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1.  用显微切割技术和催化信号扩增法检测何杰金病瘤细胞(H/RS)中的 …  
   闫庆国 朱德生《病毒学报》,2000年第16卷第4期
   为明确何杰金病(Hodgkin’s disease,HD)瘤细胞中是否存在人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染,采用显微切割技术结合PCR方法检测HD组织及其瘤细胞Hodgkin/Reed-Sternberg(H/RS)中的HCMV核酸;采用免疫组织化学催化信号扩增(catalysed signal amplification,CSA)法检测HD中HCMV的立即    

2.  肾移植术后巨细胞病毒pp65检测的临床意义  
   官琳妹  蔡鹏  汪艳《中国微生态学杂志》,2012年第24卷第2期
   目的探讨肾移植受者术后,巨细胞病毒被膜磷蛋白pp65的检测在活动性巨细胞病毒感染中的意义。方法用间接免疫荧光法检测肾移植受者术后HCMV-pp65,同时用酶联免疫捕获法检测HCMV-IgM抗体,共采集91份血标本。结果 91份血标本中,HCMV-pp65阳性24份(26.4%),HCMV-IgM抗体阳性4份(4.4%),在24例HC-MV-pp65抗原血症阳性的患者中,有20例出现HCMV感染症状及HCMV病。结论 HCMV-pp65在活动性巨细胞病毒感染的检测中具有早期、准确的优点,可辅助临床对HCMV感染进行早期诊断与治疗。    

3.  激光显微切割分选少量胃癌细胞中PSCA基因的SNP分析  
   杨祎  郭妍  赵小东  刘炳亚  邵志峰《中国生物化学与分子生物学报》,2012年第6期
   随着基因组关联分析方法的应用,越来越多与胃癌相关的易感基因被发现.易感基因的多态性检测已逐步进入胃癌临床诊断和研究.然而,利用少量胃粘膜细胞开展单核苷酸多态性(SNP)分析对胃癌进行早期诊断常遇下述困难,一是少量胃癌细胞混杂在多种细胞中,异常信号常易被淹没,二是细胞量极少,因此获得的基因组DNA量微,进行多位点或全基因组分析存在困难.本文利用激光显微切割技术分选少量胃癌细胞,结合全基因组放大技术,进行胃癌相关的前列腺干细胞抗原基因(PSCA)的SNP分析.通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和克隆测序方法分析,在分选的胃癌细胞中检测到PSCA的rs2976392位点胃癌相关的"A"等位与rs2294008位点胃癌相关的"T"等位.研究结果表明,所采用的全基因组放大方法保真性高,经过分选的胃癌细胞中SNP位点的检测灵敏度和可靠性大为提高.所建立的少量细胞基因多位点检测方法将同样应用于其它肿瘤和组织的少量细胞研究中,全基因组放大产物也可进行高通量的基因芯片和第二代测序研究.    

4.  不同方法检测淋巴瘤病理标本EB病毒的比较  
   冯晓文  周韧《上海生物医学工程》,2004年第25卷第1期
   目的 :探讨用不同方法检测淋巴瘤标本中EB病毒LMP 1的表达率以选择一种敏感、可靠的检测手段。方法 :运用SP法、CSA法检测EB病毒LMP 1在Raji细胞株细胞学涂片、12 3例淋巴瘤 (其中 10 4例NHL ,19例HL)切片中的表达 ,部分病例结合PCR加以验证。结果 :(1)细胞学涂片SP阳性细胞率为 70±10 % ,CSA法 10 0 %阳性。 (2 )HL中 ,SP法检测LMP 1阳性率为 6 / 19(32 % ) ,CSA法阳性率 8/ 19(4 2 % ) ,PCR阳性率为 11/ 19(5 8% )。 (3)非霍奇金淋巴瘤 (NHL)中SP法阳性率为 3/ 10 4 (其中B NHL 1/ 79,1 2 6 % ,T NHL2 / 2 5 ,8% )。CSA法阳性率为 9/ 10 4 ,其中B NHL4 / 79(5 % ) ,T NHL 5 / 2 5 (2 0 % ) ,ITCL达 2 / 10 (2 0 % )。结论 :SP法在检测低丰度抗原时漏检率较高 ,CSA法为一种较敏感、可靠的检测手段 ,结合PCR方法可有效检测低丰度抗原。    

