苜蓿愈伤组织中的盐胁迫蛋白

0.5％NaCl抑制愈伤组织生长,处理后期(第21天和28天检测)24kD蛋白含量明显增加。1.0％,2.0％和3.0％NaCl处理的愈伤组织不生长,未检出24kD蛋白增加,但36～42kD蛋白大量增加,并且有随处理的盐浓度增高而增加的趋势。 在1.0％NaCl适应愈伤组织(简称S-1)中24kD蛋白含量明显增加,而36～42 kD蛋白含量下降到对照水平。~(35)S-Met体内标记表明,增加的24kD蛋白是新合成的。S-1回到无盐5代后,仍保持提高的耐盐性和24kD蛋白含量。24kD蛋白含量的增加不受甘露醇胁迫的诱导。初步离心分离的细胞亚组分表明,24kD蛋白主要位于胞质和细胞器膜。在烟草S-1细胞中也发现24kD蛋白含量增加。     

大鼠脾树状突细胞和巨噬细胞S-100蛋白免疫反应性观察

本文采用S-100蛋白免疫组化染色结合ACP组化染色(或lysozyme免疫组化染色)来进一步观察大鼠脾树状突细胞(DCs)和巨噬细胞(Mφs)的染色反应性。结果表明,脾悬液淋巴树状突细胞(LDCs)呈S-100蛋白阳性反应而ACP反应为阴性或弱阳性,Mφs则呈ACP强阳性反应而S-100蛋白反应为阴性;同一涂片S-100蛋白和ACP双染结果,两者不重叠。脾冰冻切片显示交错突细胞(IDCs)和滤泡树状突细胞(FCDs)呈S-100蛋白阳性反应而ACP反应为阴性或弱阳性,Mφs则反之,即ACP反应强阳性而S-100蛋白为阴性反应;同一切片S-100蛋白和ACP双染也无重叠。腹腔Mφs贴片对照染色,Mφs呈ACP强阳性反应而S-100蛋白反应为阴性。由此进一步证实在一定条件下S—100蛋白可作为鉴别DCs和Mφs的标志。     

赤霉菌超氧化物歧化酶的纯化及部分理化性质

采用加热、Sephadex G—100凝胶过滤及DEAE-Sephadex A-50柱层析的方法,提纯了赤霉菌的超氧化物歧化酶(SOD),纯酶比活力为2640U/mg蛋白,最大紫外吸收峰为276nm,为Mn-SOD,由二个亚基组成,亚基分子量为14.5kD。此外还报道了该酶的氨基酸组成。     

一个在肺癌血清中高表达的标志分子SAA的发现及鉴定

应用表面增强基质辅助激光解析离子化-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)对175例肺癌病人和43例正常人血清进行了蛋白质谱检测. 通过Biomarker Wizard™ 和Biomarker Patterns™软件分析显示11.6 kD蛋白峰在肺癌病人血清中明显高于正常对照组, 同时该蛋白峰的表达水平与肺癌病人的临床分期密切相关, 随着病情的加重而逐渐升高. 进而采用Tricine-SDS-PAGE结合质谱分析鉴定出芯片上11.6 kD的蛋白峰为血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A protein, SAA). 使用抗SAA的特异性抗体通过免疫沉淀进一步证实了该蛋白峰为SAA. 同时还采用了ELISA方法对上述部分血清样本中SAA表达水平进行了测定, 结果显示其敏感性和特异性分别为84.1%和80%. 与蛋白质芯片使用单一差异蛋白质SAA划分结果基本一致. 上述实验结果表明, SAA能很好地划分肺癌病人和正常对照组, 很可能成为肺癌诊断和病情检测的一个标志分子.     

