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一种简单高效的食用真菌总RNA提取方法 总被引:5,自引:0,他引:5
以金针菇为材料,建立了一种适合于富含RNase、多酚、多糖和糖蛋白的食用真菌RNA的提取方法,此方法在高浓度变性剂存在的条件下2次用苯酚-氯仿-异戊醇进行抽提去除DNA、蛋白质,并用异丙醇和乙酸钠选择性沉淀RNA、去除多糖,得到完整、均一的RNA样品。
Abstract:With Flammulina velutipes material,an improved method was developed for extracting total RNA from domestic fungus that are rich in RNase,polyphenols,polymeric carbohydrates and proteoglycans..Phenol-chloroform-isoamyl alcohol were used twice to clear DNA and protein under higher concentration of denaturing solution and isopentanol,sodium acetate were used to precipitate RNA selectively.Pure and intact RNA can be effectively prepared by this method. 相似文献
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一种高效经济的高质量植物RNA提取方法 总被引:28,自引:1,他引:28
建立了一种高效经济的植物RNA提取方法.在提取缓冲液中加入蔗糖、氯化钾和镁离子以提供对RNA分子的保护.破碎后的细胞于提取缓冲液中裂解后,用酚/氯仿变性并去除内源RNA酶和其他蛋白质,而后用pH 5.6 的NaAc沉淀RNA.用该方法提取RNA的得率较高,经电泳检测,RNA的完整性很好.RNA印迹分析和RT-PCR也都得到很好的结果.该方法还使实验成本大大降低. 相似文献
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一种简单有效的植物RNA提取方法 总被引:25,自引:0,他引:25
在提取缓冲液中加入皂土有效地去除了蛋白质并抑制RNAse,建立了一种高效的植物RNA提取方法。以麻疯树幼叶为材料,分别用TRIZOL,异硫氰酸胍法,SDS-KAc法和新创皂土法提取总RNA进行比较和验证,琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱分析结果表明,只有皂土法能提出质量高,完整性好的RNA。进一步以皂土法提取的18S rRNA为模板的RT-PCR结果分析表明, 用该法提取的RNA 能用于分子克隆与基因表达分析等后继分子生物学实验。该方法简便,快速,不失为一种经济高效的RNA提取方法。 相似文献
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改良尿素-氯化锂方法提取成熟小麦种子总RNA 总被引:22,自引:0,他引:22
为了分离提取成熟小麦种子总RNA,去除多糖等杂质的严重干扰,本实验对尿素氯化锂分离RNA的方法做了三个方面的改进:一、去除成熟种子的胚(含大量麦胚凝集素等糖蛋白),发现裂解物的黏稠度明显下降;二、在裂解粗提物中加入CTAB至终浓度为02%,可去除大部分多糖;三、异丙醇沉淀RNA之后,充分溶解,离心去除残留的不溶性多糖等杂质。结果表明:所提取的成熟小麦种子RNA的纯度和产率都有明显提高 。 相似文献
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用低浓度硫氰酸胍提取高质量植物RNA 总被引:7,自引:0,他引:7
目前分离RNA的方法很多, 但大多是基于动物材料建立的方法, 而针对植物材料的方法并不多见. 建立了一种从植物材料中分离高质量RNA的硫氰酸胍/氯化锂/热酚法. 与其他硫氰酸胍的方法相比, 该方法所用硫氰酸胍的浓度仅为现有方法的1/40 (0.1 mol/L),降低了实验成本, 且所得RNA质量令人满意. 用该方法分离的RNA在琼脂糖凝胶电泳上可清晰分出4条核糖体RNA (rRNA)带; 用此RNA进行RNA印迹或分离mRNA进行体外翻译试验, 均获得很好效果. 相似文献
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一种提取高质量红树植物总RNA的有效方法 总被引:2,自引:0,他引:2
为了从富含单宁和多糖的红树植物中获得高质量的RNA,在总结及改良前人工作的基础上,优化了提取缓冲液的条件,采用碱性条件、PVP及β-巯基乙醇抑制单宁的氧化;利用RNA与单宁、多糖在不同浓度的2-丁氧乙醇中溶解度不同的特性来去除单宁和多糖;同时利用LiCl来选择性沉淀RNA,获纯度较高的RNA可以直接用于cDNA合成、cDNA文库的构建以及RACE等分子生物学操作。 相似文献
