通过农杆菌介导法将免防御麦NP—1基因导入毛白杨（P.tomentosa）

采用叶盘法将兔将御素ＮＰ－１基因导入毛白杨后,经ＰＣＲ分析、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测与筛获得了转基因植株,并经体外抑菌实验表明,转ＮＰ－１基因毛白杨植株组织提取物对某些微生物的生长具有明显的抑制作用。     

兔防御素NP-1基因在转基因番茄中表达的初步研究

兔防御素ＮＰ－１是α－防御素的一种,含３３个氨基酸残基。最初从兔子的多形核嗜中性细胞中分离出来。它对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、分枝杆菌、真菌、被膜病毒以及ＨＩＶ病毒都有不同程度的抑制作用。兔防御素ＮＰ－１所带阳离子较多,可抗不具代谢活性的靶细胞。实验中将兔防御素ＮＰ－１基因构建到植物表达载体中,通过根瘤农杆菌介导转入番茄,得到了转基因番茄植株。对转基因番茄植株进行了ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交、Ｎ     

利用椭圆小球藻硝酸还原酶缺失突变体为生物反应器表达兔防御素NP-1蛋白

利用转基因小球藻为生物反应器生产兔防御素NP-1蛋白具有重要的应用价值。本研究利用椭圆小球藻(Chlorella ellipsoidea)硝酸还原酶(nitrate reductase)缺失突变体为受体, 构建了包含NPTII基因和硝酸还原酶基因两个筛选标记的兔防御素蛋白表达载体, 采用电激法将目的基因转入椭圆小球藻硝酸还原酶缺失突变体nrm-4, 获得了正确表达防御素蛋白的转基因藻, 从而表明通过硝酸还原酶作为筛选标记基因并结合硝酸还原酶缺失突变体可作为较好的小球藻生物反应器生产模式。     

通过根瘤农杆菌介导法获得菊花转基因植株

以带叶茎段为外植体,通过根癌农杆菌介导法,将兔防御素NP－1基因导入菊花品种“001”中。经梯度卡那霉素（kanamycin,Km）筛选,获得了大量Km抗性植株,其中部分Km抗性植株经Southem杂交鉴定为转基因植株。从而成功地建立了菊花遗传转化系统,为菊花分子育种奠定了基础。     

通过农杆菌介导将番茄铁转运蛋白基因导入八棱海棠

用农杆菌介导法,成功地将番茄铁转运蛋白基因导入了苹果砧木八棱海棠.获得了19个卡那霉素抗性株系,其中有11个株系经PCR鉴定为阳性.Southern杂交结果显示:有9个转基因株系基因组中整合了完整的目的基因.选择其中含有单拷贝和3个拷贝目的基因的各一个株系进行水培试验,结果表明整合了单拷贝目的基因的转基因株系表现出较强的抗缺铁胁迫能力,5周后其植株的鲜重比对照高21%～34%.     

根癌农杆菌介导GUS基因对白桦转化的研究

本文报道了根癌农杆菌介导GUS基因转化白桦叶盘的研究方法,对转化过程中各种因素进行了全面探讨,结果表明:白桦叶盘对卡那霉素的敏感实验,得出最适筛选浓度为50mg/l;对头孢霉素和羧苄青霉素的抑菌实验,最适抑菌浓度为500mg/l;100μMAS的加入可将抗性不定芽的诱导率提高3倍;3~4d的预培是最适合叶盘转化的时间;10~20min是最适合叶盘浸染的时间;3~4d的共培养对于叶盘转化比较合理。在上述最适合的转化条件下,农杆菌介导的GUS基因对白桦叶盘的转化获得了抗性再生植株,转化率为2.8%。     

由根癌农杆菌介导向毛白杨导入激素合成基因建立遗传转化系统

用携带基因1,2的根癌农杆菌AG(84)转化毛白杨外植体,在无激素的MS0培养基上获得转化根。分离单根或切成根段在分化培养基上能分化芽而再生完整植株。由T－DNA上带有基因4的根癌农杆菌C58C1（PBZ6111）转化毛白杨外植体,在MS0培养基上能直接分化不定芽而再生植株．在转化中使用叶柄作外植体比使用叶片的转化率提高一倍以上。基因1,2引入毛白杨后,植株根系发达,生根率达100％。基因4引入毛白杨则使植株节间变短,植株矮化．纸电泳分析表明,带有基因1,2的转化植株能表达特异的农杆碱,带有基因4的转化植株能表达特异的胭脂碱。     