莲子贮存蛋白的主要亚基及积累模式

红莲(Nelumbo nucifera Gaertn)成熟子叶总蛋白含量达24.35 g/100 g干样品,其贮存蛋白(SP) 的积累模式与豆科种子相似,即随成熟度的提高,SP猛增至占总蛋白含量的86%以上。对莲子不同发育阶段子叶蛋白SDS-PAGE图谱的光密度测定表明莲子叶蛋白有12个主要SP亚基(SP 1～12)。按分子量(MW)大小和积累顺序可分3组A组是98 kD和93 kD的2个亚基,MW最大,积累最晚,但量最多;B组是3个亚基,MW为55～50 kD,大小居中,积累最早,量最少;C组的7个亚基MW最小,在27～14 kD之间,积累较早,量较多。对莲的不同品种、不同器官进行分析后发现,它们都有1个主峰为68 kD的多连峰的代谢蛋白亚基,可能是莲共有的蛋白亚基。     

大黑花芸豆凝集素的分离纯化及温度、pH、色氨酸修饰对其活性的影响

大黑花芸豆(Phaseolus multiflorus.Wiud)种子经匀浆、浸取、硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析(DEAE-Sepharose)、阳离子交换层析(CM-Sepharose)和Sepllacryl S-200分子筛层析得到凝集素样品(PML).经SDS-PAGE检测为一分子量约为28k的单一条带,Sephacryl S-100凝胶过滤测得其表观分子量约为56 kD表明PML是由两个相同亚基组成的蛋白.温度低于60℃时,PML较为稳定,当温度达80℃时,其凝血活性完全丧失;pH为5.6～9对活性影响不大,pH为12时,活性大部分丧失;高温和强碱对荧光光谱有较大影响.NBS修饰Trp结果表明,在天然状态下有3个色氨酸分子被修饰,其中第二和第三个色氨酸分子对其活性至关重要.     

美洲大蠊主要变应原蛋白的质谱鉴定与分析

为了建立美洲大蠊Periplaneta americana变应原蛋白的质谱鉴定方法,我们将美洲大蠊粗浸液通过DEAE-52离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析等分离步骤得到纯化的74 kD蛋白,对纯化前后的该74 kD蛋白分别进行SDS-PAGE及凝胶内胰酶酶切,再经液相色谱-电喷雾-串联质谱（HPLC-ESI-MS/MS）在线联机分析,所得质谱数据进入网站（http://www.matrixscience.com）进行Mascot检索比对。通过对两者质谱鉴定结果的比较来评估美洲大蠊天然主要变应原蛋白的纯化效果。结果表明,纯化蛋白经HPLC-ESI-MS/MS鉴定是美洲大蠊主要变应原蛋白;离子交换层析等纯化步骤可以去除同一分子量的杂蛋白(如卵黄原蛋白),从而获得较好的鉴定结果。我们首次成功地运用质谱建立起变应原蛋白的新鉴定方法。     

血清S-100B蛋白和NSE含量变化评估脑损伤程度的意义

目的探讨颅脑损伤后血清S-100B蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平变化及其在损伤程度的临床意义。方法采用酶联免疫测定法检测90例颅脑损伤患者入院时及入院后6、12、24h和3、7天血清S-100B蛋白、NSE水平,并分析其与颅脑损伤严重程度的关系。同时选择30例健康体检者作为对照组进行比较分析。结果颅脑损伤后血清S-100B蛋白、NSE水平较对照组明显升高(P0.05或P0.01);重型组患者的血清S-100B蛋白和NSE水平明显高于轻、中型组患者(P0.05或P0.01);动态检测结果显示,血清S-100B蛋白在伤后12h达峰值(P0.05),NSE含量在伤后24h达峰值(P0.05),然后缓慢下降。GCS评分与S-100B、NSE浓度呈负相关(分别为r=-0.814,P0.01;r=-0.726,P0.05)。结论颅脑损伤后血清S-100B蛋白、NSE水平升高,其与脑损伤程度有较好的相关性,2种标记物水平对颅脑损伤程度有较高的评估价值。     