5.  肿瘤患者化疗后人巨细胞病毒活动性感染检测  
   陈雷  刘江秋  李忠义《微生物学杂志》,2007年第27卷第1期
   探讨肿瘤患者化疗后人巨细胞病毒感染检测方法的应用价值。使用免疫组化法、酶联免疫吸附试验检测IgG/M抗体,以及实时荧光定量(FQ-PCR)检测HCMV DNA。47份全血标本中抗原阳性率为48.9%,平均抗原阳性细胞数7.9±8.1(1-65)/5×104WBC,HCMV DNA阳性率19.1%(10/47),HCMV DNA含量均值为6.320×105copies,白细胞HCMV-DNA阳性率51%(25/47),HCMV DNA含量均值为3.830×107 copies,HCMV pp65抗原阳性率为48.9%(23/47),IgG抗体均阳性,IgM抗体阳性率为23.4%(12/47),以PP65抗原阳性为对照,IgM抗体检测的敏感率仅为49.3%。在连续动态检测HCMV多种指标时,结合DNA及抗原动态检测具有更高临床应用价值。    

6.  Notch1在外周T细胞淋巴瘤中的表达及基因突变及其与临床生存期的相关性研究  
   张蓓  秦炜炜  陈仁安  兰淼  姚丽  王萌  肖芳  王颖  刘利《现代生物医学进展》,2012年第12卷第8期
   目的:检测活化型notch1(NICD)蛋白在外周T细胞淋巴瘤组织中的表达情况,探讨活化型notch1对外周T细胞淋巴瘤患者生存时间的影响,分析其与NOTCH1基因突变之间的关系。方法:免疫组织化学法检测20例外周T细胞淋巴瘤(13例PTCLNOS、7例ALCL)及5例反应性增生患者病变组织活化型notch 1(NICD)抗体的表达,PCR-SSCP及基因测序法分析NOTCH1基因HD-N、HD-C、TAD、PEST片段的突变情况。结果:20例外周T细胞淋巴瘤NICD蛋白均为阳性,5例慢性淋巴结炎均为阴性,其中PTCL NOS组织较ALCL高表达NICD蛋白。淋巴瘤患者HD-N、HD-C、PEST片段存在基因点突变。结论:NOTCH1基因点突变可能为异常表达NICD的原因之一,异常表达的NICD影响外周T细胞淋巴瘤的生存时间。    

7.  GSTP1在先天性巨结肠症中蛋白质表达谱、甲基化检测与表达分析  
   高红  伍美  张志波  姜中佳  苏真伟  黄英《国外医学:分子生物学分册》,2010年第3期
   目的 利用双向凝胶电泳-基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术进行先天性巨结肠症(hirschsprung disease,HD)中蛋白质表达谱的研究;寻找HD中的生物标志物,为临床HD的早期无创性诊断提供依据.方法 分别提取20例HD患者配对狭窄段及正常段肠管组织的总蛋白质,进行双向凝胶电泳、银染,两组凝胶图像差异分析,得到差异蛋白质.对目的谷胱苷肽-S-转移酶1(glutathione S-transferase pi,GSTP1)蛋白质进行MALDI-TOF-MS质谱分析.运用甲基化特异性聚合酶链反应方法检测HD中GSTP1基因启动子区5′端 CpG 岛甲基化程度与表达.采用荧光实时定量PCR方法检测HD中GSTP1基因的mRNA 转录水平.结果 获得了分辨率较高的HD狭窄段及正常段肠管组织双向凝胶电泳图谱;得到阳性结果的差异蛋白质谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione S-transferase,GST).MSP 检测48 例HD,其中狭窄段肠管组织GSTP1基因高甲基化41例;而正常段肠管组织GSTP1基因甲基化仅7例.HD狭窄段肠管组织GSTP1基因mRNA表达低于正常段肠管组织(P〈0.05).结论 利用双向凝胶电泳-MALDI-TOF-MS质谱技术检测HD组织差异蛋白质所获得的GSTP1蛋白可为寻找HD早期诊断的分子标记物提供理论依据;GSTP1基因异常甲基化、表达与HD的发生发展相关.    

