大头蛙4个Dmrt基因DM保守区的序列分析

Dm rt基因家族是新近发现的一个与性别决定相关的基因家族。该家族成员编码的蛋白质都含有一个具有DNA结合能力的保守基序?DM结构域,在性别决定和分化发育的调控中担负重要的功能。采用简并PCR技术扩增了大头蛙Dm rt基因的DM结构域,经序列分析,获得了Dm rt基因家族的4个成员LfDm rt1a,LfDm-rt1b,LfDm rt3,LfDm rt5。与其它动物相关的Dm rt基因进行氨基酸序列聚类分析,结果表明,不同进化地位动物的Dm rt基因DM域编码序列存在高度的同源性,显示Dm rt基因在系统进化上高度保守,序列上的相似性可能暗示它们在功能上的保守性。     

饰纹姬蛙7个Sox基因的克隆及序列分析

采用简并PCR技术,扩增了饰纹姬蛙Sox基因的HMG-box保守区,结果显示其长度和人SRY基因扩增片段大小一致,为220bp左右,且雌雄无差异.经SSCP分析,获得了7个基因(MoSox1、MoSox2a、MoSox2b、MoSox4a、MoSox4b、MoSox12a和MoSox12b),并与进化地位不同的其他动物相关的Sox基因进行了聚类分析.为蛙类性别决定机制的探讨和SOX基因的进化保守性分析提供了分子资料.     

山地麻蜥7个Dmrt基因成员的克隆及序列分析

Dm rt基因家族是一个与性别决定相关的基因家族。该家族成员都含有一个具有DNA结合能力的保守基序———DM结构域,在性别决定和分化发育的调控中担负着重要的功能。本文采用简并PCR技术,扩增和克隆了山地麻蜥(Erem ias breuchleyi)基因组中的DM结构域,通过SSCP技术筛选和测序得到了7个具有不同DM序列的克隆。结果显示,在山地麻蜥基因组中存在着Dm rt基因家族的多个成员,与其他动物相关的Dm rt基因进行聚类分析,显示该基因家族在动物系统进化上具有高度的保守性。     

饰纹姬蛙的早期胚胎发育

本文报道了饰纹姬蛙的早期胚胎发育。自受精卵期到出水孔完善期共分２５个时期，其发育进程及各时期胚胎的外形特征与四川狭口蛙基本相似，但其胚胎孵化的迟早差距较大。在水温２１±０．５℃和２４±０．５℃条件下，其胚胎发育的全过程历时分别为７６ｈ５６ｍｉｎ和６１ｈ５２ｍｉｎ。     

饰纹姬蛙的人工驯养与繁殖

2015年7月—2017年5月,对饰纹姬蛙Microhyla fissipes的人工驯养体系(饲养环境和饵料选择等)和繁殖(繁殖行为和人工催产等)开展了相关研究。观察发现,饰纹姬蛙繁殖期为3—10月,其中,5—8月为繁殖高峰期;同一对亲本每年可繁殖5次,2次繁殖间隔时间最短为16 d;卵团含卵量为15~1 100枚(310枚±203枚,n=98),与雌性亲本的体质量显著正相关(R~2=0.44,P0.001,n=76)。在人工驯养过程中初步建立了良好的饲养管理体系,其中饵料体系是"熟蛋黄-螺旋藻粉(饲喂蝌蚪)-跳虫(饲喂刚变态的幼蛙)-残翅果蝇(饲喂亚成体和成体蛙)",同时获得了饰纹姬蛙人工催产的最佳实验条件。该成果不仅可为饰纹姬蛙的研究工作提供适宜的实验材料,促进该物种的模式化进程,也可为无尾两栖动物的实验室驯化提供参考。     

中国大鲵 Dmrt 基因 DM 结构域的克隆及序列分析

Dmrt 基因家族是一个与性别决定相关的基因家族,该家族成员共有一个具有 DNA 结合能力的保守基序-DM 结构域。为了进一步探讨该家族在系统进化中的保守性,本研究通过简并 PCR 技术,扩增并克隆了中国大鲵（Andrias davidianus）基因组中的 DM 结构域。序列分析显示,中国大鲵基因组中存在 Dmrt 基因的 DM 结构域。其核酸序列与猕猴、青鳉、人、小鼠、牛、热带爪蟾相应 Dmrt 基因 DM 结构域的相似性分别为 91%、92%、92%、89%、91%、84%。其蛋白序列与上述物种的相似性均为91%,表现为4个氨基酸的变异。即第 19、34、36 和 45 位的精氨酸分别由半胱氨酸、谷胱酰胺、色氨酸和谷胱酰胺所取代。这些氨基酸的变化对其蛋白总体的三维构型没有显著影响。聚类分析结果表明,不同进化地位物种的 Dmrt 基因 DM 结构域编码序列存在高度的同源性,显示 Dmrt 基因在系统进化上的高度保守。     