小麦中外源基因瞬间表达调控研究及兔防御素（NP—1）基因的转化

将不同５上游调控序列驱动下的ＧＵＳ基因用基因枪法导入小麦幼胚和胚性愈伤组织,通过组织化学分析法和荧光分析法对ＧＵＳ基因的表达进行定量检测,比较了几种烟草花叶病毒（ＴＭＶ）Ω增强子序列对小麦中外源基因瞬间表达的调控作用;然后将其中效率最高的玉米Ｕｂｉｌ启动子与兔防御素（ＮＰ－１）连接起来,并加上Ｎｏｓ终止子,构民ＮＰ－１基因小麦表达载体,并转化小麦幼胚,经ＰＣＲ－Ｓｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析,初步确     

兔防御素(MCP-1)cDNA的克隆与序列分析

从兔脾脏细胞中分离提取总RNA,经反转录PCP(RT-PCR)扩增出兔巨嗜细胞阳离子多肽(MCP-1)cDNA,插入经EcoRI和XbaI双酶切的pUC19中,构建了克隆质粒pUCDEF.进行了限制性酶切鉴定和序列分析,结果在扩增出的cDNA288个碱基中,在前片段中有一个碱基与发表的兔MCP-1cDNA序列不同,即第157位碱基由G变为A,导致编码的氨基酸由丙氨酸变为苏氨酸.该cDNA全长288bp,编码94个氨基酸,由编码信号肽,前片段及成熟肽片段的序列组成.     

转兔防御素基因小球藻异养培养的培养基优化研究

在氮源种类筛选的基础上,采用Plackett-Burman实验设计并结合单因素实验对转兔防御素基因小球藻异养培养的培养基进行了优化。实验结果表明,采用优化后的Knop异养培养基在250mL摇瓶中进行异养培养,藻细胞密度从优化前的1.5g/L提高到优化后的5.11g/L;摇瓶和5L生物反应器异养培养表明,Knop异养培养基中藻细胞浓度分别为优化前培养基的3.39倍和3.17倍,而兔防御素(NP-1)表达能力基本不变。     

高效烟草遗传转化体系的建立及甜蛋白基因的导入

以烟草无菌茁叶片为外植体,通过根癌农杆菌LBA4404介导法,将Thamnatin基因导人烟草中,经梯度卡那霉素(Kana-mycin,Km)筛选,获得可在含75mg／L、100mg／L Km选择生根培养基上再生的抗性植株,其中部分Km抗性植株经PCR检测为阳性,转化率为31．3％,初步鉴定已成功地建立了烟草遗传转化系统,为进一步探讨甜蛋白在植物中的转化和表达情况奠定基础。     

Transformation of Poplar (Populus)with tPA Gene

ＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＰｏｐｌａｒ（Ｐｏｐｕｌｕｓ）ｗｉｔｈｔＰＡＧｅｎｅＺＨＡＯＳｈｕ－ｈｕｉ（赵淑慧）;ＨＡＮＹｉ－ｎｏｎｇ（韩一侬）;ＬＩＬｉｎｇ（李玲）;ＨＡＮＹｉ－ｆａｎ（韩一凡）;ＸＵＥＧｕｏ－ｘｉｏｎｇ;（薛国雄）（Ｉｎｓｔｉ...     

