首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到10条相似文献,搜索用时 15 毫秒
1.
利用体外定点突变技术获得Syp Y279F、Y304F和Y546F突变的cDNA, 将这些突变体和野生型Syp 分别构建入pXM 真核表达载体, 转入K562 细胞。经Western 印迹证明, 各转染K562 细胞中都有Syp 蛋白的表达。免疫沉淀与免疫印迹结果发现WT、Y279F、Y304F和Y546F等4 种Syp 在胞内均能直接与BcrAbl 结合。体外结合实验结果表明Y304F突变导致了Syp 不能与Shc 结合,Y279F突变则导致了Syp 不能与Grb2 结合。结论是: 作为“接头蛋白”,Syp 可以介导BcrAbl 与Shc 和Grb2 之间的结合;Grb2 结合在Syp 的Y279 上,Shc 则结合在Syp的Y304 上  相似文献   

2.
以药物敏感型细胞株K562/S和耐药型细胞株K562/A02为对象.观察原癌基因Bcl-2的表达量在两种细胞中的差异,以及神经酰胺作为一个新的脂质第二信使诱导细胞凋亡的能力,并利用酪氨酸激酶抑制剂genistein,酪氨酸磷酸酯酶抑制剂vanadate,观察酪氨酸可逆磷酸化与细胞凋亡间的关系.结果显示:在K562/A02中Bcl-2的表达量明显高于K562/S;外源性神经酰胺能成功地诱导K562/S,K562/A02细胞凋亡,凋亡细胞具有典型的形态学改变和DNA“Ladder”形成,FCM检测出现凋亡细胞峰,但在同样的诱导条件下,K562/S细胞凋亡明显高于K562/A02细胞.FCM检测genistein能显著改变这两种细胞生长周期,但细胞阻滞于G2/M期,便对神经酰胺诱导的细胞凋亡无明显作用,vanadate单独对细胞地明显作用,但与神经酰胺共同作用能明显提高细胞凋亡率.以上结果表明在药物诱导的细胞调亡中Bcl-2基因起重要作用,神经酰胺能诱导K562/S和K562/A02细胞调亡.  相似文献   

3.
通过DNA序列测定在一名46,XY女性性反转患者SRY基因启动子区发现了一个新的突变:nt.-81G→A.该突变不见于正常男性,因此不是DNA多态性.为了检测这一点突变对SRY基因表达功能的影响,构建了分别由正常或突变的人SRY基因启动子区片段调控氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因表达的两个质粒,寡核苷酸探针杂交证实该启动子片段正常或携带有G→A突变.这两个质粒分别与pSV-β-半乳糖苷酶内对照质粒共转染HeLa细胞后,瞬间表达分析显示这一突变对CAT酶活性水平无显著影响(0.50>P>0.20).上述正常和突变的SRY基因启动子片段与K562细胞核抽提物的凝胶阻滞实验也表明,突变对K562细胞核蛋白与SRY基因启动子区的结合影响不大.研究SRY基因的表达调控对阐明人的性别决定机制及性反转的病理机制具有重要意义  相似文献   

4.
观察自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCs)的生长曲线、c-fos原癌基因表达和c-fos基因酶切图谱的情况,与对照组京都维斯特大鼠(WKY)进行对比。结果显示,在小牛血清作用下SHR的VSMCs生长速率和c-fos原癌基因表达明显大于WKY;c-fos原癌基因限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)分析表明,经BamH I或EcoR I酶切后的SHR-WKY的酶切图谱一致,同时也未发  相似文献   

5.
核因子Y(nuclearfactorY ,NF Y)也称作CBF(CCAATboxbindingfactor)、CP1 ,是结合CCAAT盒的转录因子。它能识别真核基因启动子区域的 5′ CTGATTGGYYRR 3′或 5′ YYRRCCAATCAG 3′共有序列。有功能的NF Y是一个异源三聚体蛋白 ,它包含三个不同的亚单位A、B、C。细胞衰老是由细胞分裂的次数决定的。控制细胞分裂的机制之一是调控G1 /S期的基因表达。当细胞衰老时 ,由于G1 /S基因调控的转变 ,细胞不能进入S期而只停留在G1期。NF Y正是通过与G1 /S…  相似文献   

