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相似文献
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1.
苏云金芽孢杆菌(Bt)晶体毒蛋白基因在烟草叶绿体中的表达   总被引:21,自引:0,他引:21  
将全长3.5kb的Bt基因3’端缺失,得到长为2.1kb、1.8kb的基因。分别将这3个长度(1.8kb、2.1kb、3.5kb)的基因置于水稻叶绿体psbA基因的启动子和终止子调控之下,并与选择标记基因aadA(编码氨基糖苷-3’-腺苷酸转移酶,具壮观霉素抗性)表达盒相连;以烟草叶绿体基因trnH-psbA-trnK为同源片段,构建成叶绿体转化载体pBT3、pBT8和pBT22。用基因枪把Bt基  相似文献   

2.
抗真菌蛋白Rs—AFPs基因在大肠杆菌中的表达   总被引:3,自引:0,他引:3  
将抗真菌蛋白Rs-AFP1和Rs-AFP2全长cDNA插入表达质粒pET-22b/NcoI+SacI位点,构建成融合蛋白表达载体pRAF1和pRAF2.将不含信号肽编码序列的Rs-AFP1和Rs-AFP2cDNA分别插入pET-22b/Ncol+Sacl和pET-22b/Ndel+SacI位点,构建成不含信号肽序列的融合蛋白表达载体pRAF3、pRAF4和非融合蛋白表达载体pRAF5和pRAF6.将构建的上述各种表达载体转化E.coliBL21,挑菌落培养,IPTG诱导,使Rs-AFPs基因得到表达,并用体外抑菌试验检测表达产物的活性,结果表明,各种表达载体的表达产物均具有不同程度的抑菌活性,其中,pRAF3和pRAF4表达产物的抑菌活性较明显.  相似文献   

3.
黄瓜花叶病毒(CMV)运动蛋白基因介导的抗病性   总被引:4,自引:0,他引:4  
利用Fny_CMV株系RNA3cDNA克隆,构建了含有全长和编码区缺失501个核苷酸的运动蛋白(MP)基因植物表达载体pBMPR和pBMPK。在土壤农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens(SmithetTownsend)Conn)LBA4404介导下转化烟草(NicotianatabacumL.)品种“NC89”,分别经Southernbloting、RT_PCR或Westernbloting分析,外源基因已整合到再生植株中并得到表达。抗病性分析表明,含有缺失型MP基因的R0代转基因植株抗性较好,接种50d后,10株转化植株中仍有5株不表现症状。在自然发病条件下,这5个含有缺失型MP基因转基因株系在R1代都表现了一定的抗病性。抗性主要表现为症状出现推迟,严重度减轻。利用PCR筛选、种子卡那霉素抗性试验和温室抗病性测定等方法,初步认为R2代转基因烟草K_6_5株系为转基因抗病纯合系。而含有全长MP基因的R0代转化植株,前期没有表现明显的抗病性,但在接种40d后部分发病植株有恢复健康的趋势。  相似文献   

4.
转基因烟草中Bt毒蛋白基因的表达行为   总被引:9,自引:0,他引:9  
构建了高效植物表达载体pBinMoBc,该载体携带超强表达复合启动子OM及Ω因子控制下的CryIA(c)基因。采用根癌土壤杆菌(Agrobacterum tumefaciens(Smith et Townsend)Conn)介导的方法转化烟草(Nicotiana tabacum L.),ELISA检测表明,大多数转基因烟草中CryIA(c)基因表达量均超过0.1%,最高可达0.255%;转基因烟草  相似文献   

5.
将人肝金属硫蛋白(MT)突变体β基因插入到中间载体pRL-439上的强启动子PpsbA 下游,利用载体pRL-β上的PpsbA 和β基因与phasm id pTZ18-8上整合平台PsbB,构建整合表达载体pTZ-β.整合平台PsbB与集胞藻(Synechocystissp.PCC6803)染色体DNA 上psbB基因下游片段为同源序列.为了发生单交换同源重组,将外源基因β插入到整合平台PsbB下游的克隆位点.利用自然转化方法将表达载体pTZ-β整合到Synechocystitsp.PCC6803的染色体上.经氨苄青霉素筛选得到遗传性状稳定的转基因蓝藻.Southern blotting 证明β基因已整合到Synechocystis sp.PCC6803的染色体上;Western blotting 表明β基因已在蓝藻中表达.ELISA 测定在Zn2+ 浓度为150 μm l/L时表达量最高,为590 μg/g 鲜藻;原子吸收表明转β基因的藻对Zn2+ 的富集能力约为野生型的2倍.  相似文献   