温度对饰纹姬蛙蝌蚪生长的影响

为揭示温度对饰纹姬蛙(Microhyla fissipes)蝌蚪生长的影响,将同一家系发育至28期的45只蝌蚪随机均分为3组,每组15只,分别置于水温25、28、30℃条件下饲养,测定其全长、体宽、眼距、吻长及头体长5项形态指标,分析不同温度下各项形态指标的变化。结果显示,5项形态特征有基本一致的变化趋势,其中全长最易表征蝌蚪的生长状况。从全长看,25℃组蝌蚪生长发育缓慢,但在12 d后有加快的趋势;30℃组在饲养第3~12 d,生长最迅速(增长率β=50.05%),但在12 d后生长明显变缓(β=9.42%),而到28 d时,已有较多蝌蚪死亡(5/15);28℃组的蝌蚪生长发育态势最好,且在饲养第28 d均超过30℃组,其在3 d后加快的生长趋势也强于25℃组。其他4项指标与全长有类似的结果。综合结果分析表明,30℃下蝌蚪在后期(21 d后)的成活率明显降低,而25℃下其生长缓慢,提示28℃是饰纹姬蛙蝌蚪比较适合的饲养温度。     

大熊猫Dmrt基因家族4个成员基因的克隆

果蝇Doublesex基因、线虫Mab-3基因和人类DMRTI基因均含有一个新的具有DNA结合能力的保守基序,即DM结构域。它们在性别决定和分化发育的调控过程中具有相似的功能。通过简并PCR克隆技术,扩增和克隆了大熊猫基因组中的DM结构域,得到了4个具有不同DM序列的克隆。结果显示,在大熊猫基因组中存在Dmrt基因家族的多个成员。该基因家族在脊椎动物和非脊椎动物都具有高度的进化保守性。     

饰纹姬蛙的两性异形及雌性繁殖能力

用采自云南省西双版纳傣族自治州勐腊县的53只(28♂♂,25♀♀)成体饰纹姬蛙(Microhyla fissipes),测量全部个体的体长、头长、头宽、体重等16项形态特征和雌体怀卵量数据,通过独立样本t检验和协方差检验该物种所有形态特征的两性差异,进而采用线性回归方法分析雌雄成体局部形态特征与体长的相关性,以及雌性成体怀卵量与局部形态特征的相关性。结果表明,饰纹姬蛙平均体长雌性为(25.08±0.40)mm,雄性为(24.78±0.31)mm,体长和体重在雌雄两性间差异不显著(P> 0.05),两性个体大小基本同形。该蛙的所有局部形态特征与体长均存在极显著正相关性(P <0.01);雌雄两性间只在头宽和前臂及手长这两个形态特征上存在显著差异(P <0.05),且随体长的增大其生长速率也存在显著差异。雌性成体的怀卵量与体长、体重、眼间距、前臂宽、胫宽和跗足长均存在显著正相关性(P <0.05),且与体重存在极显著正相关性(P <0.01)。分析认为,饰纹姬蛙成体两性异形主要表现在头宽和前臂及手长,与生存竞争中对食物的获取能力及雄性争夺交配权的成功率有关;而...     

饰纹姬蛙求偶鸣声特征分析

2012年5月,用SX950录音笔和Praat声音分析软件对浙江丽水繁殖季节饰纹姬蛙(Microhyla ornata)求偶鸣声进行录制和特征分析.结果表明,饰纹姬蛙发出的求偶鸣声具有单一谐波鸣声结构、多脉冲(7、9～16)及纺锤形振幅等特征;所有鸣声主频率范围为1.22～4.09 kHz (n=233),且由不同脉冲数组成的鸣声主频率平均值几近相等;叫声时程随脉冲数的增加而增大,脉冲时程在不同脉冲数鸣声中的大小几近相等,但最后一个脉冲的时程大小≤其他脉冲;脉冲间隔与叫声时程则刚好相反,即叫声时程越短,脉冲间隔就越大.在7个脉冲的鸣声中,其脉冲间隔最大,脉冲率最小;而在16个脉冲的鸣声中,脉冲间隔则最小,脉冲率最大.除7个脉冲和16个脉冲鸣声的脉冲率分别与其他鸣声存在显著性差异以外,随着叫声时程和脉冲数的增加,脉冲率也出现相应变化.在声强方面,除16个脉冲鸣声与其余所有的脉冲鸣声出现显著性差异以外,其他脉冲鸣声之间的两两比较差异不显著.丽水种群与其他5个地理种群(杭州、宣城、Kamoor、Bajipe和Padil)的鸣声特征比较显示饰纹姬蛙在不同地理种群的鸣声结构相似,而鸣声主频率、叫声时程、脉冲时程及脉冲率等在6个地理种群种均出现不同程度的差异.了解不同物种的声信号特征有助于更好地理解动物通讯行为及其进化特点.     