解木聚糖类芽孢杆菌木葡聚糖酶的分离纯化及酶学性质研究

解木聚糖类芽孢杆菌(Paenibacillus xylanilyticus)发酵液经硫酸铵分级沉淀、HiPrep26/10 Desalting柱脱盐、HiPrepDEAE FF16/10阴离子交换柱、HiPrep 16/60 Sephacryl S-100凝胶柱、HiPrep 16/10 Source 30S阳离子交换柱等,最终纯化出单一组分的木葡聚糖酶,经过SDS-PAGE电泳分析,此木葡聚糖酶相对分子量约为39 kD。该菌所产木葡聚糖酶的最适反应温度是50℃,在60℃以下较稳定;最适反应pH是7.0,在pH5.0-10.0范围内酶活力较为稳定。酶的动力学研究显示Km为65 g/L,Vmax为6.49μmol/min,kcat=10.86 s-1。底物特异性研究表明对木葡聚糖具有较高比活力。酶蛋白经质谱分析,比对结果显示与来源于Paenibacillus pabuli的木葡聚糖酶有较高同源性。本研究为首次报道解木聚糖类芽孢杆菌(P.xylanilyticus)产木葡聚糖酶。     

外源亚精胺对不同盐浓度下黄瓜幼苗可溶性蛋白表达的影响

采用营养液水培的方法,以黄瓜品种‘津春2号’为试材,研究了叶片喷施外源亚精胺(Spd)对不同浓度NaCl(0、50、75、100 mmo.lL-1)胁迫下幼苗植株可溶性蛋白表达的影响。结果表明,50 mmol.L-1NaCl胁迫下植株叶片和根系中可溶性蛋白含量提高;75 mmol.L-1和100 mmol.L-1NaCl胁迫明显降低了幼苗植株叶片和根系中可溶性蛋白的含量。不同浓度NaCl胁迫下喷施Spd后可溶性蛋白含量在根系中没有明显变化规律,而叶片可溶性蛋白含量提高。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对黄瓜幼苗根系可溶性蛋白分析表明,至少有3种分子量约为61.5、50、47 kD蛋白在50 mmo.lL-1和75 mmol.L-1NaCl胁迫下表达量增强,但100 mmo.lL-1NaCl胁迫下变化不明显;50 mmol.L-1和75 mmol.L-1NaCl胁迫下喷施Spd后61.5 kD和47 kD蛋白表达量明显减弱,50 kD蛋白甚至消失,100 mmol.L-1NaCl胁迫下61.5 kD和47 kD蛋白无明显变化,50 kD蛋白反而增强。     

Hydrophobic chromatographic purification of ethylene-enhanced chlorophyllase from Citrus unshiu fruits

Ethylene-enhanced chlorophyllase from Citrus unshiu fruits was purified to a homogeneous state after solubilization with sodium cholate, using acetone precipitation and hydrophobic chromatography. The enzyme adhered to phenyl Sepharose CL-4B in 3M KCl and was eluted with a linear gradient of Triton X-100 (0–0.5%). Its MW (SDS-PAGE) was 27 000. The enzyme behaved as a protein of MW 110 000 on Sephacryl S-200 gel filtration. The enzyme showed a specific activity of 0.069 μamol chlorophyllide a produced/min/ mg protein. This purification procedure is a rapid method for obtaining pure chlorophyllase.     

粘虫核型多角体病毒包涵体蛋白的性质及其对几种肿瘤细胞生长的抑制作用

SDS-PAG电泳分析表明粘虫核型多角体病毒(Leucaia separata Nuclear Polyhedrosis Virus,简称LsNPV)的包涵体蛋白由几种多肽组成,其中分子量为32kD的主带为多角体的主要结构多肽。经Sephaceyl S-200柱层析纯化后分析了其氨基酸组成,证明此包涵体蛋白是一种以疏水氨基酸为主要组成的特异性蛋白。我们发现32kD蛋白对Hela、HLAMP、HICAM等三种肿瘤细胞的生长有不同程度的抑制,用~3H-TdR标记核酸合成代谢的Hela细胞的放射活性证实了这种观察。     

Molecular Weight and Subunit Composition of the Sensitive to GABA-Ergic Ligands Cl<Superscript>−</Superscript>/HCO<Stack><Subscript>3</Subscript><Superscript>−</Superscript></Stack>-Stimulated Mg<Superscript>2+</Superscript>-ATPase from Plasma Membrane of Rat Brain

