L-山梨糖脱氢酶的纯化及性质的研究

从５Ｌ罐发酵Ｌ－山梨糖的Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ　ＳＣＢ３２９和Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　ＳＣＢ９３３混合菌株中差速离心收集ＳＣＢ３２９菌体,破碎,离心获得无细胞抽提液,硫酸铵分级沉淀蛋白后依次经ＤＥＡＥＣｅｌｌｕｌｏｓｅ ５２和Ｑ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ柱层析分离得到了Ｌ－山梨糖脱氢酶（ＳＤＨ）,它能将Ｌ－山梨糖脱氢氧化为Ｌ－山梨酮,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳测得分子量约为６０ＫＤ。动力学性研究表明它为一个典型的Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ－Ｍｅｎｔｅｎ氏酶,对Ｌ－山     

GENUS ANTROPHYUM KAULF.FROM CHINA AND NEIGHBORING REGIONS

ＧＥＮＵＳＡＮＴＲＯＰＨＹＵＭＫＡＵＬＦ．ＦＲＯＭＣＨＩＮＡＡＮＤＮＥＩＧＨＢＯＲＩＮＧＲＥＧＩＯＮＳＸ．Ｃ．ＺＨＡＮＧ（Ｔｈｅｈｅｒｂａｒｉｕｍ（ＰＥ）,ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｏｔａｎｙ,ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ,Ｂｅｉ...     

吸血蠓群落的地理分布

吸血蠓群落的地理分布ＧＥＯＧＲＡＰＨＩＣＡＬＤＩＳＴＲＩＢＵＴＩＯＮＯＦＢＬＯＯＤ－ＳＵＣＫＩＮＧＭＩＤＧＥＣＯＭＭＵＮＩＴＩＥＳ关键词吸血蠓群落,聚类分析,地理分布ＫｅｙｗｏｒｄｓＢｌｏｏｄ－ｓｕｃｋｉｎｇｍｉｄｇｅｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ,Ｃｌｕｓ...     

小鼠孤雌胚胎干细胞集落的建立

ＥＳＴＡＢＬＩＳＨＭＥＮＴＯＦＳＴＥＭＣＥＬＬＣＯＬＯＮＩＥＳＦＲＯＭＰＡＲＴＨＥＮＯＧＥＮＥＴＩＣＡＬＬＹＤＥＲＩＶＥＤＢＬＡＳＴＯＣＹＳＴＳＯＦＭＯＵＳＥ小鼠孤雌胚胎干细胞集落的建立ＫｅｙｗｏｒｄｓＭｏｕｓｅ,Ｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃｅｍ...     

地衣芽孢杆菌β—甘露聚糖酶的纯化及其性质的研究

地衣芽孢杆菌１Ｂａｃｉｕｕｓ Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ＢＬ－３０６产生的胞外β－甘露聚糖酶经硫酸铵分级盐析,ＤＥＡＥ－纤维素柱层析。Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ１００柱凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱再层析分离纯化,得到ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）均一样品。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得纯化后β－甘露聚糖酶分子量为２６０００道尔顿。用凝胶等电聚焦电泳（ＰＡＧＥＩＥＦ）测得等电点ＰＩ为５．０。该酶     

长蠹科一中国新记录属

长蠹科一中国新记录属ＡＮＥＷＲＥＣＯＲＤＧＥＮＵＳＯＦＢＯＳＴＲＩＣＨＩＤＡＥ（ＣＯＬＥＯＰＴＥＲＡ）ＦＲＯＭＣＨＩＮＡ￥ＺＨＡＮＧＱｉｎｇｈｅ;ＣＨＵＤｏｎｇ;ＹＡＮＧＹｏｎｇｆｕ（ＧｅｎｅｒａｌＳｔａｔｉｏｎｏｆＦｏｒｅｓｔＩｎｓｅｃｔａｎｄＤｉ...     

生物固氮作用机理

生物固氮作用机理李佳格徐继（中国科学院植物研究所,北京１０００９３）ＭＥＣＨＡＮＩＳＭＯＦＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬＮＩＴＲＯＧＥＮＦＩＸＡＴＩＯＮＬｉＪｉａ－ｇｅＸｕＪｉ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｏｔａｎｙ,ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅ...     

中国美绥螨属—新纪录

中国美绥螨属—新纪录ＡＮＥＷＲＥＣＯＥＤＯＦＡＭＥＲＯＳＥＩＵＳＦＲＯＭＣＨＩＮＡ￥ＷＡＮＧＺｉ－ｃｕｎ;ＢＡＩＸｕｅ－ｌｉ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＥｎｄｅｍｉｃＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌ,ＮｉｎｇｘｉａＨｕｉＡｕｔｏｎｏｍｏｕｓＲｅｇｉｏｎ,Ｙｉ...     

mRNA很可能携带三维遗传信息(英文)

ｍＲＮＡ很可能携带三维遗传信息ＭＥＳＳＥＮＧＥＲＲＮＡＰＲＯＢＡＢＬＹＣＡＲＲＩＥＳＴＨＥＴＨＲＥＥ－ＤＩＭＥＮＳＩＯＮＡＬＧＥＮＥＴＩＣＩＮＦＯＲＭＡＴＩＯＮＴｈｅｆｏｒｍｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔｈｅｔｈｒｅｅ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｓｔｒｕ...     

