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相似文献
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1.
在利用合成寡核苷酸片段和利用简并PCR方法筛选白色念球菌MAPK相关蛋白激酶基因的过程中,都得到了一个新的MAPK基因CEK2(Candida albicans extracellular signal-regulated kinase2)。CEK2基因全长为1119bp,编码373个氨基酸,白色念珠菌CEK1同源性达56%。CEK2与啤酒酵母FUS3基因同源性很高,核苷酸的同源 达57%,氨基酸  相似文献   

2.
由于lacZ基因在白色念珠菌中不能工作。将克氏酵母的β-半乳糖苷酶基因Kl LAC4构建了能在白色念珠菌中工作的报告基因。Kl LAC4基因融合到白色念珠菌乙醇脱氢酶基因(ADH1)的启动子后面,在ADH1终止子的共同控制下构建Kl LAC4的表达质粒pYPB1-LAC4。PYOB1-LAC4转化白色念珠菌并测定了在固体培养基中的β-半乳糖苷酶活性以及在液体增减基的β-半乳糖苷酶活力。结果表明Kl  相似文献   

3.
用寡聚核苷酸片段筛选白色念珠菌MAPK的基因家族   总被引:9,自引:6,他引:3  
促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是一类与哺乳动物p34^CDC2同源性很高的Ser/Thr蛋白激酶,在多个不同的信号转导途径中起作用。现有的实验语气表明,MAPK很可能在白色念珠菌形态发生中起作用。我们根据白色念念菌的已知的两个MAPK基因;CEK1与MKC1第Ⅶ亚结构域的核苷酸序列合成卫段27nt的寡核苷酸,作为探针来筛选白色念穆  相似文献   

4.
多聚酶链反应检测白色念珠菌   总被引:1,自引:0,他引:1  
近年来,随着白色念珠菌分子生物学研究工作的深入,已有多个白色念珠菌基因得以分离并测序。本文综述了应用白色念珠菌细胞色素P450L1A1(羊毛甾醇-14α-脱甲基酶)基因编码和白色念珠菌特异性片段-EO3基因编码进行多聚酶链反应的研究状况。研究结果表明,PCR法敏感,特异且快速,有希望成为无菌源(如血液,脑脊液,腹腔液)标本中念珠菌检测的有力工具,从根本上解决念珠菌深部感染的诊断问题。  相似文献   

5.
白色念珠菌(Candida albicans)作为一种重要的机会性病原真菌,其致病性与细胞形态、细胞壁构成以及细胞生长速率都有着密切的关系.通过同源比对,在白色念珠菌中克隆了CaECM25基因,并构建了Caecm25A/A缺失突变体,对其是否影响细胞形态发生、细胞壁代谢以及致病性等进行了分析.结果显示,该基因的缺失会导致母细胞和子细胞分离异常,细胞生长速率明显变慢,真菌丝和假菌丝的伸长受阻,细胞黏附能力有所降低.动物实验模型表明,CaECM25基因的缺失会导致白色念珠菌毒力的下降.由此推测,白色念珠菌CaEcm25p为细胞壁合成与代谢以及细胞形态发生所需,并与其致病性相关.  相似文献   

6.
Forskolin对成骨样细胞蛋白激酶C及三磷酸肌醇的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
Forskolin(FSK)是一种植物二萜类化合物,为腺苷酸环化酶的特异激活剂。实验发现:FSK和作为参照的诱导分化剂维甲酸(RA)单独或联合应用均可升高胞浆蛋白激酶C(PKC)活性,并降低膜PKC活性。FSK可使表皮生长因子(EGF)诱导的细胞内三磷酸(IP3-1,4,5)水平降低至对照组的44.4%至67%;FSK与RA合用可显著降低成骨样细胞特征蛋白碱性磷酸酶(AKP)的活性,以上结果表明,  相似文献   

7.
用基因重级及定位突变技术成功地构建了t-PA的K1区缺失突变体t-PAdelK1、PAI-1结合位点缺失突变体t-PAdel(296-302)及两的组合突变全t-PAdel(K1,296-302),并在COS-7细胞中实现三的暂时性表达,在CHO细胞中实现了t-PAdel(K1,296-302)的稳定性表达。对表达产物的生物学特性分析表明,t-PAdel(296-302)及t-PAdel(K1  相似文献   

