一种提取动物基因组总DNA的野外样品保存方法

为了确定一种方便的野外动物样品保存方法,以新鲜材料作对照,从-20℃冰箱、70%乙醇、含50mmol/L EDTA的70%乙醇、95%乙醇、液氮处理的高原鼠肌肉和肝脏组织中提取基因组总DNA。通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计对提取的基因组总DNA质量进行检测。结果显示:相同处理的肝脏DNA产量大,肌肉组织提取的DNA质量好;各种保存方法提取的DNA降解程度依次为,-20℃冰箱、70%乙醇>含50mmol/L EDTA的70%乙醇、95%乙醇>液氮>新鲜。选择新鲜肌肉和95%酒精处理的肌肉样品提取的总DNA作模板,进行微卫星PCR扩增,均可获得清晰的电泳带。将该方法用于高原鼢鼠,进行线粒体12S rRNA、Cytb和D-loop区测序,结果显示该方法保存的样品与新鲜样品没有差别。因此,在野外用95%乙醇固定肌肉样品是一种可行的样品保存方法。     

基于AFLP分析用吴茱萸叶高质量DNA的提取

目的：研究吴茱萸叶基因组DNA的提取方法,以用于扩增片段长度多态性（AFLP）分析。方法：设计了一种改良CTAB法：以石英砂代替液氮研磨;抽提前用不溶性PVP结合酚形成络合物,然后用缓冲液除去;抽提中加入Vc。将改良CTAB法所提吴茱萸叶DNA与传统的SDS法、CTAB法所提DNA进行比较。利用植物的核糖体DNA（rDNA）保守序列设计引物行PCR扩增鉴定吴茱萸DNA及其质量。并确定提取方法中最佳样本含量和β-巯基乙醇浓度。结果：改良CTAB法提取石虎、疏毛吴茱萸总DNA呈白色,A260/A280为1.721~1.886,DNA分子完整,约20kb左右,PCR扩增条带清晰、明亮,无杂带和脱尾。并确定0.10g为最佳样本量,2.0%为最佳β-ME浓度。结论：石英砂研磨简便、迅速、均匀,该实验所建立的改良CTAB法可有效避免次生代谢物的氧化褐变,是一种小量、快速提取吴茱萸叶DNA优化方法。     

狗獾粪便DNA提取方法的初步探讨

在京杭大运河扬州段堤坝上采集狗獾的新鲜粪便,采用预处理-酚/氯仿抽提法、NaCl改良法、异硫氰酸胍裂解法、淀粉吸附法及QIAamp试剂盒法5种方法对粪便样品中狗獾DNA进行提取,探讨狗獾粪便样品中DNA提取方法和优化条件。结果表明,在5种提取方法中,淀粉吸附法的效果明显优于其它4种方法。采用粪便裂解液快速裂解细胞后,加入淀粉去除其中的大量PCR抑制物,然后用蛋白酶K裂解、酚/氯仿/异戊醇抽提,最后使用UNIQ-10柱纯化粪便DNA,对线粒体控制区和微卫星位点的PCR扩增反应及测序结果证实该方法的可行性。以上结果表明,通过该方法获得的粪便DNA能够用于更深入的分子遗传学等学科的研究。     

一种简单有效且适于土壤微生物多样性分析的DNA提取方法

参照Zhou[11]的方法进行了改进,获得了一种简单、有效的DNA提取方法.此方法操作简单、从大量样品改为小量样品的提取,利用高浓度的PEG沉淀,不作回收纯化,所提DNA片段较大,在23 kb以上,每克土的DNA提取量从3.74～15.28 μg,OD260/OD230比值在0.89～1.21范围内,用真菌和细菌核糖体特异性引物进行PCR扩增,均获得较好的结果,DGGE图谱显示丰富性较高,可用于细菌多样性和真菌多样性的分析.此方法能够从4种不同性质土壤中提取出DNA,但提取盐渍土壤和碱性土壤的效果更好一些,为土壤微生物群落结构的多样性分析奠定良好的基础.     