人早期胎盘绒毛纤维连接蛋白的分离纯化及鉴定

人妊娠５－８周的胎盘绒毛经匀浆后,用２ｍｏｌ／Ｌ ｕｒｅａ－ＰＢＳ提取,通过Ｈｅｐａｒｉｎ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和柱层析,再经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ凝胶过滤层析,得到人早期胎盘纤维连接蛋白（ｅａｒｌｙ ｐｌａｃｅｎｔａ ｆｉｂ－ｂｒｏｎｅｃｔｉｎ,ｅｐＦＮ）。经还原及非还原ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和免疫印迹电泳分析,ｅｐＦＮ分子量约５００ｋＤ,是由两个２５０ｋＤ亚基组成,与人足月胎盘纤维连接     

酮古龙酸菌WB0104中L-山梨糖脱氢酶的分离和性质研究

从两步法生产维生素C重要前体2-酮基-L-古龙酸(2-Keto-L-gulonic acid, 简称2-KLGA)的第二步转化菌酮古龙酸菌Ketogulonigenium sp.WB0104的细胞质中,经SP- Sepharose Fast Flow、DEAE-CL6B和凝胶过滤的方法,分离到了L-山梨糖脱氢酶(L-Sorbose Dehydrogenase , 简称SDH),质谱测定该酶分子量为60.499kd,而用凝胶过滤法测定其分子量为139.053±4.96kd,由此推测该酶为具有两个相同亚基的二聚体;辅基分析表明SDH含有辅基pyrroloquinoline quinone(PQQ).以L-山梨糖(L-Sorbose)为底物,2, 6-Dichlorophenolindophenol(DCIP)为电子受体,SDH具有明显的脱氢酶活性;以L-Sorbose为底物的Km值为23.94mmol/L.在无细胞体系中,在phenazine methosulfate (PMS)存在的情况下,SDH能将底物L-Sorbose直接转化为2-KLGA.     

L-山梨糖提高木霉纤维素酶合成速率机制的研究

在0.5％葡萄糖-Mandels盐培养液中添加终浓度为0.5％的L-山梨糖,可使里斯木霉(Trichoderma reesei C 30)和拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii S38)的内切和外切β-1,4葡聚糖酶合成速率在培养的2天内提高4倍。与此同时β-葡萄糖苷酶的合成没有明显变化。L-山梨糖能明显抑制菌丝生长,但对葡萄糖的吸收没有影响,对菌丝分泌纤维素酶的机制影响不大。其对酶合成的促进可能主要是通过降低了菌丝体的生长速率。     

混合菌发酵L-山梨糖生产Vc前体2-酮基-L-古龙酸研究进展

利用混合菌发酵L-山梨糖生产2-酮基-L-古龙酸(2-KCA),再经化学转化合成维生素C(Vc),是我国工业生产Vc的主要途径,具有简化工艺,减少污染,降低能耗等诸多优点.从菌系组合、菌种选育、代谢途径与酶学特性、工程菌构建、伴生作用机制及发酵工艺等方面出发,综述混合菌发酵L-山梨糖生产Vc前体2-KGA的研究现状和最新进展,并提出进一步研究和探索的方向.     

生黑醋酸杆菌在高浓度山梨醇下的半连续发酵特性

目的：调节生黑醋酸杆菌生物和代谢特性,以提高发酵效率。方法：通过改变种液特性,采用半连续培养的方式,对生黑醋酸杆菌在高醇浓度下的生长特性进行了研究。结果：通过优化可以提高VC一步发酵底物山梨醇浓度达38%,32h左右发酵率达95%,山梨糖产量达360mg/ml,半连续培养连续5批之间产糖稳定,没有明显差别。结论：通过优化,有效地提高了山梨糖的产率。     

2—KLG产生菌混合发酵特性及最佳混生模式的研究

氧化葡萄糖酸杆菌合成的2－KLG对巨大芽孢杆菌的生长繁殖具有明显的抑制作用,可缩短其生长周期。发酵体系中巨大芽孢杆菌的存在是氧化葡萄糖酸杆菌的生长繁殖和合成2－KLG所必需的,发酵过程中巨大芽孢杆菌裂解所释放的活性物质可能是刺激氧化葡萄糖酸杆菌合成2－KLG的主要原因。二菌混合发酵需在适宜的混生模式下才可达到最佳效果。     