8.
采用反转录-聚合酶链式反应方法(RTP-CR),在人工合成的引物引导下,扩增出水稻矮缩病毒基因组第一片段(S1)全长序列及第五片段的部分序列(SSⅢ).将扩增的片段分别克隆到克隆载体pGEM7Zf(+)及pUC19的smal位点上,并进行了序列测定。在此基础上,利用pCR引入的方法将核酶序列引入到S5Ⅲ片段反义链上以构成反义核酶基因S5ⅢR,将S1片段5'端部分序列(S1-1)及S5ⅢR基因克隆到植物表达载体pROKⅡ上,构建成水稻转化载体pROK-S1-1'及pROK-S5ⅢR。  相似文献   

9.
Forskolin(FSK)是一种植物二萜类化合物,为腺苷酸环化酶的特异激活剂,实验发现:FSK和作为参照的诱导分化剂维甲酸(RA)单独或联合应用均可升高胞浆蛋白激酶C(PKC)活性,并降低膜PKC活性,FSK可使表皮生长因子(EGF)诱导的细胞内三磷酸肌醇(IP3-1,4,5)水平降低至对照组的44.4%至67%;FSK与RA合用可显著降低成骨样细胞特征蛋白碱性磷酸酶(AKP)的活性。以上结果表明,FSK对成骨样细胞内磷脂酰肌醇信息传递体系有深刻影响,可能与其调节细胞的增殖分化有关。  相似文献   

10.
伪狂犬病毒蛋白激酶基因的PCR扩增及其克隆鉴定   总被引:9,自引:0,他引:9  
以BHK-21细胞单层上增殖的伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV),经离心浓缩后,用SDS-蛋白酶K消化法分离纯化PRV基因组DNA。参照PRVKa株和NIA-3株蛋白激酶(PK)基因的DNA序列,设计并合成了一对长度为26bp和32bp的引物,以纯化的PRV基因组DNA为模板,用PCR技术成功地扩增出我国伪狂犬病毒地方株的PK基因,并将它克隆于pUC19载体。酶切分析结果表明,所获PK基因克隆在PstI、SmaI、XhoI和SalI上的切点与PRVNIA-3株相同。为下一步进行PK基因的体外缺失和重组,以构建减毒的PK缺失疫苗株奠定了基础。  相似文献   

11.
类胡萝卜素合成的相关基因及其基因工程   总被引:43,自引:0,他引:43  
类胡萝卜素具有多种生物功能,尤其在保护人类健康方面起着重要的作用,如它们是合成维生素A的前体,能够增强人体免疫力和具有防癌抗癌的功效。人体自身不能合成类胡萝卜素,必须通过外界摄入;但类胡萝卜素在许多植物中含量较低,并且很难用化学方法合成。随着类胡萝卜素生物合成途径的阐明及其相关基因的克隆,运用基因工程手段调控类胡萝卜素的生物合成已成为可能。本文综述了微生物和高等植物类胡萝卜素生物合成途径中相关基因的克隆,以及运用这些基因通过异源微生物生产类胡萝卜素和提高作物类胡萝卜素含量的基因工程研究进展。  相似文献   

12.
13.
益生菌已经在临床和食品领域应用多年,其安全性和有效性已经获得人们的认可。随着分子生物学技术的发展,采用益生菌作为载体进行基因导入或基因编辑,这些遗传改造的益生菌一部分已经作为新的药品或疫苗进入到临床应用阶段。携带功能基因的益生菌定殖于肠道进行表达和缓慢释放,这类益生菌作为活体药物获得益生菌和功能基因的双重功效,可用于治疗某些疑难病症。携带蛋白质抗原基因的益生菌定殖于肠道进行表达,可诱导肠道黏膜免疫、细胞免疫和体液免疫,这是一条更安全的口服疫苗途径。成簇的规则间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)及其相关蛋白(CRISPR-associated protein,Cas)以其高效与便捷性推动了益生菌基因编辑的发展。这篇综述介绍了CRISPR-Cas9操作系统在益生菌方面的应用。对传统遗传操作较难的益生菌采用CRISPR-Cas9技术进行基因编辑,使其基因敲除和基因突变,基因敲入和基因调控等更为简单、高效和易操作。这些CRISPR/Cas9、CRISPRa和CRISPRi技术在益生菌的基因表达调控和代谢工程等领域具有巨大的应用潜力,例如医药、食品以及工业等相关重要产品的获得。本文总结了益生菌基因导入和基因编辑在生物制品生产中的相关应用,最后对其未来的研究方向进行展望。  相似文献   

