Aβ-Cu复合物与Aβ纤丝对小胶质细胞激活作用比较研究

目的:比较具有氧化还原活性的过渡金属离子Cu~(2+)(Cu)诱导形成的Aβ聚集物(Aβ-Cu复合物)与Aβ自聚集形成的纤丝(Fibrillar Aβ,f Aβ)对小胶质细胞激活作用的差异。方法:制备Aβ-Cu复合物和fAβ,利用小鼠BV-2小胶质细胞株,分别以不同浓度的Aβ-Cu复合物和fAβ于37℃刺激24 h,检测细胞上清液中的TNF-α(Tumor necrosis factor-α)、NO(Nitric oxide)以及H_2O_2(Hydrogen Peroxide)的含量。分别收集Aβ-Cu复合物和f Aβ作用24 h后的大鼠原代小胶质细胞条件培养液,通过观察该条件培养液对大鼠原代海马神经元细胞活力的影响,评价小胶质细胞介导的间接神经元毒性。结果:(1)在不引起直接神经毒性剂量(2.5μM)下,Aβ-Cu复合物激活小胶质细胞释放TNF-α(P0.01)、NO(P0.05)以及H_2O_2(P0.05)的作用强于f Aβ。(2)在此剂量下,Aβ-Cu复合物通过激活小胶质细胞引起的间接神经元毒性强于fAβ(P0.05)。结论:与fAβ相比,非神经毒性剂量的Aβ-Cu复合物对于小胶质细胞具有更强的激活作用,并由此引发更为明显的神经元毒性。     

NOX2在黄连素减轻Aβ所致神经元氧化应激损伤中的作用

目的:探讨还原型辅酶氧化酶Ⅱ(NADPH oxidase II,NOX2)是否参与了黄连素(Berberine,BBR)对β淀粉样蛋白(βAmyloid,Aβ)诱导的神经元损伤的保护作用。方法:将HT22神经元细胞分为5组,分别为正常培养的Control组、10μM的Aβ损伤组(Aβ)、1μM的BBR保护组(BBR+Aβ)、NOX2-siRNA干扰组(NOX2-siRNA+BBR+Aβ)和乱序si RNA处理组(SC-si RNA+BBR+Aβ),孵育24 h后,采用噻唑蓝法(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium, MTT)检测细胞活力,试剂盒检测培养基内乳酸脱氢酶(Lactic Dehydogenase,LDH)水平,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3和NOX2蛋白表达、试剂盒检测细胞内活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)和戊二醛(Malondialdehyde,MDA)水平。结果:与Control组相比,10μM的Aβ可显著下调HT22细胞活力,增加LDH释放和细胞内ROS及MDA水平,上调Cleaved caspase-3和NOX2蛋白表达(P0.05);1μM的BBR可显著抑制Aβ对神经元细胞产生的上述氧化损伤作用(P0.05),而NOX2-siRNA显著逆转了BBR对Aβ诱导的HT22神经元细胞的保护作用(P0.05),而SC-si RNA未对BBR的上述细胞保护作用产生显著影响(P0.05)。结论:NOX2蛋白介导了BBR对暴露于Aβ中的神经元细胞的保护作用。     

Abeta-Cu 复合物与Abeta纤丝对小胶质细胞激活作用比较研究

目的：比较具有氧化还原活性的过渡金属离子Cu2+(Cu)诱导形成的A茁聚集物（Aβ-Cu 复合物）与Aβ自聚集形成的纤丝 （Fibrillar Aβ, fAβ）对小胶质细胞激活作用的差异。方法：制备Aβ-Cu复合物和fAβ,利用小鼠BV-2 小胶质细胞株,分别以不同浓 度的Aβ-Cu 复合物和fAβ于37 ℃刺激24 h,检测细胞上清液中的TNF-α（Tumor necrosis factor-α）、NO（Nitric oxide）以及H2O2 （Hydrogen Peroxide）的含量。分别收集Aβ-Cu复合物和fA茁作用24 h 后的大鼠原代小胶质细胞条件培养液,通过观察该条件培 养液对大鼠原代海马神经元细胞活力的影响,评价小胶质细胞介导的间接神经元毒性。结果：（1）在不引起直接神经毒性剂量 （2.5 uM）下,Aβ-Cu 复合物激活小胶质细胞释放TNF-alpha（P<0.01）、NO（P<0.05）以及H2O2（P<0.05）的作用强于fAβ。（2）在此剂量 下,A茁-Cu 复合物通过激活小胶质细胞引起的间接神经元毒性强于fAβ（P<0.05）。结论：与fAβ相比,非神经毒性剂量的Aβ-Cu 复合物对于小胶质细胞具有更强的激活作用,并由此引发更为明显的神经元毒性。     

