首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到10条相似文献,搜索用时 15 毫秒
1.
精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)在精子的运动和存活等生理活动中起着重要的作用. 研究表明,LDH-C4接种鼠、兔等能够降低动物的生育率.通过RT-PCR方法从布氏田鼠睾丸总RNA中克隆出编码抗原决定簇的LDH-C4基因片断;采用T-A克隆的方法将其插入到pCR3.1载体中构建重组载体pCR3. 1-bvLDH-C′4,测序结果表明克隆的基因片断与已知小鼠相应片断有83%的序列同源.通过质脂体法转染HeLa细胞,RT-PCR证实其可在mRNA水平有效表达;通过肌肉接种BALB/c小鼠,RT-PCR结果表明其在体内也可有效表达.  相似文献   

2.
目的克隆人生长抑制因子家族(inhibitor of growth famility member4,ING4)基因,构建其真核表达载体pEGFP—ING4。方法提取人胎盘总RNA,经RT—PCR扩增出ING4 cDNA,克隆至pEGFP—C2载体,构建的真核表达载体pEGFP—ING4用双酶切、基因测序进行序列鉴定;转染MCF-7细胞用荧光显微镜和免疫组化检测重组质粒的表达。结果RT—PCR产物为750bp的条带,双酶切和基因测序正确,转染可见目的蛋白融合表达。结论从人胎盘组织中成功克隆了ING4基因并构建其真核表达质粒在人MCF-7细胞中表达,为进一步研究1NG4基因的作用及抗肿瘤机制奠定了基础。  相似文献   

3.
为了克隆关岭牛MyoD玉基因启动子并验证其启动活性,根据GenBank中牛的MyoD玉基因序列设计PCR引物,用PCR技术扩增牛MyoD玉基因的启动子,构建重组克隆载体pUCmT-MyoD玉;并通过PCR扩增、限制性酶切、测序及生物信息学分析对阳性克隆进行鉴定;构建报告质粒pGL3-MyoD玉,并将其转染小鼠C2C12、3T3-L1细胞系,检测其24 h后的双荧光素酶活性。实验结果获得了关岭牛MyoD玉基因启动子,其序列长度为993 bp,并成功构建了MyoD玉启动子报告质粒;双荧光素酶活性检测表明pGL3-MyoD玉在小鼠C2C12细胞中的表达是pGL3空载体40.65倍,在小鼠3T3-L1细胞中的表达是空载体的1.13倍,MyoD玉启动子在小鼠C2C12细胞中的表达高于3T3-L1细胞(**p<0.01)。结果表明关岭牛MyoD玉基因启动子具有启动活性,在小鼠骨骼肌细胞中特异性表达。  相似文献   

4.
目的:表达并纯化有活性的GST—Cdc25C融合蛋白,以用于Cdc25C功能研究。方法:利用RT—PCR克隆MCF-7细胞的cdc25e全长基因;在大肠杆菌中表达GST—Cdc25C融合蛋白;利用GSH交联的琼脂糖珠纯化GST—Cdc25C融合蛋白;通过体外磷酸酶活性分析检测GST—Cdc25C融合蛋白的磷酸酶活性。结果:克隆获得1465bp的人源cdc25c全长基因,并克隆至pGEX-4T-1原核表达载体;在原核系统中可溶性表达了相对分子质量约87x10。的GST—Cdc25C融合蛋白;通过亲和纯化获得的GST—Cdc25C融合蛋白具有较好的磷酸酶活性。结论:得到了有磷酸酶活性的GST—Cdc25C融合蛋白,可用于后续的Cdc25C功能研究。  相似文献   

5.
本文报告小鼠GDP岩藻糖:β半乳糖苷α1,2-岩藻糖基转移酶(α1,2-fucosyltansferase,α1,2-FT)基因的克隆,并进行功能鉴定。利用RT—PCR方法克隆小鼠α1,2-岩藻糖基转移酶基因编码区MFUT-II,测序后将其插入表达载体pcDNA3.1的多克隆位点,构建表达载体pcDNA3.1-MFUT-II;采用磷酸钙法将其转染于COS-7细胞进行表达,通过对底物特异性比较研究酶的性质;应用Northern印迹杂交法研究基因在小鼠组织中的表达情况;应用Southern印迹杂交法分析基因存在状态。结果证实MFUT-II为小鼠α1,2-岩藻糖基转移酶基因家族的新成员。含有一个完整的开放读码框。可编码347个氨基酸。其估计分子质量为39kDa,和小鼠日及Sec1基因具有序列同源性。分别与人类Se基因(79.O%)、大鼠Ratrrs(89%)基因、兔Rabbit FT-III基因(77%)具有较高的序列同源性。用MFUT-II基因转染的COS-7细胞具有α1,2-FT活性。MFUT-II可在多种组织中产生3.5kb大小的mRNA转录产物。基因Southern印迹杂交分析结果显示:基因MFUT-II仅为一个拷贝。这些结果证明MFUT-II为小鼠的Se基因。  相似文献   