6.
天花粉蛋白Y14F/R22L定点突变及其活性研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
利用多聚酶链式反应(PCR)技术,对天然天花粉蛋白(nTCS)基因在Tyr14和Arg22两个保守残基处同时进行定点突变,即Tyr14变成Phe,Arg22变成Leu,然后克隆到pET-8c高效表达载体上,构建成重组质粒pETY14F/R22L.经序列分析,定点突变的结果与预先设计的完全一致,突变后的天花粉蛋白命名为Y14F/R22LTCS.将pETY14F/R22L转化到E.coliBL21(DE3,pLysS)中,进行表达.经CM-SepharoseCL-6B柱纯化,SDS-PAGE鉴定,纯度可达90%.RIP活性测定显示,Y14F/R22LTCS的活性比nTCS降低了7.5倍,活性变化不显著,因此,TCS的Try14和Arg22对维持其活性部位构象并不是必需的.但由于Y14F/R22LTCS在E.coli中的表达量与nTCS相比明显下降,因此,Tyr14和Arg22可能与TCS翻译后的折叠有关.  相似文献   

7.
人乳铁蛋白基因在昆虫细胞中的表达   总被引:12,自引:0,他引:12  
将人乳铁蛋白cDNA(hLFc)克隆在质粒pBacPAK8的BamHI和SacI位点,构建成转移质粒8hLFc。该质粒DNA与AcNPV BacPAK6病毒株基因组DNA经共转染草地夜峨培养细胞Sf21,在培养的贴壁细胞中挑出空斑,经过3轮纯化,结合斑点杂交筛选,获得重组病毒。用蛋白质免疫印迹法检测到在重组病毒感染的Sf-21细胞中存在乳铁蛋白基因的表达产物。酶联免疫检测结果表明:重组人乳铁蛋白在  相似文献   

8.
观察自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCs)的生长曲线、c-fos原癌基因表达和c-fos基因酶切图谱的情况,与对照组京都维斯特大鼠(WKY)进行对比.结果显示,在小牛血清作用下SHR的VSMCs生长速率和c-fos原癌基因表达明显大于WKY;c-fos原癌基因限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)分析表明,经BamHⅠ或EcoRⅠ酶切后的SHR和WKY的酶切图谱一致,同时也未发现SHR的fos基因扩增现象.提示,VSMCs的异常增殖和c-fos原癌基因的表达异常与高血压的形成有关,而c-fos原癌基因的过度表达可能是由于某些与基因转录调控有关的因素异常所致.  相似文献   

9.
去甲斑蝥素诱导人红白血病K562细胞凋亡的实验研究   总被引:10,自引:0,他引:10  
体外实验证明10μg.ml-1去甲斑蝥素作用于人红白血病K562细胞24h,可诱导K562细胞发生凋亡。提取加药组细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳呈现典型的DNA“梯子”,同时加药组细胞出现核固缩、碎裂及胞浆浓缩等形态学变化。流式细胞测试结合形态学观察,特别是细胞超微结构观察,证明去甲斑蝥素诱导的K562细胞凋亡大部分发生在细胞周期的M期,也有部分发生在间期。免疫细胞化学结果表明,10μg.ml-1去甲斑蝥素作用于人红白血病K562细胞24h,与对照组相比,加药组细胞中bcl┐2蛋白表达增强,而Bax蛋白表达减弱,两组间有显著性差异(P<0.001)。  相似文献   

10.
氧化诱导K_(562)细胞凋亡机制的初步探讨   总被引:7,自引:0,他引:7  
以过氧化氢(H2O2)诱导人慢性髓细胞白血病(K562)细胞为凋亡模型,采用流式细胞仪(flowcytometry,FCM)和激光共聚焦扫描显微镜(laserconfocalscanningmicroscopy,LCSM)研究细胞凋亡,形态观察出现核固缩,核碎裂及凋亡小体等典型凋亡特征.DNA电泳图谱出现“Ladder”.FCM检测在G0/G1峰前出现一低DNA含量的凋亡峰.LCSM显示凋亡细胞c-Fos.c-Jun和NFκB表达量均有不同程度的增加.该结果提示上述三种转录因子可能参与氧化诱导凋亡过程中基因的调控作用.  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号