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1.
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转双抗虫基因杂种741毛白杨的研究 被引次数：32
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田颖川 郑均宝 虞红梅 梁海永 李常青 王进茂《Acta Botanica Sinica》,2000年第42卷第3期
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用部分改造后的苏云金芽孢杆菌 (Bt)杀虫蛋白基因和慈菇蛋白酶抑制剂 (API)基因A构建了植物表达载体。然后通过根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn .)介导将此表达载体上的双抗虫基因转入杂种 741毛白杨 [PopulusalbaL .× (P .davidianaDode P .simoniiCarr.)×P .tomentosaCarr.]获得了一批抗卡那霉素的转化再生植株。用杨扇舟蛾 (Closteraanachoreta (Fabricius) )进行虫试的结果表明有 3株抗虫杨树 ,其中有1株杨树的叶片可使试虫在 6天内的死亡率达 90 %以上 ,而且存活幼虫的生长发育受到了明显的抑制。PCR检测及基因组DNASouthern杂交分析的结果都表明Bt杀虫蛋白基因和API基因已整合到以上 3株抗虫杨树的基因组中 ,而且表现为单拷贝整合。用Bt毒蛋白抗血清进行滤膜免疫反应及ELISA检测结果表明 3株转基因杨树都有Bt杀虫蛋白的表达 ,表达量约占叶总可溶性蛋白的 0 .0 15 %。这是国内外首次报道用双抗虫基因获得的抗虫 741毛白杨植株。
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2.
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抗虫的转AaIT基因杨树的获得 被引次数：32
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伍宁丰 孙芹 姚斌 范云六 饶红宇 黄敏仁 王明庥 《生物工程学报》,2000年第16卷第2期
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通过根癌农杆菌叶盘法将构建在双元载体上的昆虫特异性神经蝎毒素AaIT基因转化至中国南方杨树N106(小叶杨×美洲黑杨,P.deltoides×P.simonii)中,共获得了62株再生植株。PCR分析及PCR产物Southernblotting的分析结果表明,AaIT基因整合在再生植株的基因组上。对部分转AaIT基因植株进行了杀虫实验,转基因植株A5对一龄舞毒蛾(Lymantriadispar)幼虫有明显的抗性,饲喂转基因杨树叶片的幼虫死亡率显著高于未转基因对照植株,其取食面积小,存活幼虫体重明显小于对照。ELISA分析证明了AaIT蛋白的表达。
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3.
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向小黑杨转化蜘蛛杀虫毒素基因
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林同 王志英 刘宽余 景天忠 张传溪《昆虫学报》,2006年第49卷第4期
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近年来，危害小黑杨Populus simonii×Ｐ.nigra的害虫发生严重，给林业生产造成很大损失。为了提高小黑杨的抗虫能力，避免使用杀虫剂带来的污染，用农杆菌介导法将澳大利亚漏斗蛛Atrax robustus的毒蛋白基因和苏云金芽孢杆菌CryⅠA（b）基因C末端的融合基因BGT转化入小黑杨。PCR 和Southern印记分析转基因植株，结果表明，BGT杀虫基因已经整合在小黑杨基因组上。活性实验表明，取食转基因杨树6天和9天后，舞毒蛾Lymantria dispar 2龄幼虫的校正死亡率分别是37.0%和92.6%。方差分析表明取食转基因和对照杨树的舞毒蛾幼虫体重差异显著。这些结果显示转基因杨树上的舞毒蛾的发育速率受到影响。
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4.
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小黑杨转双价抗虫基因的研究 被引次数：13
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姜静 常玉广 董京祥 王志英 刘桂丰《植物生理学通讯》,2004年第40卷第6期
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用根癌农杆菌介导的叶盘法,将蜘蛛杀虫肽与Bt基因C肽序列的融合基因导入小黑杨(Populus simonii×P.nigra),所获得的3株卡那霉素抗性再生植株进行PCR和PCR-Southern杂交检测的结果均为阳性,Southern杂交检测的结果2株为阳性.抗虫试验结果显示,3个转基因株系均具有明显的抗虫效果,能显著抑制舞毒蛾幼虫的生长发育,表现出强烈的抗虫作用.
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5.
