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相似文献
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1.
以海马齿为材料,分别用CrAB法、SDS法、Trizol方法以及改进的CTAB法提取其总RNA,并比较了各RNA的产率、纯度和完整性等.结果表明,改进的CrAB法对海马齿总RNA的提取有较好的效果.所得总RNA的28S、18S和5S条带清晰,A260/A280比值为2.0,A260/A230比值为2.08,RNA产量可达56μg·g-1(FW).经RT-PCR获得了特异条带,说明利用改良的CTAB法从海马齿中提取到的RNA质量好、产率高、完整性强,完全适合于进一步的分子生物学研究.  相似文献   

2.
一种提取荔枝胚中总RNA的方法   总被引:10,自引:1,他引:9  
用改良的Tris-硼酸法和3S柱式细胞及组织总RNA抽提试剂盒V2.0提取3个荔枝品种胚中的总RNA,经纯度和甲醛变性胶分析,其A260/A280值在1.91~2.02之间,基本完整,未检出明显降解.  相似文献   

3.
苏铁作为古老的裸子植物,对种子植物的起源与演化、遗传多样性与亲缘关系等研究具有重要意义。由于苏铁中含有大量多糖、多酚等次级代谢产物,会以不同形式干扰RNA的提取,而高质量的RNA对分子生物学等研究至关重要。因此,通过异硫氰酸胍法、CTBA法和试剂盒法分别提取台东苏铁的RNA,最终采用改良的异硫氰酸胍法提取台东苏铁总RNA方法效果较好,获得的RNA条带边缘清晰,而且28S RNA条带是18S RNA条带亮度的2倍,A260/A280比值在2.0左右。  相似文献   

4.
改良异硫氰酸胍一步法提取红豆杉细胞RNA   总被引:18,自引:1,他引:17  
将Chomczynski建立的RNA一步分离法加以适当改进,用以提取红豆杉细胞株E2、TC、H21的总RNA,所获RNA样品的A260/A280比值分别是1.82±0.03、1.85±0.04、1.74±0.03;A260/A230比值分别为2.02±0.03、2.15±0.03、2.03±0.05;得率分别为51.36±0.05μg/g、52.40±0.04μg/g、51.08±0.06μg/g新鲜细胞.变性琼指糖凝胶电泳图谱显示每一样品均具有完好的28S和18S两条亮带.  相似文献   

5.
银杏不同组织的总RNA提取方法的改进   总被引:2,自引:1,他引:1  
方法:采用改进的CTAB法高效地从富含多糖、多酚类化合物的银杏的根、茎、叶和果实四个组织中提取RNA。结果:抽提的不同组织的RNA经电泳检测,可见28S和18S两条清晰的主带,且28S rRNA在亮度上均为18S rRNA的2倍,两条带之间无弥散现象;根、茎、叶、果所提的RNA的经紫外吸收检测得到A260/A230分别为1.9、1.4、2.1、1.7,测得A260/A280分别为1.8、2.0、2.3、1.8,鲜重分别达到78μg/g、69μg/g、150μg/g、90μg/g;通过RT-PCR及凝胶检测,得到了银杏看家基因18S基因的约150bp清晰的条带,从而进一步检测提取RNA的质量。结论:提取的总RNA纯度高,质量好,足以为研究提供RNA材料。  相似文献   

6.
从荞麦中提取总RNA的有效方法   总被引:9,自引:0,他引:9  
介绍了一种简单快速的从荞麦中提取总RNA的方法。经SDS、KAc和异丙醇等常规试剂提取高纯度的荞麦RNA,对产物进行琼脂糖凝胶电泳分析表明,其28S RNA与18S RNA的比值约为2:1,紫外吸收值A260/A290为1.91-2.06,产率为69.2-87.5μg RNA/g植物材料。用该法提取的总RNA可满足RT-PCR和cDNA文库构建等的需要,是一种高效的荞麦RNA提取法。  相似文献   

7.
芍药花瓣总RNA的提取   总被引:11,自引:0,他引:11  
用TRIzol法和改良的热硼酸盐法从芍药幼嫩花瓣中提取总RNA,总RNA的D260nm/D280nm值分别为1.803、1.974。琼脂糖电泳表明,用TRIzol法提取的RNA只有28S、18S2条带,带的亮度差,说明RNA有些降解;而用改良的热硼酸盐法提取的总RNA有28S、18S、5S3条带,带的亮度强,且28S是18S宽度的2倍左右,说明提取的RNA完整、未降解,可用于后续实验。改良的热硼酸盐法更适于从芍药花瓣中提取总RNA。  相似文献   