8.  肝移植后播散性隐球菌病1例及其实验研究  被引次数:1
   赵作涛  纪黎明  王爱平  王晓阳  陈伟  万哲  王晓红  武玲慎  李若瑜《中国真菌学杂志》,2008年第3卷第5期
   目的播散性隐球菌病临床及实验研究。方法患者女,47岁,肝移植术后2 d,面部、肩部、四肢皮肤出现多发溃疡,伴昏迷。通过脑计算机断层扫描、皮损组织病理检查、PAS染色、皮损组织真菌培养及激光俘获显微切割结合PCR扩增序列分析确诊,并对获得菌株进行尿素酶试验、API试验、PCR扩增测序等实验研究。结果皮损组织病理可见大量圆形和椭圆形菌体,PAS染色阳性。血液和脑脊液真菌镜检均为阴性。皮损组织真菌培养可见酵母样菌落生长,菌株尿素酶试验阳性,API试验鉴定为新生隐球菌。ITS区序列分析鉴定为新生隐球菌grub ii变种。激光俘获显微切割结合PCR扩增,序列分析与培养获得的菌株直接PCR扩增后序列分析结果一致。脑脊液特异性隐球菌抗原(++),血液特异性隐球菌抗原(++++)。脑CT显示为多发结节灶。依据临床及实验室检查确诊为播散性隐球菌病,致病菌为新生隐球菌grubii变种。结论通过对该病例的深入研究,为临床明确诊断播散性隐球菌病奠定基础,确立了显微切割技术在皮肤真菌感染中的应用价值。    

9.  间接免疫荧光用于病毒性下呼吸道感染多病原的鉴别  
   丘福禧 张浩燕 郑企静 邵兰 王秀云 李桂英 索玉琴《微生物学报》,1979年第19卷第4期
   在50例病毒性肺炎幼儿的鼻咽部剥落细胞内,检测出24例有3或7型腺痫毒抗原(48%),在其中2例的肺组织内也检测出同样病毒的抗原,并分离出7型腺病毒;5例有呼吸道融合细胞(Rs)病毒抗原(10%);3例有I、lI或III型副流行性感冒(副流感)病毒抗原(6%),其中l例的肺组织内也检测出同样病毒的抗原,井分离出1型副流感病毒。在7例毛细支气管炎婴儿的鼻咽部剥落细胞内,检测出3例有3或7型腺病毒抗原,一例有Rs病毒抗原。在一例胸膜炎儿童的鼻咽部剥落细胞内,检测出副流感病毒抗原。在11例非呼吸道感染的儿童中,检测这三种病毒抗原的结果都是阴性。    

10.  检测人巨细胞病毒的免疫PCR技术的建立  
   郝好杰  谷志远  李琦《生物技术通讯》,1997年第Z1期
   人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)是一种广泛传播的病毒,初次感染后,病毒潜伏存在于体内,但可被激活出现复发感染。诊断HCMV近期活动性感染,主要依靠实验室检测。传统的病毒分离、血清中抗CMV-IgM及CMV抗原等的检测,敏感性差,易漏诊;核酸杂交、PCR等方法虽然敏感性高,但既可检出复制的病毒DNA,也可检出潜伏、整合    

11.  乙型肝炎病毒表面抗原S和前S1融合基因转基因细胞系的建立与细胞性质的研究  被引次数:4
   田淑芳  刘文军  杨芙蓉  宗芳  李军  阮薇琴  陈红  王文  王秀平  张陵林  阮力《病毒学报》,2000年第16卷第4期
   构建了pCHBSSIG质料,其特点是CMV立即早期启动子调控乙型肝炎(乙肝)表面抗原S+前S1融合基因在前,SV40早期启动子调控GS扩增基因在后,此质粒转化到CHO-dhfr^-细胞中,经克隆加MSX及MTX筛选、扩增,建立了7个高效表达乙肝表达抗原S及前S1融合蛋白细胞系GdSS1,并检测了其中GdSS1-18细胞系的生物学特性,结果表明:未发现微生物污染,无致瘤性、遗传稳定,电镜下可观察到2    

