基于多基因序列分析对尖孢镰孢菌古巴专化型(香蕉枯萎病菌)生理小种的鉴定

由尖孢镰孢菌古巴专化型Fusarium oxysporum f.sp.cubense,Foc引起的香蕉枯萎病是香蕉生产上的毁灭性病害,自1996年以来已对我国华南地区香蕉生产造成了严重危害。传统上香蕉枯萎病菌生理小种的鉴定主要采用人工接种鉴别寄主尔后测定病菌致病性的方法,但实验周期长,且受季节影响。以来自澳大利亚的香蕉枯萎病菌生理小种1号(BW1)、2号(Race 2)、3号(Race 3)以及亚热带4号(BW4)为对照,对分离自我国华南地区主要香蕉产区(广东、广西、海南、福建等省区)的14株香蕉枯萎病菌的单孢菌株进行致病性测定,并结合热带4号小种(TR4)和亚热带4号小种(ST4)的分子特异检测方法,确定其生理小种类型;同时,利用ITS、TEF‐1α、IGS、histone H3、β‐tubulin等5个主要用于镰孢菌系统发育学研究的基因,研究不同地区不同来源的Foc菌株之间的亲缘关系及其与非病原尖孢镰孢菌的关系,并评价这5个基因在香蕉枯萎病菌生理小种鉴定上的应用价值。研究结果表明:(1)来源于我国华南地区的4号小种主要为热带4号小种;(2)TEF‐1α、IGS、histone H3等3个基因片段能够将Foc中不同生理小种的菌株划分成不同的系统发育谱系,与致病性测定的结果具有对应关系,也能较好地反映尖孢镰孢菌种内菌株的亲缘关系,可用于香蕉枯萎病菌生理小种鉴定;(3)我国Foc 1号生理小种的遗传多样性高于4号生理小种,Foc 1号生理小种的菌系与来自香蕉果实上的非病原尖孢镰孢菌的亲缘关系比其与Foc 4号生理小种的菌系的亲缘关系更近。     

中国棉花枯萎菌生理小种的RAPD分析

利用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分子标记方法对我国棉花枯萎菌３个生理小种（３、７、８号）进行遗传多样性分析,以筛选出的１０个随机引物对采自我国１１个省（自治区）的２６个代表菌株及国外３个不同生理小种对照菌株进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增,共产生了１４０个ＲＡＰＤ分子标记,其中８７．８％具有多态性。通过聚类分析确定了供试小种间的亲缘关系,并寻找到了我国３、７、８号小种的特异条带,为确立我国棉花枯萎菌生     

中国棉花枯萎菌生理小种的RAPD分析

利用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分子标记方法对我国棉花枯萎菌３个生理小种（３、７、８号）进行遗传多样性分析,以筛选出的１０个随机引物对采自我国１１个省（自治区）的２６个代表菌株及国外３个不同生理小种对照菌株进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ增,共产生了１４０个ＲＡＰＤ分子标记,其中８７．８％具有多态性。通过聚类分析确定了供试小种间的亲缘关系,并寻找到了我国３、７、８号小种的特异条带,为确立我国棉花枯萎菌生理小种在国际上的分类地位提供了可靠的分子证据。     

中国棉花枯萎菌生理小种的RAPD分析*

利用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分子标记方法对我国棉花枯萎菌３个生理小种（３、７、８号）进行遗传多样性分析,以筛选出的１０个随机引物对采自我国１１个省（自治区）的２６个代表菌株及国外３个不同生理小种对照菌株进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ增,共产生了１４０个ＲＡＰＤ分子标记,其中８７．８％具有多态性。通过聚类分析确定了供试小种间的亲缘关系,并寻找到了我国３、７、８号小种的特异条带,为确立我国棉花枯萎菌生理小种在国际上的分类地位提供了可靠的分子证据。     

基于RAPD、ISSR和AFLP对西瓜枯萎病菌遗传多样性的评价

利用RAPD、ISSR和AFLP分子标记技术对50个西瓜枯萎病菌株进行了分析。结果表明,21个RAPD引物、21个ISSR引物和21对AFLP引物分别对供试菌株扩增出113、134和389条带,三种分子标记的遗传相似系数比较一致,均可揭示西瓜枯萎病菌的遗传变异特点。三种分子标记产生的聚类分析结果存在一定差异,其中RAPD类群与生理小种和地理来源之间均不存在明显关系;而AFLP和ISSR类群与生理小种之间存在一定相关性,与菌株的地理来源关系不明显。     