一种适用于RAPD分析的微量山茶DNA提取方法的建立

为建立一种满足RAPD-PCR分析的简便且高产率微量山茶基因组DNA提取方法,探索了在无液氮条件下,采用简化试验步骤的改良CTAB、SDS和Triton X-100方法分别提取山茶新鲜和干燥叶片DNA,通过光谱扫描和测定DNA在波长230 nm,260 nm和280 nm时的吸光度,比较不同DNA提取方法、材料保存方法以及材料用量对DNA提取效率的影响。结果表明,干燥叶片比新鲜叶片更适合作为DNA提取材料,改良CTAB法在提取干燥山茶DNA时纯度和产率较理想,其A260/A280值为1.595-1.736,每克叶片可得到230-295μg DNA,高质量DNA经RAPD-PCR扩增可获得清晰扩增条带。100 mg干燥山茶叶片适合获得高纯度和高产率的DNA,增加材料用量可增大DNA总量,但也增加了DNA中杂质含量。     

松突圆蚧基因组DNA提取方法的比较

分别采用醋酸钾(KAc)法、十二烷基硫酸钠-蛋白酶K(SDS-PK)消化法、十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法及DNA提取试剂盒(吸附柱型)对单只松突圆蚧的基因组DNA进行提取。同时针对盾蚧科昆虫的特点,在提取前利用氯仿和解剖针去除样品表面的介壳。结果表明,用同种提取方法提取的经氯仿处理与未经处理样本的提取效果无明显差异,而采用解剖针去除介壳的样本提取效果较好。所采用的4种提取方法均能从新鲜标本中提取出DNA,其中CTAB法提取的DNA量较多,而SDS-PK法提取的DNA质量较好。     

风沙土微生物总DNA不同提取和纯化方法比较

为筛选和建立风沙土中总DNA的提取和纯化方法,选取了5种直接提取法、1种间接提取法和2种纯化法分别对风沙土中总DNA进行了提取和纯化,并对其质量和产量进行了比较.结果表明：6种方法均可从风沙土中提取到大小为23 kb左右的总DNA,其中改进后的高盐提取法（用40%聚乙二醇8000和4 mol·L^-1 NaCl沉淀DNA）效果最好,纯化后总DNA的纯度最高,可进行16S rDNA的PCR扩增,且产量仅稍低于试剂盒提取法;电泳加柱回收纯化法的纯化效果较好,经该方法纯化后的总DNA大部分可进行PCR扩增,可满足后续分子操作对DNA纯度的要求.       

油气田土壤DNA提取方法及油气指示菌基因定量结果的比较

采用4种提取方法对油田上方6个土壤样品微生物总基因组DNA进行提取,并比较了其纯度和浓度。利用定量PCR技术定量分析各土壤中甲烷单加氧酶基因（pmoA）和丁烷单加氧酶基因（brnoX）。与DNA试剂盒法相比,玻璃珠击打法、液氮研磨法、反复冻融法得到DNA纯度较低,需纯化才能进行后续的PCR扩增。液氮研磨法得到的DNA完整性、纯度和得率较其他提取方法均较好,尤其对于生物量较少的深层油田土壤DNA提取较为实用,成本较低。甲烷单加氧酶基因（pmoA）和丁烷单加氧酶基因（bmoX）的定量PCR结果表明,液氮研磨法提取DNA样品的定量结果在气区和油区均出现一定的高值。液氮研磨法较其他方法更适合于油田土壤DNA的提取。下一步研究可以把丁烷氧化茵作为油气指示茵研究中的重点检测对象。     

丝状真菌组织DNA的提取

用CTAB法直接从丝状真菌的新鲜菌丝中提取DNA,并将所提取DNA进行随机引物多态性扩增(RAPD),得到了较清晰的扩增图谱,证明该法为提取真菌DNA以用于分子生物学研究的一种有效方法。     