14.
V'yugin  V. V.  Gelfand  M. S.  Lyubetsky  V. A. 《Molecular Biology》2003,37(4):571-584
We suggest a new procedure to search for the genes with horizontal transfer events in their evolutionary history. The search is based on analysis of topology difference between the phylogenetic trees of gene (protein) groups and the corresponding phylogenetic species trees. Numeric values are introduced to measure the discrepancy between the trees. This approach was applied to analyze 40 prokaryotic genomes classified into 132 classes of orthologs. This resulted in a list of the candidate genes for which the hypothesis of horizontal transfer in evolution looks true.  相似文献   

15.
ES细胞是建立基因打靶突变小鼠的必要条件 ,也可用于制备转基因动物 .基因敲除、精细突变和条件性基因打靶技术建立的基因打靶突变小鼠在人类遗传病机理研究、基因治疗和基因功能研究方面都有着重要作用 .  相似文献   

16.
Surnames are traditionally used in population genetics as quasi-genetic markers (i.e., analogs of genes) when studying the structure of the gene pool and the factors of its microevolution. In this study, spatial variation of Russian surnames was analyzed with the use of computer-based gene geography. Gene geography of surnames was demonstrated to be promising for population studies on the total Russian gene pool. Frequencies of surnames were studied in 64 sel'sovets (rural communities; a total of 33 thousand persons) of 52 raions (districts) of 22 oblasts (regions) of the European part of Russia. For each of 75 widespread surnames, an electronic map of its frequency was constructed. Summary maps of principal components were drawn based on all maps of individual surnames. The first 5 of 75 principal components accounted for half of the total variance, which indicates high resolving power of surnames. The map of the first principal component exhibits a trend directed from the northwestern to the eastern regions of the area studied. The trend of the second component was directed from the southwestern to the northern regions of the area studied, i.e., it was close to latitudinal. This trend almost coincided with the latitudinal trend of principal components for three sets of data (genetic, anthropological, and dermatoglyphical). Therefore, the latitudinal trend may be considered the main direction of variation of the Russian gene pool. The similarity between the main scenarios for the genetic and quasi-genetic markers demonstrates the effectiveness of the use of surnames for analysis of the Russian gene pool. In view of the dispute between R. Sokal and L.L. Cavalli-Sforza about the effects of false correlations, the maps of principal components of Russian surnames were constructed by two methods: through analysis of maps and through direct analysis of original data on the frequencies of surnames. An almost complete coincidence of these maps (correlation coefficient = 0.96) indicates that, taking into account the reliability of the data, the resultant maps of principal components have no errors of false correlations.  相似文献   

17.
为研究外源性Rb和P53基因导入血管平滑肌细胞后对c-fos和c-jun基因表达的调控作用,将Rb基因或P53基因重组腺病毒载体转染人脐动脉血管平滑肌细胞,应用RT-PCR和免疫组化法检测c-fos、c-jun的mRNA及蛋白质表达水平,以DNA琼脂糖凝胶电泳和β-半乳糖苷酶染色分别观察细胞凋亡和细胞衰老.结果显示,野生型P53基因导入可诱导平滑肌细胞凋亡,c-fos和c-jun mRNA及蛋白质表达水平显著增高.外源性Rb基因导入能促进细胞衰老,下调c-fos基因表达,但对c-jun基因表达没有明显影响.  相似文献   

18.
19.
20.
基因诱捕(gene trap)是基于小鼠胚胎干细胞、报道载体(诱捕载体)建立的一种基因突变方法。诱捕载体在整合位点利用内源基因调控元件模仿内源基因表达,使其表达终止,从而可以阐明内源基因的功能。由于诱捕载体及其报道基因的特点,基因诱捕技术可用于高通量生产,便于小鼠基因功能的大规模研究.为各类疾病动物模型的建立奠定良好基础。  相似文献   

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