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毛白杨CCoAOMT cDNA片段的克隆与转基因杨木质素含量的调控 被引次数：19
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魏建华 赵华燕 张景昱 刘惠荣 宋艳茹《Acta Botanica Sinica》,2001年第43卷第11期
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用RT_PCR方法从毛白杨 (PopulustomentosaCarr.)中克隆了CCoAOMT基因的cDNA片段 ,并对其序列进行了分析。Northern杂交表明该基因在毛白杨正在木质化的次生木质部高水平表达 ,且与木质化进程同步。构建了该基因反义表达载体 ,根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)介导转化杂交杨 (欧洲山杨×银白杨 ,P .tremula×P .alba)。采用PCR、PCR_Southern及Southern杂交对获得的转基因植株进行分子检测 ,并测定移栽 5～ 6个月的转基因植株的Klason木质素含量 ,其中一个转基因株系的Klason木质素含量比未转基因对照杨树下降 17.9%。结果表明利用反义RNA技术对杨树CCoAOMT基因的表达可以降低转基因植株的木质素含量 ,达到改善其造纸性能的目的
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6.
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白桦的遗传转化及转基因植株的抗虫性 被引次数：17
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詹亚光 王玉成 王志英 杨传平 刘志华 李彩华《植物生理与分子生物学学报》,2003年第29卷第5期
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应用农杆菌介导法首次向白桦(Betula platyphylla Suk.)基因组中导入抗虫基因[蜘蛛杀虫肽与苏云金杆菌杀虫毒蛋白基因(Bt基因)C肽序列的嵌合基因].转化结果表明:共培养2 d的脱菌及防止腐烂的效果和转化率均高,液体共培养及液体除菌优于固体共培养及固体除菌;最佳外植体为大叶片;侵染2个月之后产生抗性愈伤组织,转化率达到22%.卡那霉素抗性植株中,GUS阳性率为43%.进行杀虫肽和nptⅡ基因的PCR(聚合酶链式反应)均检测出目的带.转化植株目的基因的PCR Southern(DNA印记杂交)杂交呈阳性,证明获得了转基因植株.初步的喂虫试验表明转基因白桦具有一定的抗虫性.
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7.
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豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因转化欧美杨的研究 被引次数：6
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赵强 赵志文 张廷婷 崔德才 王斌《生物技术通报》,2005年第4期
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本研究建立了欧美107杨的高频再生体系,用改良的根癌农杆菌介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入107杨中。经过严格的卡那霉素(Km)筛选,得到了Km抗性(Kmr)植株。对部分Kmr植株进行PCR及PCR-Southern杂交鉴定,证实CpTI基因已整合进杨树基因组中。转基因植株的饲虫实验表明,其中部分株系的叶片可在一定程度上抑制扁刺蛾幼虫的生长。
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8.
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转双抗虫基因烟草的研究 被引次数：22
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赵存友 袁正强 秦红敏 田颖川《生物工程学报》,2001年第17卷第3期
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用改造的雪花莲凝集素基因GNAmm与合成的苏云金芽孢杆菌(Bt)毒蛋白cry1Ac基因构建了带有双价基因的植物表达载体，在该表达载体中这两个基因的转录分别受笋瓜PP2启动子(SPP2P)和CaMV 35S启动子的调控。通过根癌土壤杆菌介导转化法，获得了一批抗卡那霉素的转化再生烟草植株。PCR检测及基因组DNA Southern blot\,Slot blot杂交分析的结果表明Gna基因和Bt基因已整合到烟草总DNA中。用Bt毒蛋白抗血清进行Western blot分析，转基因植株均有Bt杀虫蛋白的不同程度的表达。对转化再生烟草的虫试结果表明，在所受试的19株烟草中60%的植株上的棉铃虫在5天内死亡率达到100%，而且存活幼虫的生长发育受到明显抑制；蚜虫抑制生长试验表明，多数转化再生植株具有较强的抗蚜活性，平均能够抑制桃蚜50%～60%的蚜口密度，有的高达80%以上。以上结果表明利用这两个改造过的抗虫基因可以获得既抗虫又耐蚜的转双抗虫转基因植物。
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9.