8.
为筛选檀香心材总RNA提取方法,对5种提取方法进行比较研究,包括Trizol法、改良CTAB法、SDS酸酚法、异硫氰酸胍-CTAB法、异硫氰酸胍-SDS法。结果表明,Trizol法和异硫氰酸胍-CTAB法不能提取出檀香心材总RNA,而SDS酸酚法、改良CTAB法和异硫氰酸胍-SDS法均能提取檀香心材总RNA。SDS酸酚法的A260 nm/A230 nm小于2.0,且RNA产率低,仅为(27.94±1.06)μg g–1,不能满足后续实验要求。而改良CTAB法和异硫氰酸胍-SDS法提取的总RNA带型清晰,完整性好,A260 nm/A280 nm为1.8~2.0,A260 nm/A230 nm大于2.0,RNA产率分别为(79.06±4.22)和(107.00±1.36)μg g–1。分别以改良CTAB法和异硫氰酸胍-SDS法提取的总RNA为模板,通过RT-PCR反应,扩增檀香Actin基因片段,结果二者扩增产物大小相同且条带单一,说明改良CTAB法与异硫氰酸胍-SDS法为檀香心材总RNA提取的较好方法。  相似文献   

9.
提取高质量的RNA是从基因表达水平上研究油菜种子和种皮发育的必要条件。现有方法因为油菜种子脂肪、多酚和多糖,难以快速获得完整、高纯度的油菜种子总RNA。本试验针对油菜种子和种皮特点,利用苯酚-氯仿抽提后用无水乙醇沉淀RNA,建立了在油菜种子和种皮中快速提取高质量总RNA的提取方法,电泳分析表明28S rRNA亮度约为18S rRNA的2倍;紫外分光光度计检测A260/A280介于1.8~2.0之间。用该法分离的RNA,已成功用于RT-PCR、Northern blot分析和基因全长的克隆等分子生物学研究。  相似文献   

10.
目的:比较以确定适用于野生稻总 RNA 提取的方法.方法:用改良的异硫氰酸胍法、TRIZOL 法、SDS 法和 CrAB 法分别提取云南 3 种野生稻和栽培稻滇超 6 号在灌浆期颖果的总 RNA.结果:SDS法能够提取的普通野生稻和疣粒野生稻的总 RNA 的纯度高,其A260/A260 介于1.9938~1.9267;而 TRIZOL 法只适用于栽培稻滇超 6 号,CTAB 法对于疣粒野生稻和药用野生稻提取效果一般,电泳条带不很清晰,其A260/A280 介于1.8243~1.6928;而新建立的改良的异硫氰酸胍法都能提取完整性好、高得率(浓度介于0.9358~1.2008μg/μl)和高纯度的 RNA(A260/A280 大于1.8),电泳 28S rRNA 和 18S rRNA 条带清晰,且该方法操作简单、耗时少、效率高.结论:改良的异硫氰酸胍法适合于野生稻颖果总 RNA 的提取,提取的总 RNA 完整性好、得率高.  相似文献   

11.
以不同葡萄组织为材料对目前常用的2种总RNA提取方法一改良SDS法和CTAB-LiCl法进行研究。2种RNA提取方法中均不使用酚。采用这两种方法从葡萄不同组织中均成功地提取到RNA,琼脂糖凝胶电泳结果显示28s和18SrRNA条带完整清晰。检测A260/A280 值分布在1.7-2.0之间,A260/A230值分布于1.9-2.3之间,说明RNA质量较高。管家基Actin和ACS5基因的检测表明2种方法所得RNA能够满足RT-PCR和基因克隆等研究需要。改良SDS法的RNA得率是CTAB-LiCl法的RNA得率的2~3倍,而CTAB-LiCl法获得的RNA纯度高。可以根据原料的数量和对RNA质量的要求来选取最佳提取方法。  相似文献   

12.
提取高质量的RNA是进行人参植物分子生物学研究的必要前提.利用CTAB法、Trizol法、Bizol法和SDS法,从红果人参叶片中提取了总RNA,通过紫外分光光度法和凝胶电泳检测,结果显示:四种方法得到的纯度都比较高,OD260/OD280值都在1.7~2.0之间;SDS法提取的RNA,凝胶电泳显示28S条带是18S条带亮度两倍,而且无污染,好于其他三种方法.通过KT-PCK,ds cDNA片段条带弥散分布大小在0.2~3.0kb,从而进一步验证了SDS法提取的RNA质量,完全可以进行下一步的分子生物学研究  相似文献   