6.
吉林省产5种百合的核型研究   总被引:17,自引:0,他引:17  
报道了吉林省产5种百合科植物的染色体数目和核型:①毛百合Lilium dauricum Ker.-Gew1.2n=24=2m(2SAT)+2sm(2SAT)+8st(2SAT)+12t(2SAT);②有斑百合L.concolor Salisb.var.buschianum(Lodd.)Baker 2n=24=2m(2SAT)+4sm(4SAT)+6st(2SAT)+12t;③兰州百合L.david  相似文献   

7.
以矮牵牛(Petunia hybrida L.)栽培品种为材料,取开放前的花蕾分离mRNA,反转录合成cDNA,以cDNA为模板,通过PCR扩增,对获得的目的片段进行序列分析。结果表明,分离的目的片段含有686个核苷酸(含有起始密码和终止密码)。核苷酸序列与文献报道相比,同源率为99.6%,只有3个碱基发生改变,5’端的MADS盒区域完全相同。将得到的矮牵牛花同源异型基因fbp2的cDNA(yfbp2)与CaMV355启动子和NOS3’终止子融合,构建了表达载体pBBP2。表达载体通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404(pAL4404)介导转化烟草(NicotianatabacumL.)叶片,在含有100mg/L卡那霉素的抗性培养基上再生成株。对抗性株进行总DNASouthern杂交和总RNA的点杂交,证明目的基因已导入烟草细胞中,整合到烟草基因组上,并且在烟草细胞中转录。同源异型基因fbp2导入烟草后导致烟草花型改变,在雄蕊上产生了花瓣。  相似文献   

8.
牛生长激素基因在马铃薯中的表达   总被引:5,自引:0,他引:5  
将牛生长激素基因cDNA 与Patatin ClassI启动子及NOS3终止子连接,构建了表达载体pPBGT. 用直接法将表达载体转入农杆菌(Agrobacterium tum efaciens) LBA4404(pRAL4404)菌株, 用此菌株转化马铃薯(Solanum tuberosum )得到再生植株. 经NPTⅡ活性检测,总DNA PCR和Southern blot证明目的基因已整合到马铃薯基因组中.RNA 点杂交和Western blot表明牛生长激素基因已在转基因马铃薯块茎中转录和表达  相似文献   

9.
同质化叶绿体转基因植株的获得   总被引:9,自引:0,他引:9  
构建了含有外源目的基因表达盒(psbA5’-mifH-psbA3’)和选择标记基因表达盒(Prrn-aadA-TpsbA)以及两段质体基因组同源片段的烟草叶绿体转化载体pTRCH205。基因枪聂击受试外植体后,经抗生素筛选获得转化再生植株。为探索提高转基因植株同质化程度的可能途径,对再生植株再高浓度的壮观霉素选择压下进行了3轮次分化再生,并结合腋芽繁殖方式继代6 ̄10次。PCR扩增和以同源片段为探  相似文献   

10.
用小麦( Triticum aestivum L.) 第二部分同源群的36 个探针,对携带抗白粉病( Erysiphe graminisf.sp tritici) 基因Pm6 的普通小麦提莫菲维小麦( T.timopheevi Zhuk .) 渐渗系进行检测,通过这些渐渗系与受体亲本“Prins”之间杂交谱带多态性的比较,发现所测出多态性标记位点均位于这5 个渐渗系的2B 染色体上,但其渗入片段的位置与大小有明显区别。IGV1_456 和IGV1_458 被鉴定为2B 染色体从短臂标记Xcdo405 到长臂标记Xbcd135 之间的区域已被提莫菲维2G 染色体区段所代替;而IGV1_463 则在2B 染色体长臂Xbcd307 到Xcdo678 标记之间的区域被提莫菲维渗入成分所代替;IGV1_464 、IGV1_465 2BL染色体上的渗入片段更小,即IGV1_464 在2BL染色体上标记Xpsr934 与Xbcd135 之间的区域有提莫菲维2G 染色质成分渗入,IGV1_465 仅在Xbcd135 附近有更小的外源成分渗入。根据5个渐渗系渗入成分重叠区段比较可把Pm6 定位于2BL染色体上Xbcd135 2BL标记的邻近区域内  相似文献   

11.
One of the unique insights provided by the growing number of fully sequenced genomes is the pervasiveness of gene duplication and gene loss. Indeed, several metrics now suggest that rates of gene birth and death per gene are only 10–40% lower than nucleotide substitutions per site, and that per nucleotide, the consequent lineage‐specific expansion and contraction of gene families may play at least as large a role in adaptation as changes in orthologous sequences. While gene family evolution is pervasive, it may be especially important in our own evolution since it appears that the “revolving door” of gene duplication and loss has undergone multiple accelerations in the lineage leading to humans. In this paper, we review current understanding of gene family evolution including: methods for inferring copy number change, evidence for adaptive expansion and adaptive contraction of gene families, the origins of new families and deaths of previously established ones, and finally we conclude with a perspective on challenges and promising directions for future research.  相似文献   

