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相似文献
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1.
从一名国内感染的艾滋病人采血,分离其外周血单核细胞(PMCs)。首先与正常的PMCs共培养,4周后检测其HIV-1p24抗原(ELISA)达到峰值。用此时的细胞及其上清分别感染Jurkat-tat、CEM、MT4细胞,可很快地在这三株细胞中检测到HIV生长,HIV在Jurkat-tat细胞中生长情况最好,同时用病人血清直接感染Jurkat-tat和MT4细胞,4周后检测其细胞上清HIV-1p24抗原(ELISA法)为阳性,但OD值很低(约为PMC共培养组的一半)。用病人的少量全血与正常PMCs共培养,得到的结果与分离病人PMCs法相近。应用间接免疫荧光法(IFA)、免疫酶法(IEA)、蛋白印迹法及HIV-1POl基因和Env基因特异引物的聚合酶链反应(PCR)等证实为HIV-1病毒。分离的HIV在Jurkat-tat细胞中连续传代,细胞被感染后2-3天即出现以大量融合细胞为主的细胞病变,感染后7-10天细胞几乎全部死亡。病毒在连续传代过程中的生长特征及致细胞病变特征不变。此病毒命名为CA-2毒株。  相似文献   

2.
从一名国内感染的艾滋病人分离人免疫缺陷病毒   总被引:3,自引:0,他引:3  
赵永森  徐克沂 《病毒学报》1994,10(3):216-220
从一名国内感染的艾滋病人采血,分离其外周血单核细胞。首先与正常的PMCs共培养,4周后检测其HIV-1p24抗原达到峰值。用此时的细胞及其上清分别感染Jurkat-tat,CEM,MT4细胞,可很快地在这三株细胞中检测到HIV生长。HIV在Jurkat-tat细胞中生长情况最好。同时用病人血清直接感染Jurkat-tat和MT4细胞,4周后检测其细胞上清HIV-1P24抗原为阳性,但OD值很低。用  相似文献   

3.
研究了重组痘苗病毒表达的HIV-1核心蛋白(Gag)p17-p24蛋白的些生物学及免疫学特点。间接免疫荧光、Dot 及LISA及Western blot结果表明,构建的两株重组病毒分别表达了HIV-1Gap p24及p17-p24融合蛋白。电镜观察证实,Gag p24及p17-24重组蛋白均可形成病毒样粒子。重组病毒可诱导小鼠产生抗HIV-1Gap p24抗体。重组病毒感染BHK21细胞后,可见由  相似文献   

4.
邢辉  戴玉琳 《病毒学报》2000,16(2):111-115
上海市卫生检疫局送检了一例HIV-1和HIV-2抗体检测均呈阳性的双重感染样品,对其感染的HIV前病毒的gag和env基因区进行了序列分析,首次阐明我国发现的HIV双重感染样品的HIV部分基因特征。从HIV感染者淋巴细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中提取前病毒DNA,分别使用HIV-1和HIV-2特异性引特用套式PCR扩增HIV-1和HIV-2  相似文献   

5.
用聚合酶链式反应(PCR)从HIV 1gag基因中扩增出衣壳蛋白P24截短体(tP24)基因,插入质粒pGEX 4T3中构成重组表达质粒pGEX tp24,将pGEX tp24转化大肠杆菌BL21后获得了高效表达,表达量占菌体总蛋白量的3438%。经Glutathione-Sepharose4B亲和层析纯化的截短体P24纯度为9277%。纯化的截短体P24在间接ELISA和免疫印迹检测HIV抗体阳性血清和正常人血清中,具有很高的抗原特异性和免疫反应性。  相似文献   

6.
叶萍  李燕 《病毒学报》1998,14(3):215-220
将Epstein-Barr病毒(EBV)膜抗原(MA)BLLF1基因,插入含有CMV启动子的真核表达载体pcDNA3下游BamHI位点,构建成真核表达质粒pcDNA3-MA。将纯化的DNA注射Balb/c小鼠股四头肌。经免疫的动物产生抗EB病毒MA特异性的抗体和中和抗体,依赖抗体细胞介导的细胞毒作用(ADCC),特异性T淋巴细胞增生性反应及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤作用。基因免疫与基因-蛋白  相似文献   

7.
HIV—1 SF2株env基因(120)在大肠杆菌中的表达   总被引:3,自引:0,他引:3  
王斌  邵一鸣 《病毒学报》1996,12(1):18-22
运用基因重组技术,将HIV-1 SF2株编码外膜蛋白gp120的env基因片段与原核载体pBV220进行重组,构建成质粒pBVSF2env,并在大肠杆菌(E.CoilDH10b)中获得表达,经Westemblot反应证实,该重组蛋白与来自HIV-1感染者的血清(含多克隆抗体)发生特异性反应。  相似文献   

8.
应用抗HIV-1Rev单链抗体细胞内免疫方法,研究在人T细胞和周围血淋巴单核细胞内抗病毒复制的效果,探讨细胞内免疫抗HIV-1基因治疗的可行性。克隆抗HIV-1Rev单链抗抗体(sFv)基因,以逆转录病毒为基因载体,将名装后的含靶基因的逆转录病毒转导至人CD4阳性T-细胞株CEM和SupT1,以及HIV-1阴性自愿者的周围血淋巴单核细胞(PBMC),再分别用不同剂量(MOI)的HIV-1病毒株PN  相似文献   

9.
将含有鸡传染性支气管炎病毒 S1 基因c D N A 的重组转移质粒p S X I V V I+ X3 S1 . Holte 和p S X I V V I+ X3/4 S1 . Holte 分别与粉纹夜蛾核型多角体病毒 Tn N P V S V I- G D N A( O C C- ,gal+ ) 共转染草地夜蛾( Sf9) 细胞,经空斑纯化得到重组病毒 Tn N P V( X3) S1 . Holte O C C+ 和 Tn N P V( X3/4) S1 . Holte O C C+ 。将重组毒株分别感染 Tn5 B1 细胞,并进行 S D S P A G E 与 Westernblot 检测。结果表明, Tn N P V( X3/4) S1 . Holte O C C+ 在感染的细胞中高效表达了 S1 蛋白, S D S P A G E 凝胶薄层色谱分析结果显示,感染病毒后72 h S1 蛋白的表达量占细胞内总蛋白量的35 .8 % ,而 Tn N P V( X3) S1 . Holte O C C+ 感染的细胞内检测不出 S1 蛋白。经分析认为这一差异主要来自 S1 基因翻译起始位点及其附近的周围环境。  相似文献   

10.
人巨细胞病毒的分子克隆及其特异性DNA探针的制备   总被引:6,自引:0,他引:6  
王柳  刘学礼 《生物技术》1994,4(4):33-35,5
从人巨细胞病毒(HCMV)培养物中提取HCMV并抽提其DNA,经限制性内切酶BamHI完全消化后,与质粒pBluescript-SK重组建立了HCMV的DNA文库,从此文库。中随机筛选出两个重组质粒(pCMV-1和pCMV-2),用BamHI分析证明其中所含的病毒DNA片段的大小分别为1.0kb和7.5kb,将这两种质粒大量扩增纯化后,用光生物素进行标记作为探针,证明其只与HCMV反应,与正常人细胞DNA及Ⅰ型和Ⅱ型单纯疤疹病毒DNA无交叉反应。  相似文献   

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