The molecular weight and subunit composition of Cl-,HCO3(-)- and picrotoxin-stimulated Mg2+-ATPase from rat brain plasma membrane solubilized in sodium deoxycholate were studied by gel filtration chromatography. The enzyme activity eluted from a Sephacryl S-300 column in a single peak associated with a protein of molecular weight approximately 300 kD and a Stokes radius of 5.4 nm. The enzyme-enriched fraction, concentrated and denatured by SDS, migrated through a Sephacryl S-200 column as three peaks with molecular weights of approximately 57, 53, and 45 kD. SDS-PAGE also showed three major protein bands with molecular weights of about 57, 53, and 48 kD. The molecular weight and subunit composition of the Cl- and HCO3(-)-stimulated Mg2+-ATPase from neuronal membrane of rat brain are similar with the molecular properties of GABA(A)-benzodiazepine receptor complex from mammalian brain but are different from those of P-type transport ATPases.     

苏云金杆菌伴孢晶体的蛋白质和抗蛋白酶多肽及其毒力特性

以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了19种苏云金杆菌伴孢晶体的蛋白质和抗胰蛋白酶多肽。以鳞翅目的家蚕和双翅目的致倦库蚊进行了毒力测定。根据蛋白质和抗酶多肽的特性,19种晶体可分为7个类型。晶体蛋白质的组成、溶解特性及抗酶多肽的性质与其对两种昆虫的毒力特性密切相关。含分子量为130—138 kD(千道尔顿)或130—138 kD及60一65kD蛋白质,抗蛋白酶多肽(PRP)为68—75kD的晶体,对家蚕高毒,但绝大部分对库蚊无毒或微毒。含3种以上蛋白质(15一138kD),抗酶多肽为35—65kD的晶体,对库蚊有强烈毒性,对家蚕则无毒。缺少135kD蛋白质的两种晶体对家蚕低毒。HD一282和L—14晶体的P1蛋白质中同时含有杀鳞翅目和杀蚊毒素。讨论了伴孢晶体的蛋白质结构及结构与毒力之间的关系、晶体蛋白质及毒性肽的性质在菌株定向筛选和遗传工程研究中的意义。     

肾综合征出血热纯化疫苗的SDS-PAGE分析

为了证明蛑综合征出血热纯化疫苗的主要成分坦病毒蛋白,采用出血热纯化疫苗经浓缩后进行SDS－PAGE和Western-blotting分析。结果 经SDS－PAGE显示,肾综合征出血热纯化疫苗有三条蛋白带,分子量分别约为70kD、55kD和50kD,与汉坦病毒三种结构蛋白（糖蛋白G1、G2和核蛋白NP）的分子量相符;经Western-blotting显示,分子量50kD的蛋白带反应阳性,分子量70kD和55kD的蛋白带无反应,认定出血热纯化疫苗的主要成分为汉坦病毒蛋白,主要由G1、G2和NP三种结构蛋白构成。     

莲子贮存蛋白的主要亚基及积累模式

红莲（NelumbonuciferaGaertn）成熟于叶总蛋白含量达24．35g／100g干样品,其贮存蛋白（SP）的积累模式与豆科种子相似,即随成熟度的提高,SP猛增至占总蛋白含量的86％以上。对莲子不同发育阶段子叶蛋白SDS-PAGE图谱的光密度测定表明：莲子叶蛋白有12个主要SP亚基（SP1－12）。按分子量（MW）大小和积累顺序可分3组：A组是98kD和93kD的2个亚基,MW最大,积累最晚,但量最多;B组是3个亚基,MW为55－50kD,大小居中,积累最早,量最少;C组的7个亚基MW最小,在27－14kD之间,积累较早,量较多。对莲的不同品种、不同器官进行分析后发现,它们都有1个主峰为68kD的多连峰的代谢蛋白亚基,可能是莲共有的蛋白亚基。     