农杆菌介导蜡质基因WIN1转化烟草的初步研究

WIN1与蜡质代谢过程中基因的表达相关,本研究首先从野生型拟南芥花蕾中提取总RNA扩增成SHN1/WIN1,以载体PBI121为基础构建植物表达载体PBI121-SHN1/WIN1,然后利用农杆菌介导法将目的基因WIN1导入烟草k326中,在不同阶段选择四种不同培养基进行培养,其中烟草叶盘共培养培养基T1为：MS+1 mg·L^-1 6-BA+0.1 mg·L^-1 NAA;烟草滤菌培养基T2为：MS+1 mg·L^-1 6-BA+0.1 mg·L^-1 NAA+500 mg·L^-1 Carb;烟草筛选培养基T3为：MS+100 mg·L^-1 Kan;烟草继代培养基T4为：MS+80 mg·L^-1 Kan+300 mg·L^-1 Carb。本实验利用植物基因工程手段将WIN1基因整合入烟草K326中,改变烟草k326总基因序列。通过PCR、RT-PCR检测方法对转基因烟草k326一代进行鉴定得出WIN1基因成功导入烟草K326,最终获得了转基因烟草K326一代品种。本实验研究目标通过转基因技术将WIN1基因插入烟草K326,使其角质膜厚度和成分有所改变,以此来提高烟草K326抗旱、抗寒和抗病等性能,为提高烟草抗逆性特别是抗旱和抗寒性奠定基础。该项初步研究结果不仅对认识和揭示植物角质膜的结构功能具有重要理论意义,而且对应用植物基因工程技术改良和培育抗逆性强的植物优良品种和农业生产都具有重要的应用价值。     

根癌农杆菌介导AtNHX1基因转化番茄的研究

构建AtNHX1基因植物表达载体,通过农杆菌介导法将其转入番茄。探讨了外植体类型、农杆菌菌株和不同筛选标记对芽诱导分化的影响。对抗性植株进行PCR检测,获得15株转基因植株。对转基因番茄T1代进行80mmol/LNaHCO胁迫处理,转基因植株的相对生长量高于对照植株,显示AtNHX1基因的导入提高了番茄对碱性盐的耐受性。     

转人α-乳清白蛋白基因烟草中半胱氨酸含量的提高

将人α-乳清白蛋白基因构建到植物表达载体上,通过农杆菌介导采用叶盘法将人α-乳清白蛋白基因导入到烟草中,经过PCR和Southern blot分析表明:人α-乳清白蛋白基凶已经整合到烟草基因组中;经过RT-PCR葙GUS组织化学染色证明:人α-乳清白蛋白基因得到了表达.测定了9株转基因烟草叶片半胱氨酸含量,大部分植株有着明显的提高,最高幅度达到了318.02%,半胱氨酸含量平均提高了166.40%.     

青菜的高效再生和农杆菌介导B.t.及CpTI基因的转化

分别对培养基中适宜的激素组成和AgNO3 添加浓度进行研究 ,建立了青菜下胚轴和子叶外植体的高效再生系统 ,青菜品种“矮抗青”的最高芽分化频率下胚轴可达 6 5 % ,子叶为 5 2 %左右。在此基础上 ,对影响转化频率的不同因素进行了探讨 ,共获 94株卡那霉素抗性植株。对转基因植株总DNA的Southernblot ting分析证明 ,B .t .基因和CpTI基因已整合到青菜植株的细胞核基因组中。经过抗虫性筛选试验 ,从转基因植株的T3 代筛选到 7个转B .t.基因的抗虫纯合株系和 5个转CpTI基因的抗虫纯合株系 ,并进入田间小区青菜抗虫新品种试验     

Transformation and regeneration of garlic (Allium sativum L.) by Agrobacterium-mediated gene transfer

 By using highly regenerative calluses, we developed a stable transformation system in garlic (Allium sativum L.). The temperature and number of days of co-cultivation with Agrobacterium tumefaciens was shown to be an important factor in transient expression of the uid A gene. After a culture period of 5 months in selection medium containing hygromycin, 20 shoots were induced from ca. 1000 calluses, among which 15 plants expressed β-glucuronidase activity upon staining with X-Gluc. Shoots developed into transgenic garlic after 1 month. Integration of the uid A gene was confirmed by Southern blot analysis for genomic DNA of transgenic garlic plants. Received: 25 October 1999 / Revision received: 16 February 2000 / Accepted: 22 February 2000     

利用激光微束穿刺法将杀虫蛋白基因导入油菜的研究

利用激光微束照射油菜子叶柄,将来自苏云金杆菌的杀虫蛋白（Ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌｃｒｙｓｔａｌｐｒｏｔｅｉｎ,ＩＣＰ）基因导入油菜细胞中,经植株再生和卡那霉素筛选,获得了转基因植株。对转基因植株进行了ＰＣＲ检测和饲虫实验,发现转基因植株为ＰＣＲ扩增阳性,某些植株表现出了较强的抗虫性。实验结果表明外源抗虫基因已被整合到油菜基因组并得到了表达。