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反义磷脂酶Dγ基因转化毛白杨的研究Transformation of Populus tomentosa with Anti-PLD Gene 被引次数：33
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刘斌 李红双 王其会 崔德才《遗传》,2002年第24卷第1期
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利用根癌农杆菌介导法将反义磷脂酶Dγ基因（PLDγ）转入BT-18号三倍体毛白杨。本研究建立了三倍体毛白杨的高频再生系统，对传统农杆菌侵染方法进行了改良，通过抗生素筛选获得大量抗性植株。对抗性植株进行了PCR和PCR-Southern杂交鉴定，证实反义基因，已整合入杨树核基因组中。通过对转基因植株的耐盐性鉴定，获得一批可耐0.7%NaCl的植株。Abstract:Antisense Phospholipase Dγ（ PLDγ）gene was introduced into Populus tomentosa mediated by Agrobactrium tumefaciens.The young leaves of triploid populus were used as the material and the regeneration system of high frequency has been established.We have developed the traditional transgene method by Agrobactrium trmefaciens and obtained many transgenic plants of anti-PLDγ gene.Tests showed that the transgenic plants can grow well on the culture medium with 0.7% NaCl.
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10.
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农杆菌介导Bt基因遗传转化高粱 被引次数：6
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张明洲 唐乔 陈宗伦 刘军 崔海瑞 舒庆尧 夏英武 I. Altosaar《生物工程学报》,2009年第25卷第3期
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高粱是全球仅次于小麦、水稻、玉米、大豆和马铃薯等的重要作物之一。以高粱幼穗愈伤组织为转化受体,通过农杆菌介导法和含有抗潮霉素和gus基因的双元载体将杀虫晶体蛋白基因cry1Ab导入高粱品种115、ICS21B和5-27,经Hyg筛选共获得21个独立的转基因株系,52株转基因植株,平均转化率为1.9%。经PCR、Southern杂交和RT-PCR分析表明cry1Ab基因已整合入高粱基因组中并得到正确转录。Bt蛋白Westernblotting分析和ELISA定量测定显示,cry1Ab基因在转基因高粱植株中表达,但不同转基因植株表达量有差异。饲虫试验表明,转基因高粱对大螟(Sesamiainferens)具有一定抗性。
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11.
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转双抗虫基因三倍体毛白杨外源基因表达及性状相关性分析 被引次数：3
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王颖 甄志先 杨敏生 李志兰 梁海永 阎海霞《昆虫学报》,2007年第50卷第9期
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用部分改造的BtCry1Ac基因与慈菇蛋白酶抑制剂（API）基因构建的双抗虫基因表达载体，通过农杆菌介导法转化了三倍体毛白杨Populus tomentosa Carr.，获得一批转双抗虫基因株系。对转基因株系的抗虫毒蛋白表达进行了ELISA和Western Blot检测，同时用转基因株系叶片对杨扇舟蛾Clostera anachoreta Fabricius和舞毒蛾Lymantria dispar L.幼虫进行室内饲虫试验，并对各项外源基因表达指标进行了相关分析。结果表明：在检测的28个转基因株系中，对杨扇舟蛾高抗株系占总参试系号的41％，中抗系号占35.0％，低抗系号占24％，对舞毒蛾高抗株系占参试系号的70％。转基因植株可明显抑制存活幼虫的生长发育，且不同转基因株系饲养的幼虫发育存在显著差异。连续两年相关分析表明，不同转基因株系幼虫死亡率间存在极显著相关。转基因植株对舞毒蛾和杨扇舟蛾均表达出抗虫性，并存在极显著相关。ELISA检测结果表明，不同转基因株系Bt毒蛋白表达量存在差异，变化在0.0011％～0.0161％。转基因植株对害虫的杀虫效果与Bt杀虫蛋白的表达量存在显著相关，表明Bt毒蛋白在抗虫效果中占有重要地位。转基因植株对卡那霉素表现出一定的抗性，但与抗虫程度相关不明显，单纯用卡那霉素作为筛选手段并不能完全反映植株的真实抗虫效果。
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12.
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农杆菌介导的苏云金杆菌抗虫基因cryIA（b）和cryIA（c）在水稻中 … 被引次数：26
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项友斌 叶恭银《生物工程学报》,1999年第15卷第4期
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通过农杆菌介导法用含有抗潮霉素和ＧＵＳ基因的双元载体将杀虫结晶蛋白基因ｃｒｙＩＡ（ｂ）和ｃｒｙＩＡ（ｃ）导入到籼，粳稻幼穗愈伤组织中，然后经过在含有不同浓度潮霉素的２在上进行数次筛选，获得一批Ｂｔ转基因株。经ＰＣＲ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交及ＳＷｅｓｔｅｒｎ印迹分析证实此二基因已整合进水稻中，饲虫试验结果表明，转基因株具有１００％杀虫率。
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13.