烟实夜蛾信息素结合蛋白3 cDNA的克隆、序列分析与原核表达

利用RT-PCR技术从烟实夜蛾Helicoverpa assulta (Hass) 雄虫触角中扩增得到了信息素结合蛋白3(Hass PBP3)。克隆和测序结果表明,该基因核苷酸序列全长495 bp,编码164个氨基酸残基,预测分子量18.5 kD。并预测N-末端疏水区包含由22个氨基酸组成的信号肽。因此,成熟蛋白应包括142个氨基酸,预测分子量为16.1 kD,等电点为5.44。经氨基酸序列同源性分析发现,此序列与已知昆虫PBP3有较高的同源性,而且具有气味结合蛋白的典型特征。将该基因重组到表达载体pGEX-4T-2中进行原核表达。经IPTG诱导、SDS-PAGE分析和Western印迹检测,结果表明烟实夜蛾PBP3基因能在大肠杆菌BL21中表达,电泳检测到一条大约42 kD的外源蛋白,与预测的融合蛋白分子量相符。     

Molecular weight of major component proteins in crude saline extract of adult Paragonimus westermani

When the component proteins in crude saline extract of 13-week old adult Paragonimus westermani were observed by non-denaturing discontinuous-polyacrylamide gel electrophoresis (Disc-PAGE), 8 distinct bands were clearly recognized. Molecular weight (MW) of each band protein, numbered in sequence from cathodal side which appeared in 10% separating gel, was measured first by Ferguson plot utilizing different gel concentrations from 10% to 4.5%. MW of band 1 protein (known as egg protein) was 440 kDa. And MW of other band proteins were: 386 kDa in band 2, 17.4 kDa in band 3, 17 kDa in band 4, 14.3 kDa in band 5, 46 kDa in band 6, 38 kDa in band 7 and 23 kDa in band 8. When the proteins in the crude extract were separated into fractions by molecular sieve chromatography through 1.6(phi) X 70 cm sized Sephacryl S-300 Superfine column and revisualized by Disc-PAGE in 8% gel, the sequence of eluted proteins was band 1, band 2, band 6, band 7 and bands 3, 4, 5 and 8. This elution profile confirmed MW of each band protein in the crude extract as measured by Ferguson plot.     

Cytosolic double-stranded RNA-dependent protein kinase is likely a dimer of partially phosphorylated Mr = 66,000 subunits.

The work described in this report suggests the existence of two biochemically distinguishable forms of the interferon-inducible, double-stranded RNA-dependent protein kinase. Kinase isolated from the cytosolic fraction (S-100) and the ribosome salt wash fraction of interferon-treated cells differed in their chromatographic properties. S-100 kinase eluted from a gel filtration column with M(r) = 140,000-160,000 and was predominantly anionic in nature, whereas ribosomal kinase eluted with M(r) = 66,000 and was predominantly cationic in nature. Purified preparations of S-100 kinase contained the M(r) = 66,000 subunit, P1, as the only polypeptide present in stoichiometric amounts, and thus the S-100 kinase appears to be a dimer of P1 subunits. Dimerization of the S-100 kinase was dependent on the phosphorylation state of the enzyme. Kinase isolated from S-100 was partially phosphorylated. Dephosphorylation of the S-100 kinase by treatment with alkaline phosphatase resulted in a monomeric form of the enzyme with biochemical characteristics similar to that of the ribosome salt wash kinase.     

小麦幼芽水分胁迫诱导蛋白的特征

水分胁迫（－1．2MPaPEG-6000）处理萌动的小麦种子,24h后诱导小麦幼芽产生41．5kD蛋白,其含量随着胁迫时间延长明显增加,48h时含量最高,到72h后不再变化。复水后,该蛋白消失;再胁迫48h时则又出现,其含量与处理24h时相当。41．5kD诱导蛋白主要位于细胞器膜上,细胞质中几乎不存在。41．5kD蛋白主要溶于10％NaCl提取液中,其等电点为pl5．65。该蛋白的氨基酸组成中,脯氨酸含量最高,其次为丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸,没有发现半胱氨酸和组氨酸。