藁本内酯对H2O2诱导的B16黑素瘤细胞氧化损伤的保护作用

目的:观察藁本内酯对H_2O_2诱导的B16黑素瘤细胞氧化损伤的保护作用并探讨其可能机制。方法:以H_2O_2诱导B16黑素瘤细胞氧化损伤为模型,并以藁本内酯进行干预,采用MTT法测细胞活力,酶标仪检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,流式细胞术测细胞凋亡率、线粒体膜电位(△Ψm)和细胞内游离钙离子浓度。结果:与H_2O_2诱导的B16黑素瘤细胞比较,应用藁本内酯(5、10、20μmol·L~(-1))处理的B16黑素瘤细胞活力和△Ψm明显提高,LDH漏出量明显减少,细胞凋亡率和细胞内游离钙离子浓度明显降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:藁本内酯对H_2O_2诱导的B16黑素瘤细胞氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能通过恢复线粒体功能、抑制细胞凋亡有关。     

罗布麻总黄酮通过PI3K/Akt/GSK3β抑制H_2O_2诱导的EA.hy926凋亡机制研究

心血管疾病严重危害人类健康,其致病机制主要是氧化应激诱导的内皮细胞凋亡,保护内皮细胞免受氧化应激损伤是防治心血管疾病的关键。为了探讨罗布麻总黄酮(total flavonoids of Folium Apocyni Veneti,TFF)抑制过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)诱导的EA.hy926细胞凋亡的机制,采用不同浓度TFF处理EA.hy926细胞,一定浓度的H_2O_2造模,通过MTT法、Hoechst33342/PI荧光双染、流式细胞术检测各组的细胞凋亡情况,并用Western-blot和荧光定量PCR检测相关蛋白及m RNA的表达水平。研究发现,H_2O_2能明显诱导EA.hy926细胞凋亡,而TFF可降低H_2O_2引起的内皮细胞凋亡,表现为凋亡率降低、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)增加、裂解的半胱天冬酶-3,-9(cleaved caspase-3,-9)表达减少、髓细胞白血病因子-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)表达增加、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3β(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B/glycogen synthase kinase-3β,PI3K/Akt/GSK3β)通路中Akt、GSK3β蛋白的磷酸化水平升高。上述结果表明,TFF主要是通过激活PI3K/Akt/GSK3β通路,调节Mcl-1的表达,保护MMP,进而抑制caspase蛋白的剪切活化,抑制H_2O_2诱导的EA.hy926凋亡。     

抗重金属土壤微藻F1对Cu~(2+)胁迫的耐受生理机制研究

以从新疆富蕴县金属矿区土壤筛选出的抗重金属微藻F1为材料,测定在不同浓度(0、0.5、1.0、1.5和2.0mmol/L)Cu~(2+)胁迫下F1微藻叶绿素a、可溶性蛋白、MDA和谷胱甘肽(GSH)含量,以及谷胱甘肽硫转移酶(GST)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)和谷氨酰半胱氨酸合成酶(GCL)的活性,同时用红外光谱仪检测细胞壁上参与重金属螯合的官能团,用扫描电镜分析细胞壁上的离子交换情况,探讨F1土壤微藻对Cu~(2+)胁迫的耐受生理机制,为利用微藻生态修复技术去除污染区土壤重金属奠定基础。结果显示:(1)F1土壤微藻对Cu~(2+)具有较强的耐抗性。(2)F1土壤微藻细胞中参与吸附Cu~(2+)的基团分别为-OH、-CH2、-RCONH2和C-OH等。(3)F1土壤微藻在吸附Cu~(2+)的过程中,Cu~(2+)与细胞壁上的Al~(3+)、Fe~(2+)、Mg~(2+)、Ca~(2+)、K~+、Na~+和Zn~(2+)发生了交换。(4)藻细胞中的GSH和GSH-PX在F1土壤微藻耐受Cu~(2+)胁迫时起主要作用。研究认为,F1微藻种对Cu~(2+)的耐受性首先与其细胞壁外表细微结构及其离子交换特性有关,并且细胞壁上-OH、-CH_2、-RCONH_2和C-OH等化学基团起着重要作用,其次细胞内的谷胱甘肽以及谷胱甘肽相关酶类能够有效清除活性氧的过量积累,最终保护细胞免受重金属胁迫损伤。     