不同预处理方法影响昆虫干标本DNA提取效果

为从昆虫干标本中获取高质量DNA,以利于后期PCR扩增目的基因,本研究对DNA提取前昆虫干标本的预处理方法进行探讨,分别测定其纯度和质量,并用不同引物进行了扩增效果对比。结果显示:经过预处理的样品DNA平均含量均高于CK的52.283 ng/滋L,最高为0.9%Na Cl处理3 h,平均含量达122.632 ng/滋L;米象4种预处理方法提取的DNA利用引物Lco1490/Hco2198及UEA7/UEA10均能扩增出650 bp长度条带,仅有0.9%Na Cl溶液浸泡3 h处理的米象可通过引物J173/J1331扩增出1 000 bp的长片段条带。研究表明,经过预处理后,一定程度上减少了基因组DNA的断链,主要对样品DNA的质量浓度影响显著;以9%Na Cl溶液3 h预处理后的昆虫干标本,利用磁珠法所提DNA的质量及PCR扩增效果最佳。     

金丝小枣基因组DNA的优化提取方法

采用SDS和CTAB两种方法分离提取金丝小枣基因组DNA,并比较其提取效果。结果表明,改进后的CTAB法可获得高质量、高得率的基因组DNA,可用于金丝小枣的各种分子生物学研究。     

烘干温度和时间对灰枣品质特征的影响

为考察不同干燥条件下灰枣品质差异，筛选合适的制干温度、时间，为灰枣热风干燥提供基础理论数据和技术参考，本研究以采后灰枣为试材，测定不同干燥温度（45 ℃、55 ℃、65 ℃、75 ℃）、不同干燥时间（4 h、6 h、8 h）下灰枣外观品质及内在品质等相关指标，并综合评价制干果实的品质。结果表明：（1）在45 ℃、55 ℃、65 ℃处理4 ~6 h下灰枣表皮颜色较亮、内部褐变不明显、感官评价得分较高、果实纵横径差异不大，而随着干燥温度升高和时间延长，灰枣果实的表皮颜色慢慢由明到暗，红色褪去，黄色变深及皱缩现象明显、内部褐变较严重、口感风味变差。 （2）在65 、75 ℃持续处理6~8 h条件下，灰枣制干黄酮、总酚、可溶性糖、可滴定酸含量较高，但65 ℃/8 h、75 ℃/6 h、75 ℃/8 h处理下表皮颜色、内不褐变、感官评价、果形指数指标表现较差。（3）通过主成分分析综合得出采后灰枣最佳烘干温度和时间为45 ℃/4 h。     

引起滇刺枣褐斑病的拟茎点霉属一新种

报道引起滇刺枣褐斑病的拟茎点霉新种——滇刺枣拟茎点霉Phomopsis mauritiana。新种的载孢体近球形,甲型分生孢子椭圆形或披针形,形态及大小有别于同属植物上已知的3种拟茎点霉。     

大枣中氨基酸类成分的薄层色谱分析

中药大枣中含有多种氨基酸类成分,建立大枣中主要氨基酸类成分的薄层色谱鉴定方法,为大枣的相关研究提供依据。采用薄层色谱法对大枣中氨基酸类成分进行定性鉴别,本法操作简单,重复性好,特征明显,可以作为大枣中四种氨基酸的薄层色谱鉴别依据。     

枣树干腐病病原菌的鉴定

对山西省枣树上发生的一种新病害进行了调查和病菌分离与培养研究。通过形态学特征观察和rDNA ITS序列分析,证明该病菌为葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea的无性阶段Fusicoccum aesculi。     

Palynological characterisation of sedra honeys (Ziziphus lotus) produced in Algeria