赤子爱胜蚓5个Dmrt基因的序列分析

本文采用简并PCR技术,扩增了赤子爱胜蚓Dmrt基因的DM结构域,经序列分析,获得了Dmrt基因家族的5个成员EfDmrt2、EfDmrt3、EfDmrt4a、EfDmrt4b、EfDmrt4c.与其他动物相关的Dmrt基因进行聚类分析,结果表明,不同进化地位动物的Dmrt基因DM域编码序列存在高度的同源性,显示Dmrt基因在系统进化上高度保守,序列上的相似性可能暗示它们在功能上的保守性.     

江豚Sry基因和Dmrt家族六个基因的序列分析

Sry基因是哺乳动物性别决定的开关基因,其功能是调控下游Dmrt、Sox3、Sox9等基因来启动性别的分化过程。Dmrt家族是一个在性别决定和分化发育中具有重要功能的基因家族,该家族成员都含有一个具有DNA结合能力的保守基序-DM结构域。本文通过PCR及克隆获得了江豚的Sry基因全序列;通过PCR-SSCP法筛选获得了江豚的Dmrt家族六个不同DM序列。结果显示,雄性个体中存在Sry基因,而Dmrt基因在雌雄个体中都有,与其他动物相关基因进行聚类分析,显示它们在进化上具有高度的保守性。     

赤链蛇Sox基因的克隆及序列分析

参照人SRY基因HMG-box保守区的序列,设计一对兼并引物,采用PCR技术扩增了赤链蛇的Sox基因,并对扩增产物进行了克隆和测序,结果在雌雄个体中共筛选出三个Sox基因,其中有一个为雌雄共有,显示出性别差异性;三个Sox基因编码的氨基酸序列与人相应SOX3,SOX4,SOX22基因的相似性分别为96%,98%,96%。显示出Sox基因在进化上的高度保守性,本文为赤链蛇的性别决定机制研究提供了分子资料。     

Changes in Polyamine Contents Development of the Frog, Microhyla ornata

Putrescine, spermidine and spermine levels were measured during development, metamorphosis and adult life of the frog, Microhyla ornata . Development of Microhyla was accompanied by high fluctuating levels of putrescine and spermidine with low and steady levels of spermine. Putrescine was the major polyamine during development from egg to mature tadpole. During metamorphosis both putrescine and spermidine decreased significantly; but the decrease in putrescine content was more rapid than that of spermidine. Thus, in the freshly metamorphosed frog, the concentration of spermidine exceeded that of putrescine. In most of the adult tissues also spermidine concentration was higher than putrescine and spermine. While the free form of putrescine and spermidine increased during early development of the fertilized egg to tadpole, the levels of protein conjugated polyamines decreased. In the free form, putrescine was the major polyamine while in the protein conjugated form spermidine concentration was higher than putrescine and spermine. Thus polyamine pattern is different in early development, during metamorphosis and in differentiated adult tissues of this frog. ∞-Difluoromethylornithine treatment at early blastula stage did not interfere with the normal development of Microhyla embryos.     

粤北山区饰纹姬蛙胚后发育的初步观察

初步观察记录了饰纹姬蛙Microhyla ornata胚后发育过程。饰纹姬蛙的卵采于广东韶关小坑国家森林公园,置于人工实验缸中自然孵化,在23.0～28.7℃水温条件下观察饰纹姬蛙蝌蚪胚后发育的过程。该蛙的胚后发育可以分为19期,历时31.1d,对其后肢芽、趾、前肢的发育,以及肛管及尾的变化等方面做了系统的描述,饰纹姬蛙蝌蚪的头长、体长、尾长和后肢长度随发育时间的增加而显著增长。     

杀虫剂敌敌畏和除草剂丁草胺对饰纹姬蛙蝌蚪的急性毒性实验

采用静态换水法研究了杀虫剂敌敌畏、除草剂丁草胺对饰纹姬蛙(Microhyla ornata)蝌蚪的急性毒性影响。结果表明,杀虫剂敌敌畏对饰纹姬蛙蝌蚪的24-h、48-h的半致死浓度(LC50)分别为3．91μl／l和1．97μ/l;除草剂丁草胺对饰纹姬蛙蝌蚪的24-h LC50和48-h LC50分别为3．37μl／1和1．88μl／1,饰纹姬蛙蝌蚪对丁草胺的敏感性稍大于敌敌畏。