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一种适用于RT-PCR的杉树类植物中总RNA提取的方法 总被引:10,自引:2,他引:8
杉树类植物含大量的多糖、多酚类物质,这使得此植物的总RNA提取较困难。研究通过比较几种有代表性的提取植物总RNA的方法,建立了一种酸酚法和PEG8000沉淀法相结合的改良的CTAB法。此方法操作简单,使用的试剂均为常规试剂,成本低,能够有效去除植物组织中多糖和多酚类等次生物质,从而得到高质量的RNA。使用这种改良的方法制备的总RNA产物对P450基因成功地进行了反转录聚合酶链式反应(reverse transeriptase-polymerase chain reaction,RT—PCR),证明此方法是一种适用于RT—PCR的杉树类植物组织中总RNA提取的方法。 相似文献
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一种适用范围广的总RNA提取方法 总被引:23,自引:0,他引:23
介绍一种RNA提取方法,该方法以SDS、氯仿和Tris苯酚为主要提取试剂,以LiCl和乙醇为RNA沉淀试剂。分别以柽柳(木本植物)、星星草(草本植物)、天牛(昆虫)、酿酒酵母和白腐菌(真菌)为RNA提取材料,用该方法成功地提取出了它们的总RNA。获得的RNA条带清晰,A260/A280 在1.8以上。通过对LiCl和乙醇沉淀RNA的效果分析表明,该方法可在10 min内完全沉淀RNA,同时也可以同时获得纯度较高的DNA。提取的RNA质量可满足cDNA文库构建,基因芯片探针标定和RT-PCR等对RNA质量要求较高的分子生物学操作,说明这是一种应用范围广的RNA提取方法。 相似文献
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目的:建立一种从石蜡包埋组织提取高质量RNA的简便、经济的方法。方法:运用TRIzol法和改进的AGPC(酸-异硫氰酸胍-苯酚-氯仿)法等2种提取方法,从50例石蜡包埋组织中提取RNA,用紫外分光光度仪测定RNA的产率和纯度;用管家基因β-肌动蛋白做RT-PCR,检测RNA的质量。结果:TRIzol法提取RNA的成功率为96%(48/50),AGPC法为94%(47/50),2种方法所得RNA的吸光度值及得率在统计学上均无明显差异。结论:AGPC法和TRIzol法的提取效率相似,且提取费用只有TRIzol法的一半左右,是一种简便、经济、适合大量提取石蜡包埋组织中的RNA的方法,可用于临床。 相似文献
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石斛总RNA提取方法的研究 总被引:3,自引:2,他引:1
采用TRIZOL法、异硫氰酸胍法、Tris-硼酸法和改良的RNA提取方法提取石斛的总RNA,并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取的RNA样品的品质。研究结果表明:改良的RNA提取方法提取的RNA具有28S rRNA和18S rRNA两条清晰的条带,且无降解。OD260nm/OD280nm接近2.0,具有较高的纯度。其它三种方法获得的RNA品质较差,有降解和弥散现象。将改良的RNA提取方法提取的RNA逆转录成cDNA,经RAPD扩增,出现清晰的条带,进一步证明改良的RNA提取方法提取的RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求。 相似文献
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从血液中提取总RNA的一种快速高效方法 总被引:6,自引:0,他引:6
血液中含有大量的RNA酶 ,可引起RNA的降解 .防止RNA酶的降解 ,是保证所得RNA片段完整的关键 .目前提取RNA的方法较多 ,但有些方法尚不能完全防止RNA降解 .将TRIZOL方法稍加改进 ,将TRIZOL与异硫氰酸胍联用提取血液淋巴细胞总RNA .琼脂糖凝胶电泳结果表明 ,其 2 8SRNA与 18SRNA的比值为 2∶1,优于单独使用其中任何一种试剂者 .此方法同样适用于从其它细胞中提取RNA . 相似文献
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提取高质量的RNA是从基因表达水平上研究油菜种子和种皮发育的必要条件。现有方法因为油菜种子脂肪、多酚和多糖,难以快速获得完整、高纯度的油菜种子总RNA。本试验针对油菜种子和种皮特点,利用苯酚-氯仿抽提后用无水乙醇沉淀RNA,建立了在油菜种子和种皮中快速提取高质量总RNA的提取方法,电泳分析表明28S rRNA亮度约为18S rRNA的2倍;紫外分光光度计检测A260/A280介于1.8~2.0之间。用该法分离的RNA,已成功用于RT-PCR、Northern blot分析和基因全长的克隆等分子生物学研究。 相似文献