基于RAPD、ISSR和AFLP对西瓜枯萎病菌遗传多样性的评价

利用RAPD、ISSR和AFLP分子标记技术对50个西瓜枯萎病菌株进行了分析。结果表明，21个RAPD引物、21个ISSR引物和21对AFLP引物分别对供试菌株扩增出113、134和389条带，三种分子标记的遗传相似系数比较一致，均可揭示西瓜枯萎病菌的遗传变异特点。三种分子标记产生的聚类分析结果存在一定差异，其中RAPD类群与生理小种和地理来源之间均不存在明显关系；而AFLP和ISSR类群与生理小种之间存在一定相关性，与菌株的地理来源关系不明显。     

基于RAPD、ISSR和AFLP对西瓜枯萎病菌遗传多样性的评价

利用RAPD、ISSR和AFLP分子标记技术对50个西瓜枯萎病菌株进行了分析。结果表明，21个RAPD引物、21个ISSR引物和21对AFLP引物分别对供试菌株扩增出113、134和389条带，三种分子标记的遗传相似系数比较一致，均可揭示西瓜枯萎病菌的遗传变异特点。三种分子标记产生的聚类分析结果存在一定差异，其中RAPD类群与生理小种和地理来源之间均不存在明显关系；而AFLP和ISSR类群与生理小种之间存在一定相关性，与菌株的地理来源关系不明显.     

18份广东香蕉种质对枯萎病的抗性评价

【背景】香蕉枯萎病是世界性的香蕉毁灭性病害,尚无有效药剂防控,筛选抗病品种是目前理想的防治方法。【方法】采用组培苗伤根接种法,研究了18份香蕉种质对香蕉枯萎病菌4号生理小种的抗性水平,并根据病情指数进行抗性分级。【结果】在供试的18份香蕉种质中,2份(东莞大蕉、抗枯5号)高抗,2份(碧盛、大丰)抗病,3份(抗枯1号、粉杂、农科1号)中抗,7份(粤优抗1号、广东-741、泰国B9、大蕉、台湾8号、海贡蕉、威廉斯8818)感病,4份(巴西、广东2号、广粉1号、粉蕉)高感。【结论与意义】不同香蕉种质对香蕉枯萎病菌4号生理小种的抗病性存在较大差异,本研究初步筛选出7份抗枯萎病的香蕉种质,为香蕉枯萎病抗病育种提供了依据,为病区种植香蕉品种提供了有效参考。     

河北省西瓜枯萎病菌致病性分化及其RAMS分析

本文对50个西瓜枯萎病菌株,(其中46个来自河北省石家庄、保定、唐山等12个西瓜种植区的代表菌株)进行了致病性测定、RAMS(Random amplified microsatellites)扩增和致病类型与RAMS类群的相关性分析。根据鉴别寄主对不同菌株的抗感反应,将50个菌株划分为3个不同的生理小种,即0号、1号和2号生理小种,分别占供试菌株的18%、64%和18%;21个RAMS引物对供试菌株扩增出188条带,其中多态性带134条,占总带数的71%。基于RAMS标记聚类分析,50个菌株被划分为3个类群(RAMSGroups,RGs)。RGI包含来自不同地区的41个菌株,以1号生理小种为主(32个),占该类群的78.1%;RGII包括来自保定、唐山和新疆的3个菌株,均为0号生理小种;RGIII包括张家口、石家庄、保定等地的6个2号生理小种菌株。RAMS类群与生理小种之间存在一定相关性,与菌株的地理来源关系不明显。     

海南省香蕉枯萎病病原菌的分离鉴定及1号、4号小种的生物学特性

香蕉枯萎病是目前国内和世界很多地区香蕉种植区的一种毁灭性病害,目前尚未找到有效的防治方法.本文采集了海南省不同地区香蕉枯萎病的病原菌,通过经典病理学与分子生物学的方法进行了鉴定,此外还优化了快速检测的方法.结果表明,通过接种巴西香蕉和粉蕉进行致病性检测以及分离菌rDNA-ITS测序结果,明确鉴定出供试的香蕉分离菌株为4号生理小种,粉蕉分离菌株为1号生理小种.为了对1号、4号生理小种有更多的了解,本文还对1号、4号小种菌株生物学特性进行了测定,确定了影响菌丝生长的最佳条件.结果显示,pH 5时最适合1号、4号生理小种的菌丝生长,适合菌丝生长的温度为19～28℃之间,温度达到37℃时菌丝不能生长,碳源对菌丝的生长影响不大.这些方法和数据可以有利于田间香蕉枯萎病病害的检测和最终确定,生物学特性的测定可以为耕作技术的改进和农药的研发提供参考依据.     

