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1.
T7噬菌体RNA聚合酶显著的特点是只识别其自身DNA序列中特定的启动子[1] ;而T7噬菌体启动子属于组成型的启动子 ,又只能被相应的T7噬菌体的RNA聚合酶 (约 10 0kD的单链蛋白质 )所识别 ,并且被T7RNA聚合酶所启始的转录非常活跃[2 ,3] ,宿主细胞的RNA聚合酶所进行的转录根本无法同其竞争 ,这样宿主细胞中几乎所有的转录都被T7RNA聚合酶所操纵。另外 ,T7RNA聚合酶几乎能完整地转录在T7启动子下游的所有DNA序列。基于这些优点 ,1986年Studier和Moffat建立了一套新的原核表达系统———T7RNA聚… 相似文献
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以甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)内蒙分离物(NM)RNA为模板,通过反转录和PCR扩增得到了BNYVV RNA4基因组的cDNA克隆pGBF6。序列分析结果表明,pGBF6含有全长RNA4 cDNA插入片段,大小为1465个核苷酸,含有一个849个核苷酸的开放阅读框架,编码产生由282个氨基酸组成的分子量为31kDa的蛋白。与法国F2分离物RNA4相比,其核苷酸序列和由此推导的氨基酸序列同源性分别 相似文献
3.
分别利用5’RACE和3’RACE确定了CMVSDRNA2的5’和3’末端序列,在此基础上,利用RTPCR得到了RNA2的5’端一半的cDNA克隆pC25和3’端一半的cDNA克隆pC23,并通过拼接构建了RNA2全长cDNA克隆pC2F。通过对pC25和pC23进行序列测定,得到了RNA2的全序列。序列分析结果表明CMVSDRNA2由3048nt组成,其中存在2个部分重叠的阅读框ORF1(79~2652nt)和ORF2(2414~2746nt),分别编码858aa的2a蛋白和111aa的2b蛋白,并在2a蛋白的序列中发现了动植物病毒复制酶所特有的两个保守序列。该株系RNA2核苷酸序列与分属CMVI亚组的Fny株系和II亚组的Q株系RNA2的核苷酸序列同源性分别为917%和756%;2a蛋白的氨基酸序列同源性分别为938%和677%,2b蛋白的氨基酸序列同源性分别为830%和513%。同源性比较的结果表明SD株系属于CMVI亚组。 相似文献
4.
RNA聚合酶Ⅲ启动子的结构与功能 总被引:3,自引:0,他引:3
RNA聚合酶Ⅲ (polⅢ )是真核生物催化合成tRNA和 5SrRNA及一些核小RNA和胞质RNA必需的酶。RNA聚合酶Ⅲ能够识别tRNA基因中一些高度保守的特征性DNA序列而启动下游DNA的转录 ,这些序列称为RNA聚合酶Ⅲ启动子。RNA聚合酶Ⅲ启动子不仅广泛存在于真核细胞中tRNA、U6核小RNA(SNR6 )等的基因中 ,也是病毒催化合成一些小片段RNA如腺病毒VARNA所必需的。RNA聚合酶Ⅲ启动子因其能在体内外高效快速地转录某些小片段基因 ,已被人们广泛地应用于核酶和反义RNA技术中 ,在众多的RNA… 相似文献
5.
T7启动子具有真核生物聚合酶Ⅱ顺式作用因子的功能 总被引:1,自引:0,他引:1
根据a-鹅膏蕈碱(a-amanitin)对真核生物RNA聚合酶的选择性抑制,以氯霉素乙酰转 移酶基因(CAT)作为报道基因进行体内表达实验,证明T7噬菌体启动子可为真核生物RNA 聚合酶Ⅱ所启动。应用建立的竞争性DNA-蛋白质凝胶泳动技术,分别以TATA框、CAAT 框、GC框和八核苷酸序列(octamer)为竞争性寡核苷酸分子,发现人工合成的T7启动子可能 与 TFⅡD起始转录因子结合,形成 DNA-核蛋白质结合物。将 TATA框和八核苷酸序列分别 接入T7启动子上游,CAT实验显示八核苷酸序列可以增强RNA聚合酶Ⅱ对T7启动子的转录 起始作用。实验结果表明T7启动子可作为RNA聚合酶Ⅱ的顺式作用因子。 相似文献
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采用限制性内切酶消化、琼脂糖凝胶电泳及分子杂交技术对8株中国伊氏锥虫动基体DNA微环进行了比较研究。结果显示,我国伊氏锥虫株之间的kDNA微环序列具有较高的同源性,仅限制酶AluI,HinfI及MblI的酶解结果显示少数虫株的kDNA微环存在异源序列。这种异源性可以作为伊氏锥虫种内分类的遗传学标志。 相似文献
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利用PCR技术行反义寡核苷酸体外抗丁型肝炎病毒基因组RNA中核酶的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
设计一对PCR引物,其中上游引物的5’端除目的基因外,还加T7RNA聚合酶启动子序列,以质粒(pSVLD3)为模板,通过PCR扩增出带有T7RNA聚合酶启动子序列的139bp的cDNA片段,它含有丁型肝炎病毒(HDV)基因组RNA中核酶(Ribozyme)区的cDNA该核酶具有自身裂解功能,经测序发现该cDNA有2个碱基变异,以此PCR产物为模板,通过T7RNA聚合酶,转录出核酶的前体,并观察到其 相似文献
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马铃薯卷叶病毒 (PLRV)是正链RNA病毒 ,属黄化病毒组[1 ] 严格虫传 ,分布广泛 ,难以控制 ,侵染马铃薯 ,给生产造成巨大损失。PLRV基因全长 6 0kb ,有 6个读码框架 ,其中ORF2a是第二读框 ,全长 192 0bp ,编码一个 70kD的多肽。另外 ,ORF2a在与ORF2b重叠处可发生移码继续转译 ,直到ORF2b的尾 ,转译产物为一条 118kD的多肽 ,该蛋白的C端与复制酶的序列具很大的同源性[2~ 4] 。Prufer[5] 等和Kujawa[6] 等分别研究了PLRV基因组上ORF2a与ORF2b重叠区附近与移码有关的滑动序列及其… 相似文献
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中国大麦黄花叶病毒分离物的分子变异 总被引:4,自引:0,他引:4
13个供试的中国和英国大麦黄花叶病毒(BaYMV)分离物,经RNA1和RNA2全基因组不同区域DNA片段背地里单构象多态分析(SSCP),外壳蛋白基因和RNA2 70kD基因5端705碱基序列分析,以及此7-5碱基DNA片段限制性内切酶图谱分析结果,它们的RNA1和RNA2彼此无一相同,其中RNA2变异比RNA1更大。由于变异十分复杂,且没有规律性,因而当前通用的分子生物学技术尚不能简单地BaYM 相似文献
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