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双抗（抗病毒及抗虫）植物表达载体的构建及番茄的化鉴定 被引次数：5
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梁小友 米景九《Acta Botanica Sinica》,1994年第36卷第11期
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将抗病毒的ＣＭＶ－ｃｐ基因和抗虫的Ｂｔ－ｔｏｘｉｎ基因依次插入到植物表达载体ＰＥ３的ＨｉｎｄⅢ和ＫｐｎⅠ位点，通过菌落原位杂交筛选和酶切鉴定，然后以土壤农杆菌ＧＶ３１１－ＳＥ介导转化番茄，胭脂碱检测，染色体ＤＮＡ的点杂交及ＰＣＲ扩增证明ＣＭＶ－ｃｐ基因和Ｂｔ－ｔｏｘｉｎ基因已同时导入转化再生的番茄植株。ＲＮＡ点杂交证明ＣＭＶ－ｃｐ基因和Ｂｔ－ｔｏｘｉｎ基因已在转基因番茄植株中同时获得表达。
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14.
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双抗(抗病毒及抗虫)植物表达载体的构建及番茄的转化鉴定 被引次数：6
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梁小友 米景九 朱玉贤 陈章良《Acta Botanica Sinica》,1994年第11期
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将抗病毒的ＣＭＶ－ｃｐ 基因和抗虫的Ｂｔ－ｔｏｘｉｎ 基因依次插入到植物表达载体ｐＥ３ 的ＨｉｎｄⅢ和ＫｐｎⅠ位点，通过菌落原位杂交筛选和酶切鉴定，然后以土壤农杆菌ＧＶ３１１－ＳＥ介导转化番茄，胭脂碱检测，染色体ＤＮＡ 的点杂交及ＰＣＲ扩增证明ＣＭＶ－ｃｐ 基因和Ｂｔ－ｔｏｘｉｎ 基因已同时导入转化再生的番茄植株。ＲＮＡ 点杂交证明ＣＭＶ－ｃｐ 基因和Ｂｔ－ｔｏｘｉｎ 基因已在转基因番茄植株中同时获得表达。
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15.
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利用激光微束穿刺法将杀虫蛋白基因导入油菜的研究 被引次数：4
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侯丙凯 宋桂英《激光生物学报》,1999年第8卷第4期
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利用激光微束照射油菜子叶柄，将来自苏云金杆菌的杀虫蛋白（Ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌｃｒｙｓｔａｌｐｒｏｔｅｉｎ，ＩＣＰ）基因导入油菜细胞中，经植株再生和卡那霉素筛选，获得了转基因植株。对转基因植株进行了ＰＣＲ检测和饲虫实验，发现转基因植株为ＰＣＲ扩增阳性，某些植株表现出了较强的抗虫性。实验结果表明外源抗虫基因已被整合到油菜基因组并得到了表达。
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16.
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转Cry1Ac活性杀虫蛋白及慈菇蛋白酶抑制剂B基因的棉花 被引次数：6
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郭洪年 吴家和 等《Acta Botanica Sinica》,2003年第45卷第1期
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根据植物基因的结构特征。合成了Cry1Ac活性杀虫蛋白的编码序列并与内质网定位肽编码序列组成嵌合杀虫蛋白基因Bt29K。构建了含Bt29K基因及慈菇蛋白酶抑制剂B（API-B）基因表达框的双抗虫基因植物表达载体。通过根癌土壤杆菌（Agrobacterium trmefaciens(Smith et TOwnsend)ConnLBA4404)介导转化了棉花（Gossypium hirsu-tunL.)的两个生产品种（系）。根据抗棉铃虫（Heliothis armigera)试验及农艺性状的观察调查结果。经6代筛选，获得了抗棉铃虫90.0%_99.7%且农艺性状优良的9个双价抗虫棉纯合品系。分子生物学分析结果表明，两个抗虫基因在棉花基因组中的插入拷贝数为1个或2个，活性Cry1Ac和API-B蛋白在转基因抗虫棉株系中的表达量分别约占总可溶性蛋白的0.17%和0.09%。对双抗纯合系植株及仅转Bt基因的棉花纯合系抗虫性检测结果表明前者的抗虫性明显高于后者，因此推断本研究采用的双抗虫基因表达载体构建策略是合理的。
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17.