12.
真核基因的快速克隆及表达   总被引:3,自引:0,他引:3  
以细胞间隙连接蛋白基因Cx26作为目的基因,通过T-A载体介导,构建真核表达重组载体pcDNA3.1( ) /Cx26,重组表达载体转染人鼻咽癌细胞株HNE1,表达Cx26间隙连接蛋白。  相似文献   

13.
利用套叠PCR技术进行基因突变和拼接   总被引:15,自引:4,他引:11  
利用套叠PCR技术(又称重叠区扩增基因拼接法)对hGM-CSF基因内第28位氨基酸处的糖基化位点进行突变和进行人促性腺激素基因,腺苷酸激酶短肽与胰岛素样生长因子-基因三者之间的拼接,结果表明采用该技术能在体外实行有效的基因重组和定点突变,其成功率为100%,这一技术不需要内切酶消化和连接酶处理,技术操作员简单易行,在基因拼接,基因内部突变方面具有良好的应用价值。  相似文献   

14.
成簇基因的时空表达调控   总被引:4,自引:0,他引:4  
徐海明  刘德培 《生命科学》1999,11(3):97-101
成簇基因具有不同单个基因的特性,同一簇内基因大多有类似的结构,功能以及表达模式,基因之间时空表达模式及表达量高度协调,提示同一簇基因是作为统一整体进行调节的,具有共同的调节机制。基因成簇排列是实现基因时空协调表表达的基础,是遗传信息的一种高级组织形式,具有强大的进化优势,要揭示成簇基因表达调控的基本规律,应从顺式作用元件,反式作用因子,染色质等层次,进行整体的以及多基因相互作用的研究,这些机制的阐  相似文献   

15.
基因功能研究方法浅介   总被引:2,自引:0,他引:2  
随着人类基因组计划的进展,数据库中积累了越来越多未知功能的基因序列,分析这些基因的功能将成为基因组计划的主要任务。本介绍了几种研究特定基因功能的方法及程序。  相似文献   

16.
本文报道了以GFP(绿色荧光蛋白)基因为报告基因,pl6基因为目的基因,将pl6基因分别插入GFP基因的上游和下游,构建成GFP-pl6融合基因表达载体pCpl6G和pCGp16,并通过酶切、电泳技术对重组体进行了鉴定。该表达载体的构建成功为开展pl6转基因动物模型的建立及其特性研究奠定了基础  相似文献   

17.
18.
非病毒基因治疗是相对于病毒性基因治疗而言,指采用非病毒的载体进行的基因治疗。非病毒的基因载体比病毒性基因载体具有高安全性、低免疫原性及易于生产的特点。本文就非病毒基因治疗所采用的主要方法、面蜂的主要问题及发展方向作一概括的介绍。随着人类对疾病发病分子机制的深入研究及人类基因组计划的实施,非病毒基因治疗将在人类疾病的治疗中发挥重要作用。  相似文献   

19.
BPOZ是在卵巢癌等肿瘤组织中表达下调的细胞生长抑制基因,建立BPOZ基因剔除小鼠模型,可以为在体研究BPOZ基因的生物学功能及其与肿瘤发生的关系创造条件.运用生物信息学手段确定小鼠BPOZ基因组序列,设计基因剔除策略,构建完成了基因剔除载体XpPNT-BPOZ.以电穿孔方法将基因剔除载体导入ES细胞,用G418和Ganciclovoir进行正负筛选,获得抵抗克隆,PCR和DNA印迹鉴定出正确同源重组的ES细胞克隆.将同源重组的ES细胞注入小鼠囊胚,获得嵌合体小鼠.嵌合体小鼠与C57BL/6J小鼠交配后获得Aguoti毛色的小鼠30只,其中15只为BPOZ基因剔除杂合子小鼠,阳性率为50%.在雌雄杂合子交配的后代中获得纯合子小鼠.初步的表型观察发现BPOZ基因剔除小鼠发育正常,有繁殖能力,进一步的表型分析工作正在进行之中.  相似文献   

20.
杆状病毒凋亡抑制基因的研究进展   总被引:2,自引:0,他引:2  
杆状病毒(bacu lovirus)感染昆虫细胞能引起细胞凋亡,但在长期进化过程中,杆状病毒可通过自身编码凋亡抑制基因的表达,抑制细胞凋亡以利于自己的增殖。目前在杆状病毒基因组中已发现两种不同类型的细胞凋亡抑制基因p35/p49和iap,这两类凋亡抑制基因分别作用于细胞凋亡途径的不同位点,以抑制细胞的凋亡。近年来人们对这两种基因的蛋白结构及作用机制等方面进行了大量的研究,这些为今后研究昆虫细胞凋亡,扩大杆状病毒宿主范围等方面奠定了基础。  相似文献   

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