Influence of Product Addition on the Oxidation of D-Sorbitol to L-Sorbose by the Strain Acetobacter suboxydans

The kinetics of the D-sorbitol to L-sorbose biotransformation catalysed by the strain Acetobacter suboxydans is studied. The product inhibits the bacterial growth but the transformation is an autocatalytic process. However, higher initial concentrations of sorbose lead to a considerable decrease of the rate constant of the reaction, although the autocatalytic process takes place too. The addition of sorbose in the exponential phase of bacterial growth, or in the stationary phase, leads to a considerable shortening of the process duration, compared to the traditional fermentation.

The rate constants calculated from the kinetic curves are dependent on the initial dry substances concentration and there is a correlation between these levels and the biomass concentration in the stationary phase.     

L-山梨糖流加发酵高效生产2-酮基-L-古龙酸

实验充分利用混合菌系氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)和蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)混合发酵的优良特性,通过在发酵过程中间歇流加L-山梨糖的方法,实现了在自动控制温度、pH和溶氧的条件下,高效发酵L-山梨糖生成2-酮基-L-古龙酸(2-KLG)的目的。结果表明：当将L-山梨糖的终浓度调高到14％(w／v)时,2-KLG产量为130mg／mL左右,转化率达90％,发酵周期40—60h之间。结论：发酵过程中间歇流加L-山梨糖可以解除高浓度糖对产酸的抑制作用,提高了糖的转化率,但是发酵周期略有延长。     

信号肽对酮古龙酸菌山梨糖脱氢酶表达的影响

目的:在大肠杆菌中表达山梨糖脱氢酶(SDH),通过比较携带及不携带自身信号肽时SDH功能的差异,研究信号肽的作用。方法:通过PCR从酮古龙酸菌SCB329基因组中扩增带有自身信号序列和不带自身信号序列的sdh基因序列,连接至载体pET22b,在大肠杆菌中表达;利用载体的周质信号肽将缺少自身信号肽的SDH在大肠杆菌周质中表达,考察并比较这些表达情况的异同。结果:各种方式下表达的SDH都有活性,并能在体外体系中实现产酸;同时,在酶的前端带上自身信号肽或载体信号肽的情况下,在添加人工电子受体后能够实现活菌体内产酸。结论:山梨糖脱氢酶前端有一段与蛋白的周质定位相关的信号肽,去除该信号肽后酶的表达量有所增强,但在一定情况下影响了SDH的体内产酸作用。     

快速定量分析发酵过程中2-酮基-L-古龙酸的HPLC方法

本文建立了利用高效液相色谱法定量分析L-山梨糖发酵过程中主产物2-酮基-L-古龙酸含量的方法。色谱柱为Nuclesoil-N(CH_3)_2 5μm;流动相为0.01M KH_2PO_4,用2％H_3PO_4调到pH=4.0,流速为1ml/min,检测器为示差折光仪(RI)。在该条件下色谱峰面积与进样的2-酮基-L-古龙酸含量之间呈线性相关,相关系数R=0.9965,最小检出量为0.1％。检测结果与采用碘量法分析结果一致。经多次使用,证明该方法简单可靠,能准确及时地判断L-山梨糖发酵的终点。     

Screening for L-sorbose and L-sorbosone dehydrogenase producing microbes for 2-keto-L-gulonic acid production

Acetic acid bacteria incompletely oxidize L-sorbose to 2-keto-L-gulonic acid (2KLG) by L-sorbose- and L-sorbosone dehydrogenases. In order to isolate novel microorganisms with these enzyme activities, a new screening method has been studied with a presumption that microorganisms reuse their metabolic products when principal carbon sources are exhausted. When various keto-aldonic acid-producing microorganisms were tested for the ability to grow in minimal media containing such products as 2,5-diketo-gluconic acid, 2-keto-D-gluconic acid, 5-keto-D-gluconic acid or 2-keto-L-gulonic acid, they grew with these keto-aldonic acids as the sole carbon source. By enriching the isolates collected from screening samples for their growth in minimal medium containing 2KLG as the sole carbon source, as much as 50% of selected strains showed L-sorbose- and L-sorbosone dehydrogenase activities. In spite of the presence of these enzymes, no significant amount of 2KLG was detected in the culture broth, possibly due to 2KLG reductase activity, indicating that the direct screening for 2KLG producer microorganisms would be less successful. These results suggest that the screening strategy using 2KLG as a carbon source is a useful method for the selective screening of microorganisms with L-sorbose- and L-sorbosone dehydrogenases, and that a similar strategy may be applied to other cases. Received 14 December 1998/ Accepted in revised form 07 May 1999