12.  马立克氏病血清I型致瘤株病毒感染的早期检测  
   李运敏  黄兵  蔡宝祥  陈溥言《病毒学报》,2001年第17卷第1期
   马立克氏病 (MD)是养禽业最重要的疫病之一 ,一直缺少有效的早期诊断方法。根据血清I型马立克氏病毒(MDV1)meq基因的核酸序列设计了一对寡苷酸核引物 ,分别对MDV1致瘤株 (京 - 1株 )、非致瘤株 (MD11/ 75C株、CV1988株 )、MDV2 (SB 1株 )、HVT(Fc 12 6株 )的核酸进行扩增。结果表明 :京 - 1株扩增到约 1 15kb核酸片段 ,MD11/ 75C株和CVI988株扩增到约 1 0kb核酸片段 ,而SB 1株、Fc 12 6株没得到任何扩增产物。PCR产物Dotblot结果显示 ,京 - 1株、MD11/ 75C株和CVI988株的扩增产物都与Digoxigenin标记的meq基因探针杂交 ,说明都是特异性的扩增产物。对MSB1细胞DNA及MDV感染鸡的血液及肝、肾肿瘤等DNA扩增都得到 1 15kb条带。将京 - 1株和CVI988株感染的细胞DNA混合再扩增 ,同时得到 1 15kb和 1 0kb的核酸条带 ,所以根据扩增产物大小可以区别致瘤株京 - 1株及非致瘤株CV1988株 ,这表示可从CVI988株病毒免疫鸡体内检测到MDV强毒 ,适于早期确诊强毒感染。    

13.  HCMV感染对胶质瘤细胞U87自噬的影响  
   宋静宜  钱冬萌  王斌  黄睿  胡明  华晓敏  朱秀丽  陈豪  宋旭霞《微生物学杂志》,2015年第1期
   研究人巨细胞病毒(HCMV)感染对神经胶质瘤U87细胞自噬的影响。通过观察微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬相关基因Beclin1及其蛋白表达的变化,从而探讨HCMV与神经胶质瘤发生、发展的关系及意义。用HCMV AD169(MOI=5)感染神经胶质瘤U87细胞,同时将未感染HCMV的U87细胞作为对照组。分别在6、12、24、48 h用RT-PCR检测Beclin1的表达,Western-blot和免疫荧光检测Beclin1和LC3编码蛋白的表达,最后用CCK-8检测细胞的增殖活性。结果显示,HCMV感染的U87细胞LC3-II蛋白表达水平逐渐下降(P<0.05);同时,HCMV感染的U87细胞Beclin1基因及蛋白的表达水平也逐渐下降(P<0.01),且HCMV感染U87细胞增殖显著(P<0.01)。以上结果表明,HCMV感染抑制胶质瘤U87细胞自噬,并会引起Beclin1表达水平下调,进而导致胶质瘤细胞增殖。    

14.  HCMV感染及C-Jun表达与结直肠腺癌相关性研究  
   王延雷  张建立  高军  王政坤  邱志刚  谭晓杰《现代生物医学进展》,2013年第13卷第15期
   目的:探讨人巨细胞病毒(humancytomegalovirus,HCMV)感染在结直肠癌发生、发展过程中的作用及其可能的作用机制.方法:选择84例结直肠腺癌患者的腺癌组织及自身癌旁正常组织,应用RT-PCR技术检测组织中即刻早期基因2(immediate-early gene2,IE2)mRNA的阳性率来反映HCMV的感染情况,免疫组化技术检测凋亡相关基因C-Jun的表达情况.结果:HCMV IE2基因在结直肠腺癌组织中的阳性率高于癌旁组织(P<0.01);C-Jun基因在结直肠腺癌组织中表达的阳性率高于癌旁组织(P<0.01);HCMV感染与C-Jun基因在结直肠腺癌组织内的表达存在关联性.结论:HCMV感染在结直肠癌的发生、发展中具有一定作用,其作用机制可能与C-Jun基因的表达有关.    