13.
为建立一项从少量培养细胞中同时提取RNA和蛋白质的技术 ,向 2~ 3× 10 5细胞中加入 1ml自制RNA提取试剂 ,RNA抽提后剩下的中下两相 ,用异丙醇、盐酸胍和无水乙醇抽提蛋白质 .同时用进口Tripure试剂、经典的异硫氰酸胍 苯酚 氯仿一步抽提RNA法和分子克隆实验手册裂解液制备蛋白质的方法 ,作为对照 .自制试剂提取的总RNA ,18S、2 8S清晰可见 ,2 8S比 18S带亮度强 2~ 3倍 ,带与带之间无拖尾现象 ,5S隐约可见 ,而且成功地进行了Northern印迹、RT PCR分析 ,与经典方法差异不大 ;用此法所提蛋白质 ,经SDS PAGE检测 ,蛋白分离效果很好 ,无杂质 ,且Western印迹检测Giα蛋白 ,可见一条清晰的特异带 ,与常规提取蛋白质 ,结果相似 .从微量细胞中同时提取的RNA和蛋白质 ,得率高、纯度好 ,具有化学完整性和生物学性质  相似文献   

14.
石斛总RNA提取方法的研究   总被引:3,自引:2,他引:1  
采用TRIZOL法、异硫氰酸胍法、Tris-硼酸法和改良的RNA提取方法提取石斛的总RNA,并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取的RNA样品的品质。研究结果表明:改良的RNA提取方法提取的RNA具有28S rRNA和18S rRNA两条清晰的条带,且无降解。OD260nm/OD280nm接近2.0,具有较高的纯度。其它三种方法获得的RNA品质较差,有降解和弥散现象。将改良的RNA提取方法提取的RNA逆转录成cDNA,经RAPD扩增,出现清晰的条带,进一步证明改良的RNA提取方法提取的RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求。  相似文献   

15.
马铃薯块茎中由于含有大量的多糖和酚类物质,因此难以从中提取RNA。本实验采用CTAB法从马铃薯块茎中提取了总RNA,并进行了马铃薯病毒的检验。结果表明:得到的RNA完整性好,A260/A280在1.7~2.0范围内,纯度也比较高。用RT-PCR方法进行马铃薯Y病毒的检验,得到了一条与预计扩增长度相同的一条带,并检验出枣庄地区马铃薯Y病毒的感染率为75%。  相似文献   

16.
Acid guanidium phenol preparations such as TRIzol allow the reproducible isolation of high-quality total RNA from various sources. However, if applied to minimal sample sizes, the quality parameters of the isolated RNA are often low. Here we present an approach to improve the 260/280- and 230/260-nm ratios of such preparations as well as the ratio of the 18S/28S RNA. A simple extraction with 1-butanol eliminates smearing of the 28 S RNA and restores the characteristic ultraviolet (UV) spectrum of highly purified RNA. Application of the method is demonstrated for fluorescence-activated cell sorting (FACS)-sorted cells where the population of interest is often small.  相似文献   

17.
RNA isolation is difficult in plants that contain large amounts of polysaccharides and polyphenol compounds. To date, no commercial kit has been developed for the isolation of high-quality RNA from tissues with these characteristics, especially for fruit. The common protocols for RNA isolation are tedious and usually result in poor yields when applied to recalcitrant plant tissues. Here an efficient RNA isolation protocol based on cetyltrimethylammonium bromide (CTAB) and two successive precipitations with 10 M lithium chloride (LiCl) was developed specifically for loquat fruits, but it was proved to work efficiently in other tissues of loquat and woody plants. The RNA isolated by this improved protocol was not only of high purity and integrity (A260/A280 ratios ranged from 1.90 to 2.04 and A260/A230 ratios were > 2.0) but also of high yield (up to 720 μg on average [coefficient of variation = 21%] total RNA per gram fresh tissue). The protocol was tested on loquat fruit (different stages of development, postharvest, ripening, and bruising), leaf, root, flower, stem, and bud; quince fruit and root; grapevine cells in liquid culture; and rose petals. The RNA obtained with this method is amenable to enzymatic treatments and can be efficiently applied for research on gene characterization, expression, and function.  相似文献   

18.
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