Yb3+-儿茶素配合物的抑菌活性及其机理探究

本文对Yb~(3+)-儿茶素配合物(Yb~(3+)-C)的合成、抑菌活性及抑菌机理展开了系统研究.结果表明,合成配合物Yb~(3+)-C的最适摩尔比为1∶4.Yb~(3+)-C的最小抑菌浓度(MIC)均显著低于Yb~(3+)和C,对大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)及沙门氏菌(Salmonella)均有较强的抑菌作用,而对金黄色葡萄球菌抑制作用更强,其MIC值低至0.0963 mmol/L.进一步研究表明,Yb~(3+)-C仅需要2 h就能杀灭细菌,可有效缩短杀菌时间.此外,扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)观察结果以及Yb~(3+)在细胞膜和细胞内的吸收和分布表明,Yb~(3+)-C对细胞具有更强的亲和力与穿透力,使Yb~(3+)更容易在细胞质中累积至有效浓度,从而造成细胞结构的破坏,并引起细胞凋亡.     

水鳖叶片对不同浓度Pb2+胁迫的生理和结构响应

研究了不同浓度Pb~(2+)胁迫(0、10、20、30和50 mg·L~(-1))对水鳖叶绿素含量、可溶性蛋白含量、抗氧化系统、活性氧产生速率和细胞超微结构的影响。结果表明:随着Pb~(2+)浓度的增加,水鳖叶片总叶绿素、叶绿素a/b值、可溶性蛋白含量和CAT活性逐渐下降;SOD、POD、APX、GR活性、抗坏血酸(AsA)和谷胱甘肽(GSH)含量先升后降;O_2~-·产生速率、H_2O_2、丙二醛(MDA)和可溶性糖含量呈上升趋势;不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示,Pb~(2+)处理后,分子量为1 6.3kDa、55.0kDa的多肽含量减少,高浓度处理下分子量为23.1kDa、75.8kDa、94.0kDa的多肽条带消失;电镜观察发现,Pb~(2+)对水鳖叶片细胞的叶绿体、线粒体和细胞核造成严重损伤。Pb~(2+)破坏了水鳖正常代谢所需的生理和结构基础,打乱了代谢平衡,最终导致植物的衰亡。     

姜黄素对H_2O_2诱导的HT29细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

研究姜黄素对H_2O_2诱导HT29细胞氧化应激的保护作用及其可能的分子机制。分别采用低、中、高浓度姜黄素处理H_2O_2诱导的HT29细胞氧化损伤模型,并设置H_2O_2模型组和正常对照组;MTT法确定H_2O_2最佳损伤浓度和时间及姜黄素(2.5、5、10μmol/L)对H_2O_2诱导的HT29细胞活性的影响;Annexin V/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡情况;PI染色流式细胞术检测细胞周期变化;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS);JC-1染色检测细胞线粒体膜电位;比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量,以及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、caspase-3和caspase-9的水平。结果显示姜黄素组(2.5、5、10μmol/L)明显提高H_2O_2诱导的HT29细胞的存活率(P0.05,P0.01);与H_2O_2模型组相比,姜黄素组细胞凋亡率降低(P0.01),增殖指数增高(P0.05,P0.01),LDH释放量和细胞内ROS降低(P0.05,P0.01),线粒体膜电位上升(P0.01),SOD活力增加(P0.01),MDA降低(P0.01),caspase-3和caspase-9活性增强(P0.01),并呈剂量-效应关系。结果表明姜黄素在一定剂量范围内对H_2O_2诱导的HT29细胞氧化损伤具有较好的保护作用,该作用可能与清除ROS,减轻DNA氧化损伤,抑制线粒体通路介导的细胞凋亡有关。     

β-淀粉样蛋白寡聚体对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞Munc-18表达的调节

为了观察阿尔茨海默病(AD)起始因素β-淀粉样蛋白(Aβ)对Munc-18表达的调节作用,采用Zn^2 诱导制备Aβ寡聚体,分化的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞经纳摩尔浓度Aβ寡聚体作用后用免疫印迹和流式细胞术的方法检测SH-SY5Y细胞的Munc-18蛋白水平,用MTT法分析纳摩尔浓度Aβ寡聚体的细胞毒性。结果发现,1nmol／L Aβ寡聚体作用1天后,SH—SY5Y细胞的Munc-18蛋白水平明显下调,随后逐渐增加。高浓度的Aβ寡聚体也有相似的作用效应,但抑制Munc-18蛋白表达的效应更明显。另外,相同浓度Aβ单体对Munc-18表达没有明显的影响,纳摩尔浓度的Aβ寡聚体也没有对细胞代谢产生显著的抑制。结果表明,纳摩尔水平Aβ寡聚体对Munc-18的表达有调节作用。