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转Cry1Ac活性杀虫蛋白及慈菇蛋白酶抑制剂B基因的棉花
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郭洪年 吴家和 陈晓英 罗晓丽 卢睿 石跃进 秦红敏 肖娟丽 田颖川《Journal of Integrative Plant Biology》,2003年第45卷第1期
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根据植物基因的结构特征,合成了CrylAc活性杀虫蛋白的编码序列并与内质网定位肽编码序列组成嵌合杀虫蛋白基因Bt29K.构建了含Bt29K基因及慈菇蛋白酶抑制剂B(API-B)基因表达框的双抗虫基因植物表达载体.通过根癌土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens(Smith et Townsend)Conn LBA4404)介导转化了棉花(Gossypium hirsu-tun L.)的两个生产品种(系).根据抗棉铃虫(Heliothis armigera)试验及农艺性状的观察调查结果,经6代筛选,获得了抗棉铃虫90.0%～99.7%且农艺性状优良的9个双价抗虫棉纯合品系.分子生物学分析结果表明,两个抗虫基因在棉花基因组中的插入拷贝数为1个或2个.活性Cry1Ac和API-B蛋白在转基因抗虫棉株系中的表达量分别约占总可溶性蛋白的0.17%和0.09%.对双抗纯合系植株及仅转Bt基因的棉花纯合系抗虫性检测结果表明前者的抗虫性明显高于后者,因此推断本研究采用的双抗虫基因表达载体构建策略是合理的.
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以胆碱脱氢酶基因对小黑杨花粉植株的遗传转化 被引次数：3
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刘桂丰 程贵兰 姜静 白爽 于影 蔡智军 董京祥 李淑娟《植物生理与分子生物学学报》,2006年第32卷第2期
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以小黑杨（Populus simoniixP．nigra）花粉植株叶片为外植体，用根癌农杆菌介导法将胆碱脱氢酶基因（betA）导入其中，将获得的4株卡那霉素抗性转基因株系进行PCR检测，结果均为阳性。用荧光定量PCR对转基因株系的betA基因转录结果检测表明，4个转基因株系均已表达外源基因，但表达量有差异。对获得的4株转基因株系及对照进行NaCl胁迫处理，当NaCl浓度为0．55％时，非转基因小黑杨花粉植株生根率为0，转基因株系生根率为80％～100％；在NaCl为0．70％～0.80％时，则转基因株系生根率也为0。4个转基因株系的甜菜碱含量显著高于未转基因对照，说明抛融基因的导入提高了转基因株系的耐盐性。
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根癌农杆菌介导的高粱遗传转化体系的研究 被引次数：1
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林凤 石太渊 赵淑华 王小光 苗则彦《生物技术》,2004年第14卷第1期
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采用根癌农杆菌介导法将杀虫晶体蛋白基因cryIA(b)转入高粱胚性愈伤组织中，建立农杆菌转化高粱的遗传转化体系，获得70棵再生植株。经GUS及PCR检测，结果表明，cryIA(b)基因确实转移到高粱恢复系0-30中，报告基因GUS在再生植株中也得到表达。转化植株的抗病性鉴定正在进行中。
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20.
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转Bt cry1Ah基因抗虫玉米的分子检测及农艺性状分析
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戴军 李秀影 朱莉 汪海 张杰 何康来 郎志宏 黄大昉《生物技术通报》,2014年第5期
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利用农杆菌介导法将具有自主知识产权的Bt cry1Ah基因转入玉米自交系综31中,在获得的1 764株转基因植株中筛选获得1株对玉米螟有显著抗性的转基因植株。对该抗性植株进行了室内和田间抗虫性分析及外源基因表达分析,并研究了其杂交后代的农艺性状。结果表明,该转基因植株对亚洲玉米螟田间抗虫性达到高抗水平;外源基因能够正常高效表达,在玉米抽穗期的叶片中Cry1Ah蛋白表达量最高,达到1μg/g鲜重;株高、穗位高、穗长、穗粗等与非转基因对照植株相比差异不大,秃尖长明显短于对照,千粒重及单株产量明显高于对照,这种差异在人工模拟虫害爆发情况下达到极显著水平。
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