Abstract

A melissopalynological study was carried out on 46 samples of Ziziphus lotus honey from Laghouat and Djelfa region (central Algeria). The number of pollen types identified per honey sample ranges between nine and 39 with a mean of 24. These correspond to 52 botanical families with 79 different pollen types in the whole samples. Asteraceae and Fabaceae families were present in all the samples where as Apiaceae, Brassicaceae and Nitrariaceae (Peganum harmala) were identified in more than 90%. Other plant families as Boraginaceae, Cistaceae, Myrtaceae, Oleaceae, Salicaceae or Urticaceae were identified in more than 50% of the samples but frequently as minor pollen. Ziziphus lotus pollen had a mean content of 68.9% (with a range of 45.3% to 93.4%). The secondary pollen types were Ononis natrix, Peganum harmala, Brassica napus, Echium and Olea europaea. Regarding the important pollen it is highlighted the presence Lotus t., Eucalyptus, Pimpinella anisum t., Trifolium t., Eryngium campestre t., Centaurea t., Galega officinalis t., Citrus or Scrophularia t. The sedra honeys of the studied region are characterised by their high content in pollen grains with a mean content of 188 403 grains/10 g. The presence of some pollen types in the pollen spectra of honeys such as Peganum harmala, Thapsia garganica, Launaea, Muscari comosum, Carthamus or Limonium bonduellei together several Asteraceae as Centaurea, Taraxacum, Carduus, Artemisia and Matricaria was proposed as geographical markers of this honey type.     

枣属植物化学成分研究新进展

为充分开发利用枣属药用植物资源,本文归纳总结了近6年来该属植物化学成分研究的进展情况,新发现的成分主要是环肽生物碱类、三萜类、黄酮及其苷类等,均具有一定的药用价值。     

Phytochemical and chemotaxonomic study on Ziziphus Jujuba Mill. (Rhamnaceae)

Fourteen compounds were isolated from fruits of Ziziphus jujuba Mill., including two flavonoids (1–2), one phenolic glycosides (3), one lignan (4), four phenols (5–8), three alkaloid (9–10, 14), three sesquiterpenoid (11–13). The structures of all the compounds were established by the NMR techniques, as well as by comparison with previously reported data in literature. Compounds 2″-glucosyl-8-C-glucosyl-4′-O-methylapigenin (1), 3′, 4′, 5′-trimethoxycinnamyl alcohol (5), 2-{4-[(1E)-3-Hydroxyprop-1-en-1-yl]-2, 6-dimethoxy-phenoxy}propane-1, 3-diol (6), 1-(4-Hydroxyphenyl)ethane-1, 2-diol (8), (1S, 3S)-1-Methyl-l, 2, 3, 4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid (9), (1R, 3S)-1-Methyl-l, 2, 3, 4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid (10), grasshopper ketone (12), methyl (3R, 5R)-5-methoxy-3-phenylisoxazolidine-5-carboxylate (14) were firstly reported from the genus Ziziphus and the family Rhamnaceae. Furthermore, the chemotaxonomic significance of the isolates was discussed.     

用RAPD技术探讨中国枣的种下划分

利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对14个枣Ziziphus jujuba 品种和1个野生种——泰山酸枣Z．spinosus的遗传变异进行了研究。从120个10-碱基随机引物中筛选出37个多态性引物用于正式扩增,共扩增出429条DNA带,其中多态性带214条,占49．88％。根据DNA扩增结果计算了品种及类型间遗传距离,并用UPGMA构建了聚类树状图。分析结果表明：龙爪枣 Z．jujuba var．tortuosa、葫芦枣 Z. jujuba var．lageniformis、无核枣 Z.jujuba var．anucleatus 等几个变种内的遗传距离大于变种间遗传距离,认为枣的变种划分是不自然的,宜并入其原变种;枣种下不宜设变种,对枣种下的众多品种,应根据品种间的遗传关系,直接划分品种群。     

超声波法提取大枣多糖工艺的优化

为了进一步提高大枣多糖的提取效率,本文通过正交试验优化了超声波法提取大枣多糖的工艺条件。考察的因素包括料液比、超声功率、超声时间和浸提温度。结果显示超声波法提取大枣多糖的最佳提取工艺条件为:料液比1∶30、超声功率80W、超声时间10min,浸提温度80℃。在此工艺条件下大枣多糖的提取率达到6.97%。该工艺条件下提取率较高,因此适合于提取大枣中的多糖类化合物。