人卵巢浆液性囊腺癌永生化细胞系BUPH∶OVCA-3的建立及其生物学特性

介绍人卵巢浆液性囊腺癌永生化细胞系的建立 ,研究其生物学特性 .以卵巢浆液性乳头状囊腺癌的腹水细胞为材料 ,进行体外培养 .将永生化基因———SV4 0T抗原基因转染第 2代细胞 ,得到永生化细胞系 .通过光学显微镜、生长曲线测定、染色体分析、双层软琼脂培养、裸鼠接种、免疫组化等 ,研究其生物学特性 ,并与其来源细胞的生物学特性进行比较 .建立了一株人卵巢浆液性囊腺癌永生化细胞系 ,命名为BUPH∶OVCA 3,现已传至 6 0余代 .其生物学特性为 ,细胞生长旺盛 ;具有人体恶性细胞的核型特征 ;细胞恶性度较低 ,不具有集落形成能力及裸鼠接种致瘤性 ;除较未永生化细胞生长速率增快 ,饱和密度增加外 ,仍保留上皮细胞的分化表型 .结果表明 ,BUPH∶OVCA 3为一株恶性度较低的人卵巢浆液性囊腺癌永生化细胞系 ,保留其来源细胞的生物学特性 ,可作为研究恶性度较低的卵巢上皮癌的体外模型     

肝细胞永生化策略研究进展

正常体细胞在细胞分裂过程中由于无法维持端粒的长度和染色体的稳定而衰老、死亡。建立基因稳定、无致瘤性的永生化细胞是永生化研究的目的所在。利用Cre-loxP系统构建的可恢复性永生化细胞可用于以细胞为基础的临床治疗。分化良好并具有肝脏正常合成代谢功能的永生化肝细胞在生物医学研究,尤其是在肝细胞移植、生物人工肝支持治疗以及药理学和毒理学研究方面具有广泛的应用前景。     

永生化后细胞的生物学特性

近年来,永生化细胞技术快速发展,对细胞生物学特性的研究及其临床应用具有深远的意义。目前通过导入永生化基因SV40抗原和hTERT基因成为细胞永生化的常用方法,但存在安全性隐患。利用可逆性永生化技术,使细胞在获得永生化能力的同时去除永生化基因,使细胞恢复到原始状态。文章综述了永生化后细胞生物学特性的变化,并讨论了临床应用可能面临的问题。     

定向诱导小鼠ES细胞为肝脏细胞及其凝血因子Ⅷ, Ⅸ的表达

凝血因子Ⅷ, Ⅸ缺陷导致血友病A和B的发生, 肝细胞是产生凝血因子的器官, 利用肝细胞进行替代治疗是纠正凝血因子缺陷的根本办法, 但是其来源及利用存在难以克服的问题. ES细胞具有体外培养时保持未分化状态和无限的增殖能力, 具有在一定条件下可以分化发育成各个胚层细胞的潜能, 利用ES细胞源性肝细胞作为供体细胞, 解决了肝细胞来源困难、增殖能力差的难题. 体外分阶段定向诱导E14小鼠ES细胞分化为肝细胞, ICG摄取及PAS反应结果证实ES源性细胞具备肝细胞功能, 在此基础上, 利用RT-PCR法对诱导细胞初步进行了凝血因子Ⅷ, Ⅸ表达分析, 为进一步开展利用ES细胞纠正凝血因子缺乏奠定了研究基础.     

细胞永生化技术及其应用研究进展

细胞永生化是目前细胞生物学研究的热点之一.引起细胞永生化的因素很多,其中端粒酶在这一过程中发挥重要作用.细胞永生化技术在未来的成功应用,不仅为生物制品的研究与开发提供了有力工具,而且也为疾病的诊断与治疗提出了新的思路.就细胞永生化技术的原理、方法、途径及其应用等方面研究进展作一综述.     

皮肤成纤维细胞永生化的研究进展

正常体细胞的生命周期都是有限的 ,经过一定数目的分裂后 ,会进入增殖抑制状态。永生化细胞是近年来生物科学探索较多的领域之一。因为它不仅能为细胞生物学的研究提供性状稳定的研究对象 ,还为人类实现器官再生开辟了新方向。所以皮肤成纤维细胞的永生化对于皮肤疾病以及皮肤组织工程的研究都具有非常深远的意义。就皮肤成纤维细胞的永生化的研究作一阐述 ,并讨论其应用前景和可能面临的问题     

丙型肝炎病毒 NS3 蛋白促进人源肝细胞的增殖及其相关机制研究

丙型肝炎病毒 (HCV) NS3 蛋白与肝癌细胞 (HCC) 的发生密切相关,但其机制尚不清楚 . 既往体外研究极少采用 HCV 的自然宿主细胞———人肝细胞作为研究体系,故所获研究结果有待进一步探讨和证实 . 构建了表达 HCV NS3 蛋白的真核质粒,通过稳定转染人源永生化肝细胞系 QSG7701 ,建立了稳定表达 HCV NS3 蛋白的人源永生化肝细胞系 QSG7701/NS3 ,以此为实验平台,检测了细胞增殖的变化,丝裂原蛋白激酶 (MAPK) 通路激酶磷酸化水平的改变及转录因子 AP-1 、 NF-κB 和 STAT3 的活性变化 . 结果表明： HCV NS3 蛋白可促进人源永生化肝细胞 QSG7701 的增殖, HCV NS3 蛋白激活 ERKs/AP-1 可能是其促进细胞增殖的重要机制,并通过上调转录因子 NF-κB 和 STAT3 的活性,诱导宿主细胞急性炎症损伤 .     

东方田鼠胚胎成纤维细胞永生化细胞系的建立

目的建立东方田鼠胚胎成纤维永生化细胞系,为全面研究东方田鼠抗日本血吸虫机制以及开展不同动物成纤维细胞间比较研究奠定基础和提供细胞实验材料。方法运用脂质体介导的基因转染法将pSV3neo质粒导入第3代东方田鼠胚胎成纤维细胞,经G418筛选抗性克隆并扩大培养,建立永生化细胞系;用PCR检测细胞株中SV40T基因的整合,RT-PCR鉴定SV40T基因在转染细胞中的表达;绘制东方田鼠胚胎成纤维永生化细胞生长曲线。结果阳性细胞克隆已扩大培养并稳定传代50代,经鉴定SV40T抗原已整合到东方田鼠胚胎成纤维细胞中且稳定表达。结论成功建立东方田鼠胚胎成纤维永生化细胞系。