着密切的联系。ATP依赖的染色质重塑是染色质重塑的最重要的方式之一，主要是利用ATP水解释放的能量，将凝聚的异染色质打开，协调损伤修复蛋白与DNA损伤位点的作用，通过对组蛋白的共价键修饰或ATP依赖的染色质重塑复合物开启了DNA的损伤修复的大门。CHD4/Mi．2B的类SW12/SNF2ATP酶/解螺旋酶域结构域保守性最强，这一结构域存在与多种依赖于ATP的核小体重构复合物。Mi-2蛋白复合物称为核小体重塑及去乙酰化酶NuRd（nucleoside remodeling and deacetylase，NuRD），是个多亚基蛋白复合物，Mi213/CHD4是该复合物的核心成员。近来的研究发现，CHD4具有染色质重塑功能，并且参与DNA损伤修复的调控。CHD4羧基端的PHD通过乙酰化或甲基化识别组蛋白H3氨基端Lys9（H3K9ac和H3K9me），并且通过Lys4甲基4J6（H3K4me）或A1a1乙酰化（H3ALac）抑制与H3、H4的结合，为染色质重塑提供了保障。Mi-213/CHD4参与DNA损伤反应，定位于DNA损伤v．H2AX的foci。沉默Mi-213/CHD4基因，细胞自发性DNA损伤增多和辐射敏感性增强。表明CHD4在染色质重塑中具有重要的作用。
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