15.  孕中期巨细胞病毒宫内感染与血Free-β-HCG水平的相关性研究  
   张立群  钱东萌  刘海婷  巩振华  王斌《现代生物医学进展》,2013年第13卷第13期
   目的:通过检测孕中期妇女人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染、宫内感染以及血Free-β-HCG水平,分析血Free-β-HCG水平与HCMV宫内感染的相关性,初步探讨其可能影响机制.方法:通过酶免法测孕妇血HCMV-IgM和定荧光定量PCR对孕中期妇女血清和羊水中HCMV-DNA的检测以及DILFIA法(时间分辨免疫荧光法)定量检测孕中期妊娠妇女血Free-β-HCG的含量,研究HCMV感染状况与Free-β-HCG之间的相关性,探讨HCMV对母血Free-β-HCG水平的影响.结果:718例样本中共检出HCMV-IgM阳性和(或)HCMV-DNA阳性者共43例并进一步行产前诊断羊水HCMV-DNA阳性14例.孕中期HCMV活动性感染率为5.98%,HCMV宫内感染率为2.22%.孕中期感染组Free-β-HCG含量:7.32± 2.25 ng/ml,非感染组:8.47± 3.17 ng/ml,对照组:10.10± 3.67 ng/ml.结论:HCMV宫内感染组比非感染组孕中期外周血Free-β-hcG的测定水平降低,两者结果之间的差异具有统计学意义.HCMV可通过损伤胎盘绒毛滋养层细胞,使Free-β-hcG的分泌减少.    

16.  改良手工显微切割法获取特定细胞提取高质量RNA  
   周广彪  胡盛平  刘静文  张可浩  官兵  吴名耀  沈忠英  杨捷生《中国生物化学与分子生物学报》,2006年第22卷第3期
    探讨显微切割过程中有效保持RNA完整性的组织固定方法,建立一种简易的手工显微切割法.应用自制“T形板”辅助冰冻切片,100%无水乙醇一次性脱水固定,“排除切割法”获取目的细胞,用TRIzol提取RNA,琼脂糖凝胶电泳和RT-PCR分析RNA质量.“一步法”固定可长时间保存RNA的完整性;从食管癌标本5个特定阶段的细胞中提取的RNA,经电泳和RT-PCR分析均具有较高的质量.无水乙醇“一步法”固定,在显微切割的过程中可有效保持RNA的完整性;T形板和“排除切割法”简化了手工显微切割的操作,提取的RNA质、量均可满足后续分子水平研究的需要.    

17.  人巨细胞病毒通过STAT3上调胶质瘤中endocan表达  
   王士杰  范东瀛  罗乔荔  邢燕  王一松  安静《微生物与感染》,2016年第6期
   本研究旨在探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)和内皮细胞特异性分子1(endocan)在胶质瘤发生发展中的作用及机制.利用HCMV感染人脑胶质瘤U87细胞,检测感染后第1、2、4天信号转导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)和endocan的表达变化,并分析HCMV、STAT3和endocan三者之间的可能关联.结果显示,HCMV感染的U87细胞中pSTAT3和endocan表达上调,并随感染时间延长而逐渐升高;用RNAi干扰STAT3基因表达,endocan表达量下降;利用抗病毒药物更昔洛韦抑制HCMV复制后,pSTAT3表达量下降,endocan表达量随之下降.进一步利用免疫组织化学法检测79例脑胶质瘤患者和8例对照者脑组织中pSTAT3表达情况,发现pSTAT3在胶质瘤组织中表达上调;与低级别胶质瘤相比,高级别胶质瘤中pSTAT3染色强度较高.结果提示,HCMV感染可能通过STAT3信号通路上调endocan表达,从而参与胶质瘤的进展.    