海南省香蕉枯萎病病原菌的鉴定

香蕉枯萎病在海南省为首次报道。在Komada改良培养基鉴定的基础上,用温室人工接种法对采自海南省各市县香蕉种植区的18个香蕉和粉蕉假茎分离物进行鉴定。结果表明香蕉枯萎病菌的两种分离物在培养特性和致病性上存在明显区别,分离自粉蕉的12个菌株为1号生理小种,而分离自香蕉的6个菌株为4号生理小种。     

SDSC-TAB和高盐沉淀法提取香蕉枯萎病菌基因组DNA的比较

以香蕉枯萎病菌菌株为试验材料,采用SDS- CTAB法和高盐沉淀法提纯香蕉枯萎病菌基因组DNA。结果表明:高盐沉淀法是适合于香蕉枯萎病菌基因组DNA提取的方法。该方法提取的DNAOD2 60 2 80值显示产物纯度较高;经琼脂糖凝胶电泳得到一条带型较宽且清晰的DNA谱带,DNA浓度较高,基本无DNA碎带;不用RNase处理,已无RNA的干扰,无需任何纯化处理即可用于PCR扩增和RAPD分析。同时对DNA提取过程中的细节问题进行了探讨与分析。     

A differential medium for the identification of races 1 and 4 of Fusarium oxysporum f.sp. cubense

Three distinctive colony types were produced when Fusarium oxysporum f.sp. cubense (Foc ) races 1 and 4 were cultured on a defined basal medium containing an appropriate carbon source and bromothymol blue as a pH indicator. These distinctive cultural characteristics have been used as a specific and reliable method for the differentiation of races 1 and 4 of Foc from other species of Fusarium.     

Genetic Diversity and Pathogenicity of Fusarium oxysporum f.sp. melonis Races from Different Areas of Italy

Fusarium wilt caused by Fusarium oxysporum f.sp. melonis (FOM) is a devastating disease of melon worldwide. Pathogenicity tests performed with F. oxysporum isolates obtained from Italian melon‐growing areas allowed to identify thirty‐four FOM isolates and the presence of all four races. The aims of this work were to examine genetic relatedness among FOM isolates by race determination and to perform phylogenetic analyses of identified FOM races including also other formae speciales of F. oxysporum of cucurbits. Results showed that FOM race 1,2 was the most numerous with a total of eighteen isolates, while six and nine isolates were identified as race 0 and 1, respectively, and just one isolate was assigned to race 2. Phylogenetic analysis was performed by random amplified polymorphic DNA (RAPD) profiling and by translation elongation factor‐1α (TEF‐1α) sequencing. The analysis of RAPD profiles separated FOM races into two distinct clades. Clade 1, which included races 0, 1 and 1,2, was further divided into ‘subclade a’ which grouped almost all race 1,2 isolates, and into ‘subclade b’ which included race 0 and 1 isolates. Clade 2 comprised only race 2 isolates. The phylogenetic analysis based on TEF‐1α separated FOM from the other formae speciales of F. oxysporum. Also with TEF‐1α analysis, FOM races 0, 1 and 1,2 isolates grouped in one single clade clearly separated from FOM race 2 isolates which grouped closer to F. oxysporum f.sp. cucumerinum. RAPD technique was more effective than TEF‐1α in differentiating FOM race 1,2 isolates from those belonging to the closely related races 0 and 1. Both phylogenetic analyses supported the close relationship between the three different FOM races which might imply the derivation from one another and the different origin of FOM race 2.     

The determination of physiological race of Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici of tomato in Zhejiang, China

A group of differential tomato lines was used to identify the races of Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici in Zhejiang, China. Marmande verte carries no resistant genes and Marporum carries gene I-1. Both lines Motelle and Mogeor have Gene I-1 and I-2. Tomato seedlings of eighteen days after sowing were inoculated with an isolate of Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, No. 98-2 and kept in a growth chamber. The seedlings were evaluated at fourteen days after inoculation. Results showed that Marmande verte and Marporum were severely infected by the pathogen and established as susceptible. Motelle and Mogeor were not infected and established as resistant. These results indicated that the isolate No. 98-2 represented the race 2 of Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici and gene I-2 is necessary for obtaining resistance to this pathogen in the Zhejiang region.