6.
结核分枝杆菌furA基因真核表达质粒的构建及表达   总被引:1,自引:1,他引:0  
以BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切pRSET-furA,获得结核分枝杆苗铁调控基因furA,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),构建了重组质粒pcDNA-furA,经酶切鉴定正确后,将重组质粒以阳离子聚合物转染CHO细胞。经RT—PCR分析表明,furA可在CHO细胞中转录;用间接免疫荧光检测,表达有FurA蛋白的细胞着染。以上结果表明,通过构建结核分枝杆菌furA基因的真核表达载体pcDNA-furA,使知以基因可以在CHO细胞中表达。  相似文献   

7.
王辉  区裕升  沈晗  黄树林 《生物磁学》2014,(2):206-208,213
目的:构建pEGFP.C3-TCRBVl2—3表达载体并初步研究其抗肿瘤作用。方法:TCRBVl2—3基因片段从pGEM-T—TCRBVl2-3载体上酶切并克隆至pEGFP—C3载体中,通过脂质体将pEGFP—C3.TCRBVl2-3表达载体转染外周血单个核细胞(PBMCs),48小时后荧光显微镜观察转染效率。PBMCs细胞、pEGFP-C3载体转染的PBMCs细胞、pEGFP—C3-TCRBVl2-3表达载体转染的PBMCs细胞分别与肝癌细胞BEL-7402和宫颈癌细胞HeLa共培养24h,显微镜观察肿瘤细胞的生长情况。结果:测序证实TCRBVl2-3基因片段成功亚克隆至pEGFP—C3载体中,荧光显微镜证实重组体转染PBMCs细胞48h后可有效表达绿色荧光。显微镜观察发现pEGFP—C3-TCRBVl2-3载体转染的PBMCs对肝癌细胞有杀伤作用.但对宫颈癌杀伤作用不明显。结论:成功构建pEGFP—C3一TCRBVl2—3表达载体,初步证实TCRBVl2.3对肝癌细胞有杀伤作用。  相似文献   

8.
乙肝病毒X基因真核表达质粒及细胞模型的建立   总被引:1,自引:1,他引:0  
采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增HBVX基因,定向亚克隆入真核表达载体pRc/CMV2.构建重组质粒pCMV/X;采用脂质体法转染QSG7701细胞,筛选阳性细胞克隆;RT—PCR法检测HBV XmRNA的表达情况.Western blotting法鉴定HBx蛋白的表达,结果表明,构建的真核重组表达质粒pCMV/X中包含有完整的HBVX基因片断,pCMV/工转染的QSG7701细胞中有HBVXmRNA及HBx蛋白的稳定表达.成功建立了HBVX稳定转染的细胞系,为进一步探讨HBx在HCC的发生发展过程中所起的作用,提供了一个有价值的细胞模型.  相似文献   

9.
在活体小鼠中筛选IZP3基因RNAi有效靶位点的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
ZP3作为精子结合的靶对象在卵母细胞受精中起着关键作用,也因此而成为研究哺乳动物受精机理的焦点。本研究参照新疆草原兔尾鼠卵透明带3(zonapellucida3 gene of Lagurus lagurus,IZP3)的mRNA,选择了针对IZP3 mRNA的3个区域合成寡聚核苷酸连接到干扰载体pGenesil-1上,构建了3个针对IZP3 mRNA的重组干扰载体,和pCDNA3-IZP3表达载体采用脂质体法共转染Hela细胞以及通过尾静脉大容量快速注射法(Hydrodynamics—based transfection method,HD法)共注射小鼠,半定量RT—PCR和real—timePCR检测Hela细胞和小鼠肝脏中IZP3mRNA的表达情况,以筛选干扰IZP3mRNA的有效靶位点。结果表明,通过HD法共注射干扰载体和表达载体后,外源基因mRNA在小鼠肝脏中的表达和共转染Hela细胞后在Hel。细胞中的表达情况是一致的,有2个干扰载体可以有效干扰IZP3mRNA的表达。研究还说明,利用HD法以小鼠作为实验材料筛选RNA干扰的有效靶位点是一条切实可行的方法。  相似文献   

10.
目的克隆、体外真核表达载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3F(APOBEC3F)基因并研究其抗病毒效应。方法应用RT—PCR的方法从人PBMC细胞中扩增APOBEC3F基因,构建HA—APOBEC3F融合蛋白真核表达载体pXFA3F,pXFA3F和具有复制能力的1.3倍HBV载体pHBVl.3共转染HepG2细胞,Western印迹检测APOBEC3F融合蛋白在HepG2细胞中的表达,ELISA方法检测细胞培养上清液中的HBsAg和HBeAg水平,实时定量PCR检测HBV相关mRNA水平变化。结果克隆了APOBEC3F基因,其经测序与GeneBank公布序列一致;构建的APOBEC3F真核表达载体pXFA3F经转染可在HepG2细胞中瞬时表达;APOBEC3F可抑制乙型肝炎表面抗原和e抗原的分泌,可使转染细胞内HBV相关mRNA水平下降。结论成功克隆并真核表达了APOBEC3F基因,其在体外具有抗HBV生物学效应。  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号