18.  芸香甙对环孢素A肾毒性防护作用的实验研究  
   邱伟彬  陈仙  张彪  丁军《现代生物医学进展》,2010年第10卷第13期
   目的:探讨芸香甙(Rutoside,Ru)对环孢素A(cyciosporine A,CsA)肾毒性防护作用及其机制.方法:取雄性SD大鼠20只,随机分为4组(n=5):正常对照组、Ru组、CsA模型组、CsA+Ru治疗组.CsA模型组和CsA+Ru治疗组均用CsA 50mg/kg灌胃,Ru组与CsA+Ru组分别腹腔注射NS 10ml/kg+Ru 20mg/kg.以上各组每天给药一次,连续给药15天.各组大鼠于给药第14天后置代谢笼中收集24h尿液,测定尿Cr、尿蛋白含量.末次给药5个小时后,取血检测血清Cr、BUN含量和肾组织中丙二醛(MDA)含量、内皮素(ET)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;肾组织用10%甲醛溶液固定,石蜡包埋,HE染色,光镜观察肾组织其形态学变化.结果:Ru对CsA所致的尿蛋白、BUN、Cr、肾组织MDA、ET含量的升高均有显著降低作用,并明显增加肾组织SOD活性,对CsA引起的肾小球与肾小管的病理性损伤有较好的保护作用.结论:Ru对CsA所致的肾脏毒性具有明显的保护作用.    

19.  巨细胞病毒参与动脉粥样硬化致病机制研究新进展  
   李婉珍  王明丽  赵俊《微生物与感染》,2017年第12卷第1期
   人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)是β疱疹病毒家族成员,在人群中感染率极高,全球成人中血清阳性率可达40%~100%.研究表明,HCMV感染患者更易患心脑血管疾病.动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心血管系统疾病中危害健康的一种常见病.大量流行病学研究证明,在AS组织中可检测出较高的HCMV DNA和抗原、抗体,同时回顾性研究发现AS患者多有HCMV暴露因素,提示HCMV可能参与AS致病.本文就HCMV致AS的依据和机制进行综述,为研究HCMV在AS病理过程中的作用提供全新视角.    

20.  人巨细胞病毒pp65特异性抗体测定在原发感染诊断中的应用  
   刘倩  陈敬贤  王明丽《微生物与感染》,2007年第2卷第3期
   目的 通过测定患者单份血清人巨细胞病毒(HCMV)pp65特异性IgM抗体和IgG亲和指数(AI),建立HCMV原发感染的临床判断标准.方法 从临床收集40份患儿血清和尿标本,以本室自制的pp65为抗原,运用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清标本中HCMV pp65特异性IgM抗体;同时通过尿素变性实验,以6M尿素作为温和蛋白变性剂,测定HCMVpp65 IgG AI.尿标本常规处理后接种人胚成纤维(HF)细胞进行病毒分离,观察HCMV特异性细胞病变效应(CPE),聚合酶链反应(PCR)试验检测细胞培养物UL83基因,间接免疫荧光试验检测细胞玻片HCMV抗原.并将病毒分离结果 同血清学方法 进行比较.结果 40例标本中,IgM阳性13例,IgG阳性30例,其中,仅IgM阳性4例,病毒分离结果 亦为阳性,可诊断为原发感染;30例IgG阳性标本中,2种抗体均为阳性9例(A组),其中,5例AI<50﹪,病毒分离结果 均为阳性,判断为原发感染;1例AI在50﹪与60﹪之间,为可疑原发感染,需要进一步鉴定;3例AI>60﹪,判断为继发感染.IgG阳性21例(B组),其中仅3例(14.29﹪)AI<50﹪,但病毒分离结果 为阴性,提示患者不久前曾发生HCMV原发感染,特异性IgM抗体已经转阴,病毒进入潜伏状态;余18例患者AI均>60﹪,判断为继发感染;2种抗体均为阴性的标本有6例,病毒分离结果 亦为阴性,说明患者未被感染.统计学分析,A组与B组之间差异有统计学意义(P<0.05).血清学方法 与病毒分离比较,一致率为75.49﹪,该方法 灵敏度为100﹪,特异度为87.10﹪,准确度为90.00﹪.结论 以HCMV pp65重组蛋白为抗原检测特异性抗体以及相应IgG AI的ELISA,可快速诊断HCMV原发感染和继发感染;该方法 具有高度特异性与敏感性,操作简便,重复性好,具有良好的临床应用前景.    

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